张雪燕
- 作品数：21 被引量：50H指数：4
- 供职机构：兰州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金甘肃省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 抗菌肽2IQ3及其突变体的原核表达与纯化
- 2015年
- 目的将抗菌肽2IQ3及其突变体基因进行原核表达,经纯化获得目的蛋白。方法根据2IQ3氨基酸序列及大肠杆菌偏爱密码原则设计并合成2IQ3基因编码的核苷酸片段,采用重叠延伸聚合酶链反应法扩增抗菌肽2IQ3及突变体基因,克隆至载体p ET-28a(+)中,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21中,经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达,分析重组蛋白的表达形式,纯化重组蛋白。结果构建的抗菌肽2IQ3及其突变体基因所表达的重组蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,有特异性目的条带出现,纯化的重组蛋白纯度达97%左右,浓度为0.502 mg/m L。结论成功构建了抗菌肽2IQ3及其突变体基因的原核表达体系,并在大肠杆菌中进行表达、纯化,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。
- 马驰王玉平谢俊秋张雪燕徐攀杜振亚倪天治马如超韩跃武
- 关键词：抗菌肽突变体大肠杆菌纯化
- 诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器的研究被引量：2
- 2012年
- 目的建立一种检测慢性粒细胞白血病的方法。方法此实验在已经筛选出慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞5个特异性、结合率较高的核酸适体的基础上,构建了一种检测方法:采用两种纳米金属材料分别标记5个适体,将标记后的10个适体,两两组合与CML K562同时结合,一个作为捕获分子,一个作为测定分子与CML K562结合后,经氧化还原反应将测定分子上的金属转化成离子状态,利用电化学工作站检测对应的电流。结果筛选出了最佳组合(P2-S3-P1-S5)实现对CML K562的检测,得到了检测细胞数目与DPV电流值的拟合曲线方程。结论得到一种检测下限可达到50个细胞的诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器。
- 刘文伟张雪燕习静韩跃武
- 关键词：核酸适体纳米材料电化学生物传感器
- 牛乳铁蛋白十肽的基因改造、克隆及表达被引量：3
- 2008年
- 目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟胺裂解位点,通过连接获得其二拷贝基因同向串联体。分别将该串联体克隆至载体pUC18上,经双酶切、PCR及测序鉴定后,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,用凝血酶切割及羟胺裂解。结果获得了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2二拷贝基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出相对分子质量约29000的目的蛋白条带,纯化后的蛋白经凝血酶切割后,相对分子质量约29000的目的蛋白条带消失。结论已成功克隆并表达了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,为基因工程抗真菌肽的制备奠定了基础。
- 姚海燕韩跃武张雪燕谢俊秋
- 关键词：抗真菌肽基因改造基因克隆
- 早期胃癌中原代细胞ssDNA适配子检测的临床意义被引量：1
- 2014年
- 目的探讨早期胃癌中原代细胞ssDNA适配子检测的临床意义。方法对5个标志物应用适配子-生物素-链霉亲和素磁珠分离系统进行分离、纯化及鉴定,筛选出特异性、灵敏度高的肿瘤标志物,并对其建立相应的检测方法,采用美国临床实验室标准化组织的相关标准对其检测方法进行临床评价,并参考《临床检验方法学评价》对其诊断性能进行分析。结果早期胃癌中原代细胞ssDNA适配子的检测敏感性为49.13%,特异性为91.44%,阳性似然比为5.74,阴性似然比为0.56 g,干扰实验51.8%,验前比65.7%,验后比197.2%。与金标准相比,在敏感性、特异性、准确度和精确度方面均无明显差异(P>0.05)。结论早期胃癌中原代细胞ssDNA适配子的检测,具有较高的灵敏度和较强的特异性,为早期胃癌的发现提供依据,可考虑作为早期胃癌的辅助诊断标准之一。
- 徐攀马驰张雪燕杨晓娟蒋丹聂登梅刘昕韩跃武
- 关键词：胃腺癌原代细胞适配子
- 早期胃腺癌原代细胞适配子的筛选与鉴定被引量：2
- 2013年
- 胃腺癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,由于没有针对早期胃腺癌有效的诊断方法,目前胃腺癌手术治疗还主要针对中晚期患者,预后差.本文应用cell-SELEX技术,筛选早期胃腺癌原代细胞的适配子,为早期胃腺癌的诊断提供新的思路.从早期胃腺癌组织中分离得到早期胃腺癌原代细胞,应用体外合成全长88 bp中间含52 bp随机序列的单链DNA文库,通过对PCR扩增条件的优化,借助生物素-链霉亲和素磁珠系统,经cell-SELEX反复筛选,可获得针对早期胃腺癌原代细胞的特异性适配子.经12轮cell-SELEX筛选,ssDNA文库与早期胃腺癌原代细胞的亲和力由1 560上升到4 336,表明亲和力较高的适配子得到逐步富集.经克隆和测序,应用软件分析可知,30个克隆子中编号为C17和C27的2个序列完全一致,具同源性,二级结构预测可知单链DNA形成不同的茎环结构可能是适配子与早期胃腺癌原代细胞作用的结构基础.特异性分析显示,胃腺癌原代细胞组与正常胃粘膜上皮细胞、空白对照组之间荧光强度值差异非常显著(P<0.01);正常胃粘膜上皮细胞组与空白对照组之间差异不显著(P>0.05).经亲和力测定,各适配子与早期胃腺癌原代细胞的解离系数达到nmol/L,具有很高的亲和力.利用cell-SELEX技术成功筛选到早期胃腺癌原代细胞的适配子,为胃腺癌的早期诊断与治疗药物靶点方面的研究奠定了实验基础.
