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牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体的制备: 2015年; 目的制备牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)单克隆抗体(m Ab),并对其特异性进行初步鉴定。方法构建含PEPCK基因的重组质粒,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达,对表达产物PEPCK重组蛋白进行纯化,以PEPCK重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞,用间接ELISA筛选阳性克隆,获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的细胞株,并用Western blot法,免疫组织化学染色和免疫沉淀鉴定其特异性。结果成功获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的杂交瘤细胞株。Western blot法、免疫组织化学和免疫沉淀结果表明,该抗体能与牛PEPCK蛋白特异性结合。结论成功获得抗牛PEPCK m Ab。; 盛美蕾张晓张纬张燕飞王盈戴一凡; 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体杂交瘤

用于异种移植的新型基因改造猪的培育被引量：1: 2014年; 目的培育用于异种移植的新型基因改造猪,在α-Gal基因敲除以及膜辅蛋白CD46、血栓调节蛋白(TM)基因转入的基础上,进一步将Ⅱ类反式激活因子基因N端缺失显性负向(CⅡTA-DN)基因转入猪胎儿成纤维细胞,以抑制猪白细胞抗原(SLA)Ⅱ类分子的表达。方法设计合成博来霉素(Zeocin)抗性基因片段,并将其与含有CⅡTA-DN基因的pST205载体连接,构建置于人Tie2增强子和CMVβ-actin启动子下游的pNMU105/CⅡTA-DN表达载体,将线性化的pNMU105通过脂质体转染法转入已经敲除了α-Gal并转入CD46、TM基因的猪胎儿成纤维细胞181B(DKO/CD46/TM)。Zeocin抗性筛选转染pNMU105质粒的181B细胞,PCR方法检测CⅡTA-DN基因在181B细胞中的转入,获得阳性单克隆并进行核移植,得到DKO/CD46/TM/CⅡTA-DN转基因猪。取仔猪的耳缘组织裂解后进行基因鉴定。结果成功设计Zeocin抗性基因片段并构建pNMU105/CⅡTA-DN表达载体,经过质粒转染和Zeocin抗性药物筛选获得多株阳性单克隆,顺利通过核移植得到转基因猪。仔猪耳缘组织经PCR鉴定,在592 bp位置检测到预期条带,证明均为CⅡTA-DN转基因阳性。结论通过新型基因改造猪的培育,在抑制超急性排斥反应和补体反应、降低凝血和人CD4+T细胞免疫反应的理论基础上进行了转基因模型猪的构建,为异种移植中更加有效地减少免疫损伤、提高移植器官的存活做出了新的尝试。; 李倩坤王盈张曼玲杨海元程俊霖赵丽华任子健陈凤娇万振昆张纬李荣凤戴一凡; 关键词：异种移植

利用CRISPR/Cas9技术构建C3基因敲除猪模型和稳定表达红色荧光蛋白的人胚胎干细胞系的建立: 第一部分应用CRISPR/Cas9技术构建C3基因敲除猪模型　　研究背景：　　补体系统是免疫系统中重要的组成部分，它包含了30多种可溶性蛋白和膜蛋白，其活化过程为一系列的级联酶解反应。补体系统参与机体的特异性和非特异性免...; 张纬; 关键词：人胚胎干细胞红色荧光蛋白体细胞核移植; 文献传递

稳定表达红色荧光蛋白的人胚胎干细胞系的建立被引量：1: 2016年; 目的 :建立可以稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)系。方法:优化核转染方法后,将RFP表达载体p EF1α-Ds Red-Express2导入h ESCs中。利用碱性磷酸酶染色、RT-PCR、免疫荧光染色和类胚体形等方法,比较核转染前后h ESCs的干细胞特性。结果:核转染后h ESCs的碱性磷酸酶染色结果为阳性。核转染前后h ESCs的Oct4、Sox2、Klf4、Nanog基因的表达未出现明显差异。RFP-h ESCs具有三胚层分化潜能,并且可稳定传30代以上。结论:成功建立稳定表达红色荧光蛋白的h ESCs,干细胞特性不受RFP的影响,可用于后续的实验研究。; 胡菲菲张纬欧阳琦王荣根李泽王冠王盈杨海元戴一凡; 关键词：人胚胎干细胞红色荧光蛋白

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张纬

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