曲光刚
- 作品数：96 被引量：186H指数：7
- 供职机构：山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省自主创新成果转化重大专项项目现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 猪链球菌Ide通用截短蛋白原核表达及纯化研究
- 2018年
- 为利用大肠埃希菌表达猪链球菌Ide通用截短蛋白,通过对Gen Bank公布的Ide S蛋白家族基因同源性分析,使用Primer 5.0软件设计一对特异性引物,以猪链球菌2型强毒株JZLQ全基因组为模板,采用PCR方法扩增Ide基因截短片段,经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后将目的片段分别克隆到p ET28a、p ET32a和p ET-sumo表达载体上,分别转化宿主菌E.coli BL21(DE3)。通过优化诱导温度及诱导剂IPTG浓度进行表达并对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果显示,PCR扩增片段大小约为1200 bp,经双酶切和测序验证构建正确;三种重组表达载体转化大肠埃希菌后均有目的蛋白表达,但不同表达条件下目的蛋白表达量存在差异,其中p ET28a-Tr Ide重组表达载体用25℃诱导、IPTG终浓度为1 mmol/L时可实现重组蛋白的高效可溶性表达,为IdeSsuis蛋白在猪链球菌通用疫苗研发方面的研究奠定了基础。
- 曲光刚王长江李书光李茂峰武曰星金婷婷韩文瑜沈志强
- 关键词：猪链球菌2型原核表达SDS-PAGE分析
- 杂交猪IL-2和IL-6全基因克隆及序列分析被引量：2
- 2009年
- 为研究杂交猪白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)在机体免疫应答中的作用,将杂交猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下进行体外培养后,提取淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术扩增出杂交猪淋巴细胞IL-2和IL-6的cDNA,克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果表明:杂交猪IL-2基因核苷酸序列与参考序列的同源性为100%;IL-6基因核苷酸序列与GenBank登录的参考序列的核苷酸同源性在99.8%～100%之间,推导氨基酸同源性在99.1%～100%之间。
- 沈志强汪明赵德明王金良唐娜曲光刚
- 关键词：白细胞介素2白细胞介素6杂交猪
- PRV、PCV-2、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用被引量：5
- 2009年
- 根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)核苷酸序列,设计并合成能分别特异性扩增PRV、PCV-2、PPV的引物。经条件优化,建立了同时检测PRV、PCV-2、PPV的多重PCR方法,所扩增特异性产物片段大小分别为217bp、394bp、748bp。该方法不仅特异性强、敏感性高,还克服了对上述病原分别进行检测所带来的诸多弊端,为猪伪狂犬病、猪Ⅱ型圆环病、猪细小病的临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。
- 曲光刚沈志强管宇王金良肖跃强孙园园
- 关键词：猪伪狂犬病病毒猪细小病毒
- 可变色ELISA样品稀释液制备及其性能检测
- 2024年
- 为解决酶联免疫吸附法(ELISA)检测过程中样品错加、漏检问题,研制开发了一种可变色ELISA试剂盒样品稀释指示剂,明确了其制备方法,并开展了性能检测评价及其在检测过程的应用特性。可变色稀释指示剂制备方法为:在0.01 mol/L PBS(pH=7.2)基础缓冲液中,加入血清蛋白组分、0.01%可变色指示剂和特效稳定剂,充分溶解后再添加Krovin750防腐剂,定容后即可。结果:制备的可变色ELISA样品稀释显色反应明显,可用于ELISA试剂盒检测中的血清或血浆样本稀释,有效避免检测过程样品跳孔和错加现象;同时对样品具有良好保护,显著提高了检测结果的准确性和稳定性,实现了对样品的有效保护,降低了样品基质背景干扰,提高了检测结果的准确性和稳定性。
- 董林谢金文谢金文王艳萍王艳萍刘吉山王金良
- 关键词：ELISA性能评价
- 一种疫苗实验离心机
- 本实用新型公开了一种疫苗实验离心机，包括外壳、底盘、电机、固定块、支撑杆和固定装置，所述底盘水平设置在所述外壳底部，且与设置在所述底盘下方的电机的转矩输出轴固定连接，所述固定块固定设置在所述底盘的上侧面的圆心位置，两个所...
- 曲光刚沈志强郭时金唐世云付石军
- 文献传递
- 一种利用大肠杆菌系统制备小鹅瘟病毒样颗粒的方法
- 本发明涉及一种利用大肠杆菌系统可溶性表达小鹅瘟VP2蛋白制备小鹅瘟病毒样颗粒方法，一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化，定点突变包括将密码子AGA突变为CGC和GGA突变为GGT...
- 曲光刚沈志强金婷婷李书光武曰星王长江
- 文献传递
- 奥氏奥斯特线虫检测方法的建立与应用及其巨噬细胞转移抑制因子功能鉴定
- 巨噬细胞转移抑制因子是哺乳动物的促炎症因子，与其他细胞因子不同的是，巨噬细胞转移抑制因子具有氧化还原酶和互变异构酶活性。这个高度保守的蛋白同系物在不同的物种中都存在，其中也包括寄生虫。 本研究主要针对奥氏奥斯特线虫巨噬细...
- 曲光刚
- 关键词：ITS-2免疫调节
- 文献传递
- 新城疫病毒F基因的克隆表达及重组蛋白的反应原性分析被引量：1
- 2015年
- 为分析新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)及其突变体(Fm)基因的反应原性,以携带有NDV-F和NDV-Fm基因的质粒为模板设计引物,PCR扩增产物经双酶切后分别连入原核表达载体pET-SUMO、pET-28a,构建重组质粒pET-SUMO-F、pET-28a-Fm,将重组质粒转化入宿主菌Rosetta 2感受态细胞,在IPTG诱导下表达。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,NDV-F和NDV-Fm在原核系统中表达后分别获得了相对分子量为64.7 kD和48.7 kD的重组蛋白;重组蛋白能被抗NDV鸡阳性血清识别。试验表明,NDV-F和NDV-Fm可以在原核系统中表达,且具有良好的反应原性。
- 曲光刚李佃场李茂峰金婷婷武曰星王长江刘博高三阳
- 关键词：新城疫病毒F蛋白反应原性
- Ⅰ型鸭肝炎病毒SYBR-Green实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2014年
- 为建立一种快速、特异的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,根据GenBank已登录的DHV-Ⅰ型疫苗株C80(DQ864514.3)的非编码区基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出230bp的靶序列,并克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒;将纯化的重组质粒10倍梯度稀释后作为标准阳性模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并建立标准曲线,对其敏感性、特异性和重复性进行评价。结果显示,建立的标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系(R2=0.998 2),产物Tm值为87.2～87.9℃,检测灵敏度为71.5拷贝/μL。对55份疑似病料进行检测,荧光定量检测48份为阳性,而用常规PCR方法只能检出39份阳性,ELISA方法只检出30份阳性。这表明所建立的DHV-Ⅰ的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和重复性良好等优点,可用于临床DHV-Ⅰ感染的快速检测,为DHV的分子诊断、流行病学调查及定量分析奠定了基础。
- 王文秀张倩曲光刚莫玲沈志强
- 关键词：SYBRELISA
- 马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条及其制备方法
- 本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条。马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条包括在底板上依次贴附的样品垫、金标结合物垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫；结合物垫为包被有金标...
- 李书光曲光刚李峰程立坤沈志强
- 文献传递