- 郭鹏习静张雪燕姚海燕马驰马鑫杨敏冯慧婷侯纯荣徐先云韩跃武
- 关键词：胃肿瘤腺癌适配子
- 临床生物化学检验技术课程中PBL+CBL教学案例的编写被引量：10
- 2020年
- “问题”结合“案例”的教学方法(PBL+CBL)具有研讨性、启发性和灵活性的优势,是激发学生学习兴趣、理论联系实践的一种有效教学方法。案例质量是PBL+CBL教学效果的决定性因素之一。在“临床生物化学检验技术”课程案例的编写过程中要明确教学目标,统筹学生已有知识架构,遵循由浅入深、循序渐进及学多深设计多深的原则。
- 张雪燕姚海燕郝春燕陈卫
- 关键词：PBLCBL教案
- 慢性粒细胞白血病ssDNA适配子PCR扩增条件的优化
- 2013年
- 目的优化慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)ssDNA适配子的PCR扩增条件。方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物,根据引物解链温度(Tm值)设置不同的退火温度(38.0、39.2、41.2、44.2、48.3、51.5、53.6、55.0℃)、循环次数(12、16、20、24、28、30、35、38、40)及非限制性与限制性引物比例(1∶1、30∶1、50∶1、70∶1、80∶1、100∶1),进行PCR扩增,优化CML ssDNA适配子对称PCR及间接不对称PCR扩增条件,并验证优化的PCR条件的重复性。结果对称PCR扩增的最佳退火温度为44.2℃,最佳循环次数为30次;间接不对称PCR的最佳循环次数为38次,非限制性引物与限制性引物浓度比例为50∶1时,可获得理想的ssDNA和较少的dsDNA;优化的PCR条件重复性较好。结论优化了CML ssDNA适配子的PCR扩增条件,为筛选到特异性的ssDNA适配子提供了参考,也为后续试验奠定了基础。
- 习静郭鹏韩跃武刘文伟张雪燕
- 关键词：慢性粒细胞白血病聚合酶链反应
- 早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子及制备方法
- 本发明公开一种早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子及制备方法。本发明的早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子的基因序列分别为：SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5。...
- 韩跃武徐攀邵明洋杜振亚张雪燕姚海燕马驰
- 文献传递
- 人颗粒溶素活性片段原核表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建人颗粒溶素(GNLY)活性片段原核表达载体。方法采用RT-PCR技术从健康人外周单个核细胞中扩增出颗粒溶素活性片段cDNA,将其与表达载体pGEX-4T-1经限制性核酸内切酶双酶切后连接,转化E.coliBL21,挑取阳性菌落,抽提重组质粒并鉴定。IPTG诱导表达GST融合蛋白,亲和层析纯化,SDS-PAGE分析表达和纯化结果,抑菌圈法鉴定表达产物的活性。结果重组质粒插入基因序列测定证实为颗粒溶素活性片段cDNA。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量29000处出现一明显条带,与理论结果相符。抑菌试验表明,融合蛋白分子凝血酶切产物对革兰阳性的金黄色葡萄球菌ATCC25938有抑制作用。结论已成功构建了人颗粒溶素活性片段原核表达载体,为进一步研究其抗菌、抗肿瘤作用奠定了基础。
- 张雪燕韩跃武姚海燕谢俊秋张庆华
- 关键词：活性片段原核表达
- 核酸适体电化学生物传感器的研究进展被引量：2
- 2010年
- 核酸适体(aptamer)是一种体外筛选,功能类似于单克隆抗体的,能与靶物质高特异性、高亲和力结合的寡核苷酸片段。因其具有诸多优于抗体的特点,已被广泛应用到生物传感器领域。而电化学检测技术因其具有选择性好、灵敏度高,以及快速、简单、测试费用低和易于联机化等优点而在适体传感器的发展中占有重要的地位。本研究依据电化学适体传感器的构建原理中DNA链的数量和结构,对近几年电化学适体传感器的研究发展做一综述,包括单链核酸物质体系构建的核酸适体电化学传感器、双螺旋结构的核酸物质体系构建的核酸适体电化学传感器和两条单链核酸物质体系构建的核酸适体电化学传感器。
- 刘文伟韩跃武张雪燕查成喜
- 关键词：核酸适体电化学生物传感器
