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张晓: 作品数：20 被引量：20H指数：3; 供职机构：南京医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金卫生部科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用: 抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用，轻链的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示，重链的氨基酸序列如SEQIDNo:2所示；轻链的核苷酸序列如SEQIDNo:3所示，重链的核苷酸序列如SEQIDNo:4所...; 任勇亚杜丽坚任政张晓李红冯振卿

狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析被引量：2: 2015年; 目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。; 王晓蕾陈芳芳袁伟钱国强耿以如张晓杨瑾熊四平陈雅唐奇仇镇宁冯振卿朱进; 关键词：狂犬病病毒狂犬病病毒糖蛋白纯化抗体

LBL结合PBL在医学院校细胞工程课程中的应用被引量：2: 2014年; 细胞工程是一门理论与实践相结合的学科,已成为医学院校生物技术、生物科学等相关专业的必修课程。在医学院校细胞工程教学中,于传统LBL教学模式基础上引入PBL教学模式,为细胞工程课程教学探索出一条PBL与LBL相结合的教学模式道路,以期提高教学质量和医学生的综合素质。; 张晓曹新冯振卿丁贵鹏; 关键词：细胞工程生物技术

结缔组织生长因子ELISA定量检测方法的建立及初步应用被引量：1: 2011年; 目的:建立定量检测人结缔组织生长因子(CTGF)双抗体夹心ELISA方法,并应用此方法检测人血清中CTGF含量。方法:利用简易过碘酸钠法对纯化的抗CTGF单克隆抗体(mAbs)进行HRP标记后,行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法。用该方法初步对正常人、HBsAg阳性非肝癌患者及HBsAg阳性肝癌患者血清中的CTGF水平进行检测。结果:最佳配对组合为抗CTGFmAb3H5和HRP标记的抗CTGFmAb4C5,最适工作浓度分别为40μg/ml和1/4000,该方法的平均批内、批间变异系数分别为4.59%和5.70%,灵敏度达1.46 ng/ml,平均回收率为(98.73±4.84)%。用本方法测定35例HBsAg阳性肝癌患者、76例HBsAg阳性非肝癌患者和40例正常人血清CTGF水平,与正常对照组[2.65(2.16～3.18)ng/ml]比较,HBsAg阳性非肝癌组[5.53(2.74～8.23)ng/ml]和HBsAg阳性肝癌组[8.27(4.81±13.65)ng/ml]血清CTGF水平均显著升高(P<0.001);且HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阳性非肝癌组比较也明显升高(P=0.014)。结论:建立了一种可用于检测人CTGF的双抗体夹心ELISA方法。初步应用结果表明CTGF水平在HBsAg阳性肝癌患者血清中较HBsAg阳性非肝癌患者、正常人异常升高,提示CTGF分子有望成为HBsAg阳性肝癌早期预警标志物。; 詹峰曾晓燕张晓徐言张建平焦永军; 关键词：肝细胞性肝癌结缔组织生长因子 ELISA 标志物

HSP70与TNF-α在甲状腺癌组织中的表达及其与临床病理分期关系的研究被引量：2: 2013年; 目的:探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)在甲状腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR以及Western blot技术检测对比40例甲状腺癌组织、20例甲状腺良性病变组织以及15例正常甲状腺组织中HSP70、TNF-α的表达情况,并分析HSP70表达水平与甲状腺癌临床病理学特征的关系。结果:3组人群组织中HSP70 mRNA水平比较差异有统计学意义(P<0.001),甲状腺癌组织中HSP70 mRNA水平显著高于正常甲状腺组织以及甲状腺良性病变组织(P均<0.05);HSP70 mRNA的表达水平与甲状腺癌组织病理分级显著相关(r s=0.810,P<0.05);甲状腺癌组织中HSP70蛋白水平显著高于正常甲状腺组织(P<0.05);3组人群组织中TNF-αmRNA水平比较差异有统计学意义(P<0.05),甲状腺癌组织中TNF-αmRNA水平显著高于正常甲状腺组织以及甲状腺良性病变组织(P均<0.05)。结论:HSP70、TNF-α在甲状腺癌组织中的表达升高,且HSP70与甲状腺癌组织病理分级明显相关,提示HSP70在甲状腺癌发生发展中发挥重要的作用。; 苏波云鹏张晓刘燕青; 关键词：HSP70 TNF-Α 甲状腺癌病理

抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用: 抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用，轻链的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示，重链的氨基酸序列如SEQIDNo:2所示；轻链的核苷酸序列如SEQIDNo:3所示，重链的核苷酸序列如SEQIDNo:4所...; 任勇亚杜丽坚任政张晓李红冯振卿; 文献传递

抗狂犬病病毒G蛋白scFv20抗体及其应用: 抗狂犬病病毒G蛋白scFv20抗体及其应用，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明应用噬菌体抗体库技术，以130例狂犬病疫苗免疫后的健康志愿者外周血淋巴细胞，构建全...; 张晓李欣妍刘方舟陆辰; 文献传递

全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定被引量：5: 2013年; 目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。; 张倩倩赵茜张晓丁贵鹏金秋高畅熊四平陈玉平朱进冯振卿; 关键词：噬菌体抗体库中和活性

抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定被引量：5: 2011年; 目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。; 詹峰曾晓燕张晓周顺徐言张建平焦永军; 关键词：GDF15 单克隆抗体 HCC

牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体的制备: 2015年; 目的制备牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)单克隆抗体(m Ab),并对其特异性进行初步鉴定。方法构建含PEPCK基因的重组质粒,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达,对表达产物PEPCK重组蛋白进行纯化,以PEPCK重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞,用间接ELISA筛选阳性克隆,获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的细胞株,并用Western blot法,免疫组织化学染色和免疫沉淀鉴定其特异性。结果成功获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的杂交瘤细胞株。Western blot法、免疫组织化学和免疫沉淀结果表明,该抗体能与牛PEPCK蛋白特异性结合。结论成功获得抗牛PEPCK m Ab。; 盛美蕾张晓张纬张燕飞王盈戴一凡; 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体杂交瘤

张晓

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