徐言
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 供职机构：南京医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅科研基金卫生部科学研究基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。
- 詹峰曾晓燕张晓周顺徐言张建平焦永军
- 关键词：GDF15单克隆抗体HCC
- 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及初步应用被引量：11
- 2012年
- 目的制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核衣壳蛋白(NP)的单克隆抗体,并探讨其在该病诊断中的作用。方法克隆NP基因,构建原核表达载体pComb3XSS-NP,并转化大肠杆菌Top10F′,经诱导表达,纯化获得6HIS-NP融合蛋白。以该融合蛋白免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备NP的鼠源单克隆抗体。经鉴定后,选择1株1C8-C6进行大量制备、纯化,并偶联辣根过氧化物酶(HRP),用该酶标抗体对SFTSV感染人的急性期血清进行Western blot检测。结果成功表达、纯化SFTSV重组的NP。经小鼠免疫、细胞融合和ELISA筛选后,共获得4株鼠源单克隆抗体。具较高滴度的1C8-C6酶标抗体能与SFTSV感染人的急性期血清中的NP在Western blot水平上结合,而与汉坦病毒、登革热病毒感染人急性期血清及正常人血清不反应。结论 SFTSV NP的表达及其单抗的制备为该病的实验室诊断奠定了基础。
- 徐言曾晓燕焦永军张国强张黎罗兰金秋张建平史智扬
- 结缔组织生长因子ELISA定量检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2011年
- 目的:建立定量检测人结缔组织生长因子(CTGF)双抗体夹心ELISA方法,并应用此方法检测人血清中CTGF含量。方法:利用简易过碘酸钠法对纯化的抗CTGF单克隆抗体(mAbs)进行HRP标记后,行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法。用该方法初步对正常人、HBsAg阳性非肝癌患者及HBsAg阳性肝癌患者血清中的CTGF水平进行检测。结果:最佳配对组合为抗CTGFmAb3H5和HRP标记的抗CTGFmAb4C5,最适工作浓度分别为40μg/ml和1/4000,该方法的平均批内、批间变异系数分别为4.59%和5.70%,灵敏度达1.46 ng/ml,平均回收率为(98.73±4.84)%。用本方法测定35例HBsAg阳性肝癌患者、76例HBsAg阳性非肝癌患者和40例正常人血清CTGF水平,与正常对照组[2.65(2.16～3.18)ng/ml]比较,HBsAg阳性非肝癌组[5.53(2.74～8.23)ng/ml]和HBsAg阳性肝癌组[8.27(4.81±13.65)ng/ml]血清CTGF水平均显著升高(P<0.001);且HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阳性非肝癌组比较也明显升高(P=0.014)。结论:建立了一种可用于检测人CTGF的双抗体夹心ELISA方法。初步应用结果表明CTGF水平在HBsAg阳性肝癌患者血清中较HBsAg阳性非肝癌患者、正常人异常升高,提示CTGF分子有望成为HBsAg阳性肝癌早期预警标志物。
- 詹峰曾晓燕张晓徐言张建平焦永军
- 关键词：肝细胞性肝癌结缔组织生长因子ELISA标志物
- 抗高尔基体蛋白GP73单克隆抗体的制备及初步应用
- 目的 肝细胞性肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，全球每年新发肝癌病例约56万，我国占1/2以上。手术切除目前仍然是肝癌的主要治...
