杨宇航
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛病毒性腹泻—黏膜病病毒C_(24)V株E_0截短基因密码子优化及其在卡介苗中的表达被引量：2
- 2014年
- E0基因编码的蛋白是牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(BVDV)的主要保护性抗原之一,其是研制BVDV基因工程疫苗的候选者。E0基因在卡介苗中难以表达,已有研究结果表明E0蛋白具有RNase活性。根据卡介苗密码子使用频率分析E0基因,发现其有多个稀有密码子。通过对该基因截短和密码子优化,在卡介苗中表达E0基因,检测到了E0蛋白的抗原活性,为构建可同时预防结核和牛病毒性腹泻—黏膜病的二价基因工程疫苗奠定基础。
- 张云郝俊伟刘红娜王文玉杨宇航时坤李健明杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻E0基因密码子重组卡介苗
- 牛病毒性腹泻病毒E2截短基因重组卡介苗安全性和最佳免疫剂量的研究被引量：1
- 2014年
- 将6组BVDV-E2截短基因重组卡介苗用生理盐水稀释,分别进行革兰染色和伊红美蓝平板检测,6组重组卡介苗均无杂菌污染。再对6周龄～8周龄雄性豚鼠进行免疫接种,每只腹腔注射1mL（5×106 cfu/只）,免疫接种豚鼠无任何症状,精神、食欲、排便及发育等均不受影响,且无死亡,说明重组病毒对试验豚鼠是安全的。使用BVDV抗体检测试剂盒对60头健康牛的母源抗体含量进行检测,不含母源抗体占85.00%。取重组卡介苗中的一组,用生理盐水稀释,使重组卡介苗达到105、106、107、108、109 cfu/mL共5组,每组不含母源抗体的牛3头,免疫接种前对每头牛进行尾颈静脉采血,析出血清,用BVDV抗体检测试剂盒测牛血清中抗体水平。采完血后对牛进行皮下免疫接种,4周后,采取血液,检测牛血清中抗体水平。通过免疫接种后的检测结果可知,重组疫苗对牛最佳免疫剂量为108 cfu/mL,为进一步进行重组疫苗回归本动物的免疫效果研究提供了可靠依据。
- 杨宇航李晶张云郝俊伟刘东旭时坤李健明曾范利杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒重组卡介苗安全性
- 牛病毒性腹泻-黏膜病的流行现状和诊断技术研究进展被引量：5
- 2014年
- 牛病毒性腹泻-黏膜病是由黏膜病毒所致的一种接触性传染病,呈世界性分布,可引起牛慢性、急性和黏膜性感染,对牛、鹿、羊、马等产生严重的危害,严重阻碍我国乃至世界养殖业的发展。但到目前为止,国内外对该病尚无有效的治疗药物或治疗方法。本文对牛病毒性腹泻病的流行现状及现有诊断技术进行综述,为该病的预防和诊断提供参考。
- 李健明冯海峰时坤杨宇航张云杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻-粘膜病
- 6种BVDV-E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果分析
- 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（BVD-MDV)，属于黄病毒科，该病毒为单股正链RNA病毒，具有传染性，且有囊膜结构。该病是一种广为传播的世界性传染病，以消化道黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻为主要特征，可引起牛慢性，急性和黏膜病，...
