张小梅
- 作品数：8 被引量：5H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 稳定表达绿色荧光蛋白的B16细胞株的建立及其生物学特性研究
- 2011年
- 目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的B16黑色素瘤细胞株,并研究其生物学特性。方法转染增强型绿色荧光蛋白基因入B16细胞,经G418联合单克隆培养,筛选阳性细胞。激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP阳性细胞形态;流式细胞仪检测细胞内EGFP基因的蛋白表达;RT-PCR检测EGFP基因的mRNA表达;皮下接种及MTT法评价细胞在体内外的生长特性。结果流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白的细胞阳性率为99.81%,RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA阳性表达。生长曲线显示其体外增殖趋势与B16相似,EGFP-B16体内成瘤速度较B16慢(p<0.05)。结论稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-B16细胞株成功建立,可作为进一步研究恶性黑色素瘤的材料。
- 张弘丁晓燕方廖琼王智彪乔海刘阳张小梅
- 关键词：稳定转染增强型绿色荧光蛋白基因
- 小鼠成纤维细胞饲养层的制备及C57BL/6小鼠胚胎干细胞系的建立被引量：2
- 2012年
- 目的:制备小鼠成纤维细胞饲养层并建立C57BL/6小鼠胚胎干细胞(ESC)系,为进一步建立人ESC系提供依据。方法:取妊娠12.5～14.5d的胎鼠,组织消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞(MEF);收集C57BL/6小鼠3.5d的囊胚培养于小鼠制作的饲养层上;分离内细胞团(ICM),扩增传代40代以上。观察ESC集落的生长情况。采用碱性磷酸酶(AKP)染色、免疫组织化学早期胚胎特异性表面抗原(SSEA-1)、八聚体结合转录因子4(OCT-4)染色和体内分化实验对ESC集落进行鉴定。结果:分离培养后得到的ESC可稳定传代至40代以上,且均呈集落样生长。经AKP、SSEA-1和OCT-4染色后ESC均呈红褐色阳性表达,接种于裸鼠均可形成畸胎瘤;HE染色,有3个胚层组织成分。结论:成功建立了C57BL/6小鼠ESC系。
- 张小梅方廖琼王智彪
- 关键词：胚胎成纤维细胞C57BL胚胎干细胞
- 小鼠胚胎干细胞对黑色素瘤细胞体外生物学行为的影响
- 2012年
- 探讨体外共培养环境中小鼠胚胎干细胞对小鼠黑色素瘤B16细胞的影响。建立C57BL/6小鼠胚胎干细胞系,通过小鼠胚胎干细胞与肿瘤细胞体外共培养模型观察小鼠胚胎干细胞对肿瘤细胞的形态及生长行为的影响,MTT法与transwell小室法分别检测共培养后肿瘤细胞粘附性、迁移性及侵袭性的变化。共培养中小鼠胚胎干细胞能够侵入并推开小鼠黑色素瘤细胞形成自己的生长空间,与对照组比较共培养后肿瘤细胞的粘附性、迁移性及侵袭性均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结果表明体外共培养体系中小鼠胚胎干细胞能够侵袭肿瘤细胞,并降低细胞粘附、迁移及侵袭相关恶性生物学行为。
- 张小梅方廖琼王智彪
- 关键词：共培养迁移
- siRNA联合沉默MMP-9和FAK基因对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭和迁移的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:观察双基因联合干扰MMP-9和FAK对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭、迁移能力的影响。方法:分别构建pGV102-MMP9-siRNA,pGV102-FAK-siRNA重组质粒载体,脂质体^(TM)2000介导转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞,实验分为空白对照组、Anti-MMP-9组,AntiFAK组、Anti-MMP-9&FAK组、阴性对照组。经G418筛选GFP+克隆,流式细胞仪分析阳性率,激光共聚焦观察转染后细胞形态,半定量RT-PCR检测各组B16F10细胞MMP-9和FAK基因的mRNA转录水平,Transwell侵袭、迁移实验测定各组B16F10细胞体外侵袭、迁移能力。结果:经G418筛选,3个转染组阳性率分别为92.41±1.64%,95.72±0.21%,91.52±0.11%,且转染后细胞形态良好;与空白对照组相比,3个转染组的MMP-9,FAK mRNA转录水平下降明显(P<0.01),迁移、侵袭能力明显降低(P<0.01),但Anti-MMP-9&FAK组细胞侵袭迁移能力显著低于Anti-MMP-9组和Anti-FAK组(P<0.01)。结论:相比单独沉默MMP-9或FAK,联合沉默MMP-9和FAK可明显降低小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外迁移、侵袭能力。
- 汤禾静唐照勇刘隆兴张小梅王祎婷方廖琼
- 关键词：MMP-9FAK黑色素瘤
- USP18对不同干扰素抗HBV的影响及可能机制
- 目的:慢性乙型肝炎是全球关注的健康问题,泛素特异性蛋白酶18属于干扰素刺激基因,本研究旨在探讨USP18对Ⅰ型干扰素（IFNα）及Ⅲ型干扰素（IFNλ）抗HBV的影响及其相关机制。方法:将HepG2.2.15细胞随机分为...