- 徐言
- 关键词：GP73单克隆抗体肝细胞性肝癌酶联免疫吸附测定肿瘤标志物
- 文献传递
- 人高尔基体蛋白GP73基因的克隆、表达、单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是新近发现的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要血清学标志物。通过克隆、表达人GP73,制备抗GP73单克隆抗体并鉴定其特性。方法:克隆GP73基因,构建GP73原核表达载体pComb3XSS-GP73,诱导表达,以HisFF Trap亲和层析柱纯化GP73-6×His重组融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗GP73单克隆抗体。以间接法ELISA检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测肝癌患者血清中GP73表达水平。结果:成功表达并纯化了GP73-6×His重组蛋白;获得5株稳定分泌抗人GP73单克隆抗体杂交瘤细胞株;免疫共沉淀证实抗GP73单克隆抗体能与肝癌患者血清中GP73蛋白特异性结合,GP73水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GP73单克隆抗体,为后期建立检测人GP73的双抗体夹心ELISA方法打下基础。
- 徐言曾晓燕张晓金秋张建平焦永军
- 关键词：GP73单克隆抗体肝细胞性肝癌肿瘤标志物
- H5N1型禽流感病毒广谱中和单克隆抗体的筛选及其中和机制初步研究被引量：3
- 2011年
- 利用杆状病毒-昆虫细胞表达H5N1型禽流感病毒的血凝素蛋白(HA),纯化后的重组蛋白HA免疫小鼠并制备杂交瘤单克隆抗体,用H5N1型禽流感病毒的全病毒进行筛选,成功地获得了抗H5N1型禽流感病毒血凝素蛋白HA的单抗.MDCK细胞微量中和试验表明,单抗8G10D7可对clade2和clade9的H5N1型禽流感病毒起中和作用.Western-blot及血凝抑制实验进一步证明了该单抗的结合位点位于HA蛋白的HA1亚基上.鸡胚感染病毒预防试验结果表明,8G10D7对禽来源的和人来源的H5N1型禽流感病毒均可达到100%的保护率;在治疗试验组中,8G10D7对禽来源的病毒感染具有较高的保护率,可达100%,对人来源的H5N1型禽流感病毒最高也可达87.5%的保护率.该抗体的获得不仅为H5N1型高致病性禽流感病毒的预防和治疗带来了希望,同时其中和位点的发现也为以后亚单位疫苗的研制提供新的思路.
- 张晓曾晓燕刘哲金秋徐言冯振卿焦永军
- 关键词：H5N1型禽流感病毒单克隆抗体血凝抑制
- H5N1高致病性禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的:扩增高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因,并进行真核表达。方法:抽提毒株A/Jiangsu/08-6基因组RNA,反转录为cDNA,用特异性引物扩增HA基因。HA经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆到pFastBac-GP67B载体上,筛选出阳性重组转座质粒pFastBac-GP67B-HA,并将其进一步转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定后,获得重组穿梭载体(rBacmid-HA),再通过CellfectinⅡ试剂转染rBacmid-HA至对数生长期的sf9昆虫细胞,进行目的蛋白的真核表达。分别用SDS-PAGE、Western blot、血凝试验以及质谱分析对其进行鉴定。结果:HA基因在sf9细胞表达的蛋白分子量约70 000。血凝试验表明重组HA蛋白可使鸡红细胞发生凝集。质谱分析鉴定该重组蛋白为HA蛋白。结论:重组HA蛋白具有天然HA蛋白的活性,为亚单位疫苗的研制及中和抗体的筛选奠定了基础。
- 金秋刘哲陆敏华戴望舒徐言张晓曾晓燕冯振卿焦永军
- 关键词：H5N1型禽流感病毒血凝素血凝试验
- 高尔基蛋白73(GP73)ELISA定量检测方法的建立及临床应用
- 2013年
- 目的建立双抗体夹心ELISA定量检测人血清高尔基蛋白73(GP73)的方法,并用于检测血清GP73含量。方法利用杂交瘤法制备纯化的抗GP73单克隆抗体(mAb)进行辣根过氧化物酶(HRP)标记后,通过棋盘滴定法确定包被抗体和酶标抗体及其最适工作浓度;以重组人的GP73抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法。应用该ELISA法对正常人、肝炎、肝硬化及肝癌患者血清中的GP73水平进行定量检测。结果当抗GP73 mAb3D5A10和7H3F5分别为捕获抗体和酶标抗体、工作浓度分别为40μg/ml和1∶4000时,双抗体夹心ELISA法最优。该方法的平均批内和批间变异系数分别为4.6%和7.6%,灵敏度达3.76ng/ml,平均回收率为(102.2±5)%。用本方法重复测定肝癌(33例)、肝硬化(28例)、乙型肝炎(44例)及正常人(44例)血清样本中GP73浓度(中位数)分别为25.9、27.6、16.7、9.9μg/L;除肝癌与肝硬化组间差异无统计学意义外,其余各组间均有统计学差异(P<0.05)。结论成功建立了双抗体夹心ELISA定量检测GP73的方法。检测血清GP73可作为诊断肝脏疾病的重要辅助手段之一。
- 周云包林徐言金秋张黎张建平焦永军
- 关键词：原发性肝癌双抗体夹心ELISA