- 杨宇航
- 关键词：重组卡介苗免疫效果
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究被引量：2
- 2014年
- 为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示在体液免疫方面,两组rBCG均从第7 d开始产生BVDV抗体,抗体水平逐渐上升,在42 d达到峰值,并且rBCG-pMV361-E2刺激所产生的抗体水平始终高于rBCG-pMV261-E2;而rBCG血清中的抗结核菌抗体水平与正常BCG无显著差异,与BVDV阳性对照组和阴性对照组之间则差异显著;在细胞免疫方面,与阴性对照组相比,两组rBCG与BVDV灭活苗相同,免疫实验兔后淋巴细胞对特异性刺激均有明显的增殖。表明两组rBCG免疫实验兔后均使其产生了体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研制BVDV新型基因工程疫苗奠定基础。
- 李健明杨宇航王慧慧曾范利时坤张妍刘菲杜锐
- 关键词：E2基因重组卡介苗
- 鹿布鲁菌分型实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2014年
- 鹿布鲁菌病主要是由牛型、羊型和猪型布鲁菌引起的,其他感染型少见,本研究依据布鲁菌的特异性基因BruAB20168、BMEII0466、BR0952上的部分高度保守片段设计猪型、牛型、羊型引物和探针,用于检测并区分鹿源布鲁菌的种型,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到pUC57载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布氏菌各分型荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线敏感性可知该方法的最低检测浓度分别可达到12、9、8copies/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
- 郝俊伟时坤曾范利李健明王文玉杨宇航刘红娜张云张秀丽杜锐
- 关键词：布鲁菌实时荧光定量PCR
- 水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达
- 2014年
- 利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L3 N3基因,构建克隆质粒pMD18-T-L1N1、pGEM-T-L2N2及pMD18-T-L3N3。经测序鉴定正确后,将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的3个NS1基因片段连接至经相同双酶切的pGEX-4T-1原核表达载体,并转化入表达宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明,成功构建了3段重组原核表达质粒pGEX-4T-L1N1、pGEX-4T-L2N2、pGEX-4T-L3N3,SDS-PAGE结果显示分别表达出大小约57、51、44ku的目的条带,与预期相符。Western blotting进一步证实获得的3种蛋白能被ADV阳性血清识别,具有反应原性。本试验首次对ADV NS1基因在大肠杆菌中进行分段表达,为后续研制ADV的亚单位疫苗奠定基础。
- 刘红娜王文玉张云杨宇航郝俊伟时坤李健明杜锐
- 关键词：大肠杆菌
- 细胞活力及细胞免疫力检测方法的研究进展被引量：3
- 2013年
- 随着人们生活水平的不断提高,肿瘤、癌症、药物敏感、免疫缺陷和病毒性感染病等恶性疾病也相继大量出现,而用于检测细胞活性及其免疫力的相关试验都将要求趋于快速、简捷和准确的特点。通过近年来国内外检测细胞活力及其免疫力的试验,作者对推知待测样品水平的方法,包括淋巴细胞转化试验、酶联免疫吸附试验、细胞毒性T细胞检测、白细胞介素12检测及流式细胞术等的研究概况进行综述。
- 杨宇航王文玉刘红娜刘东旭时坤李健明杜锐
- 关键词：酶联免疫吸附试验细胞毒性T细胞白细胞介素12流式细胞术
- 鹿布鲁氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 本研究依据布鲁氏菌的特异性基因Omp25c的部分片段作为靶基因,设计探针引物,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到PGEM-T载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线可知该方法的最低检测浓度可达到36拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
- 郝俊伟张云杨宇航刘红娜王文玉张秀丽时坤李建明杜锐
- 关键词：布鲁氏菌
- 应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果被引量：1
- 2014年
- 为评价牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果,用BVDV-E2截短基因重组卡介苗pMV361-E11、pMV361-E12、pMV361-E13、pMV361-E21、pMV361-E22、pMV361-E23及卡介苗、BVDV灭活苗和生理盐水对试验小鼠进行腹腔免疫,在三免后14d取其脾脏对T、B淋巴细胞、树突状细胞及Th1细胞等细胞因子进行流式细胞术检测,评价各重组卡介苗的免疫效果。结果显示,pMV361-E23重组卡介苗组中各细胞因子的表达量尽管有个别因子在同组中不是最高,但均高于同组生理盐水的表达量(除INF-γ检测中略低外);pMV361-E12组中IL-12的含量高达9.7。表明pMV361-E23和pMV361-E122组截短重组卡介苗免疫效果较好,为预防牛病毒性腹泻病以及新型疫苗的研制奠定基础。
- 杨宇航宋纪伟时坤曾范利李健明刘红娜王文玉郝俊伟刘东旭杜锐
- 关键词：重组卡介苗流式细胞术免疫效果