- 张小梅
- 关键词：乙型肝炎病毒干扰素Α
- 小鼠胚胎对人卵巢癌细胞生物学行为影响的体外研究
- 2010年
- 探讨体外共培养环境中小鼠胚胎对人卵巢癌细胞HO8910PM的影响.通过小鼠胚胎与肿瘤细胞体外共培养模型观察小鼠胚胎对肿瘤细胞的形态及生长行为的影响,Annexin V-EGFP/PI原位检测与小鼠胚胎共培养后肿瘤细胞的凋亡情况,MTT粘附实验、transwell迁移及侵袭实验研究与小鼠胚胎共培养后的人卵巢癌细胞的粘附性、迁移性及侵袭性的变化.共培养时小鼠胚胎能够侵入人卵巢癌细胞并推开肿瘤细胞形成自己的生长空间,激光共聚焦显微镜下见胚胎周围的肿瘤细胞凋亡增加,与对照组比较共培养后的HO8910PM肿瘤细胞的粘附性、迁移性及侵袭性均显著降低(P<0.05、P<0.01).结果表明体外共培养体系中小鼠胚胎能够侵袭肿瘤细胞,促进人卵巢癌细胞的凋亡,并使其粘附性、迁移及侵袭相关恶性行为降低.
- 丁晓燕张弘方廖琼乔海刘阳张小梅王智彪
- 关键词：共培养凋亡
- 荧光标记人卵巢癌细胞株的建立
- 2012年
- 目的建立稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人卵巢癌细胞株。方法采用基因转染的方法,将EGFP基因导入人卵巢癌细胞HO8910PM中,通过G418筛选、亚克隆扩增获得稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-HO8910PM细胞株,并用流式细胞术检测所获细胞株的EGFP表达率,通过细胞生长曲线、黏附实验、侵袭迁移实验比较EGFP-HO8910PM细胞和HO8910PM细胞的生物学行为。结果筛选出的EGFP-HO8910PM细胞经流式细胞仪检测EGFP阳性表达率达99%以上,EGFP-HO8910PM细胞和HO8910PM细胞生长、黏附及侵袭迁移能力无统计学差异。结论成功建立了稳定表达EGFP且保持母株细胞特性的人卵巢癌细胞株EGFP-HO8910PM,为人卵巢癌整体活体应用中可视化研究打下基础。
- 张小梅方廖琼王智彪
- 关键词：卵巢肿瘤绿色荧光蛋白质类转染
- 小鼠胚胎干细胞与黑色素瘤B16细胞体外相互作用的初步研究
- 恶性肿瘤是增殖失控和异常分化的细胞集合体，其生物学行为与早期胚胎发育的生命过程极为相似。转移性癌细胞类似于干细胞，它们同时表现自我更新和相似的细胞分子标志，显示两种细胞类型都有一个基本的可塑性。 如果将两种极为类似的细胞...
- 张小梅
- 关键词：饲养层胚胎干细胞共培养迁移
- 文献传递
