张孝云
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Anti-CD19-Fab抗体的构建、表达及体外活性研究
- CD19分子是B淋巴细胞表面的一种分化抗原,仅在B淋巴系统恶性肿瘤中广泛表达,而在其它组织中不表达,因此,它是治疗B系淋巴瘤的一个重要靶点。本实验成功构建了表达载体pAYZanti-cd19-Fab，并且能够表达可溶性蛋...
- 姜琳琳张孝云张梦楠杨铭周圆朱惠芳范冬梅熊冬生
- 关键词：靶向性治疗体外活性
- 文献传递
- 基因工程抗体抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究被引量：5
- 2013年
- 目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定;采用流式细胞检测技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白与B淋巴瘤Raji细胞的结合活性;采用间接免疫荧光法,检测CD19介导细胞内化的情况;采用MTT法检测强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对CD19+Raji细胞的靶向杀伤活性;采用彗星电泳的方法,检测强化融合蛋白对Raji细胞DNA的损伤程度。结果用基因工程方法成功的构建、表达融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G亲和层析柱纯化后在SDS-PAGE上表现为相对分子质量约60 ku蛋白条带,且融合蛋白可与Raji细胞特异结合,并能介导细胞的内化;强化融合蛋白对Raji细胞具有较强的细胞毒性,并能引起细胞DNA损伤。结论强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM可以靶向作用于B淋巴瘤细胞,并具有较强的抗肿瘤活性,在恶性B淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。
- 姜琳琳张孝云马莉颜次慧齐怀丰熊冬生范冬梅
- 关键词：CD19力达霉素基因工程抗体DNA损伤
- miR-106b～25基因簇增强乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞相关耐药性被引量：3
- 2013年
- 目的探讨乳腺癌细胞中miR-106b～25基因簇过表达与肿瘤耐药形成及乳腺癌干细胞特性的关系。方法利用慢病毒表达载体,在乳腺癌细胞系MCF-7中建立稳定过表达miR-106b～25基因簇,建立MCF-7-mirC细胞系,观察细胞对化疗药物敏感性的改变。利用细胞毒性实验、耐药克隆形成实验、细胞衰老相关β-半乳糖苷酶染色对细胞的耐药状况进行评价;通过流式细胞术和实时定量PCR测定P-gp的表达;通过微球体(mammosphere)培养实验及对乙醛脱氢酶(ALDH1)活性的检测评价MCF-7-mirC肿瘤干细胞特性的变化。结果过表达miR-106b～25基因簇能帮助细胞更快脱离由阿霉素引起的细胞衰老状态,促进耐药克隆的生长。但是,miR-106b～25基因簇对P糖蛋白(P-gp)在mRNA和蛋白水平表达均无影响。对ALDH1的检测及mammo-sphere形成实验结果显示,过表达miR-106b～25基因簇能提高MCF-7细胞中肿瘤干细胞的比例。结论 miR-106b～25基因簇对乳腺癌MCF-7细胞耐药性的调控不依赖于P-gp表达,至少与促进肿瘤干细胞特性有关。
- 胡蕴慧盛梦瑶张孝云李双静范冬梅熊冬生周圆
- 关键词：乳腺癌肿瘤干细胞肿瘤耐药细胞衰老P糖蛋白
- Survivin小分子抑制剂的计算机虚拟筛选及初步活性研究
- 2013年
- 目的通过计算机虚拟筛选,寻找生存素(survivin)的小分子抑制剂,并对其活性进行初步研究。方法基于sur-vivin与其抑制性配体Smac/Diablo复合物的三维结构,用分子对接的方法对含有149,214个小分子的三维结构数据库进行筛选。通过初步活性测定确定活性较高的化合物,进一步研究其对凋亡,细胞周期及活性氧产生的影响。利用分子图像学方法分析化合物与survivin之间的作用模式。结果通过能量打分并根据结构多样性和类药性原则,最终选择了35个化合物进行初步活性测定,其中有9个化合物显示出明显的抑制活性,3个化合物的半数抑制浓度在30μmol.L-1以下。选择其中活性最高的化合物1-19进行进一步研究,结果显示小剂量的1-19能够促进细胞的早期凋亡,诱导细胞内活性氧产生,导致细胞发生S和G2/M期阻滞。分子图像学分析显示活性最高的1-19能够与survivin配体结合区的71位天门冬氨酸形成两个稳定的氢键。结论通过计算机辅助药物设计、药理活性测试以及分子图像学分析,初步确定了一个针对survivin的全新的先导化合物,为今后survivin小分子抑制剂的研究奠定了基础。
- 张孝云纪庆代晓华姜琳琳熊冬生周圆
- 关键词：生存素小分子抑制剂药物设计先导化合物
- 强化融合蛋白抗CD20（Fab）-力达霉素对淋巴瘤BJAB细胞增殖和DNA损伤的作用
- 2013年
- 目的研究强化融合蛋白抗CD20（Fab）．力达霉素（LDM）体外对CD20表达阳性的淋巴瘤细胞株BJAB增殖和DNA损伤的作用。方法流式细胞术检测融合蛋白抗CD20（Fab）-力达霉素辅基蛋白（LDP）与BJAB细胞的结合活性；激光共聚焦显微镜观察融合蛋白抗CD20（Fab）-LDP靶向结合BJAB细胞情况；M_rr法检测强化融合蛋白抗CD20（Fab）-LDM对BJAB细胞的生长抑制作用；单细胞凝胶电泳（SCGE）检测强化融合蛋白抗CD20（Fab）-LDM对DNA的损伤；流式技术检测强化融合蛋白抗CD20（Fab）-LDM诱导BJAB细胞的细胞周期的改变。结果融合蛋白抗CD20（Fab）-LDP与BJAB细胞结合活性为阳性；激光共聚焦显微镜下观察，融合蛋白抗CD20（Fab）．LDP靶向结合在BJAB细胞表面；强化融合蛋白抗CD20（Fab）．LDM作用于淋巴瘤BJAB细胞后，可以显著抑制BJAB细胞的生长，引起DNA损伤，诱导S期阻滞。结论强化融合蛋白抗CD20（Fab）-LDM可以靶向结合淋巴瘤BJAB细胞，并且具有显著的生长抑制作用，其作用机制是引起DNA的损伤。
- 袁翔姜琳琳曹善楠张孝云齐怀丰熊冬生廖晓龙
- 关键词：抗CD20抗体细胞周期阻滞
