李俭
- 作品数：19 被引量：29H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 仔猪RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定
- RNA结合基序蛋白3(RNA binding motif protein 3,RBM3)是Danno等于1997年首次在人类胎儿的脑组织中分离鉴定得到的一种富含甘氨酸的冷休克蛋白。RBM3蛋白是一种具有潜在研究价值的多功...
- 李俭
- 关键词：冷休克蛋白慢病毒载体荧光定量PCR
- 文献传递
- 冷应激条件下猪睾丸细胞中RNA结合基序蛋白3过表达对Caspase 3表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨冷应激(32℃)条件下,猪睾丸(ST)细胞系中RNA结合基序蛋白3(RBM3)过表达时凋亡蛋白半胱天冬酶3(Caspase 3)表达量变化情况。方法:利用本实验室成功构建的携带绿色荧光蛋白(GFP)的RBM3过表达慢病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-RBM3和空病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-DEST分别感染ST细胞,作为过表达病毒(OEV)组和空载体病毒(EVV)组,此外还设立野生型细胞(WTC)组作对照,利用实时荧光定量RCR(qPCR)法和Western blot分析法检测各组中RBM3 mRNA和蛋白的表达情况。然后对各组细胞进行37℃以及32℃(2 h、4 h,8 h)的冷应激处理,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组Caspase 3表达量的变化。结果:OEV组RBM3基因和蛋白相对表达量高于EVV组和WTC组。在37℃以及32℃冷应激实验(2 h、4 h,8 h)中,OEV组Caspase 3表达量显著低于EVV组和WTC组。结论:冷应激ST细胞中RBM3过表达能够显著地降低Caspase 3的表达程度,为RBM3基因具有抵抗低温诱导ST细胞凋亡作用提供实验依据。
- 李云龙李俭李昌盛李静辉孟宇杨焕民李士泽
- 关键词：冷应激过表达半胱天冬酶3
- 长白猪RBM3基因及其重组慢病毒载体的构建和应用
- 本发明涉及一种长白猪RBM3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了含有该基因的重组慢病毒载体和构建方法以及在提高猪的抗寒能力中的应用。本发明成功的构建了含RBM3基因的慢病毒载体plenti6/v...
- 李士泽李俭杨玉英杨焕民计红李玉恒孟宇李静辉张雪李云龙
- 文献传递
- RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定被引量：1
- 2014年
- 构建含有冷休克蛋白RNA结合基序蛋白3(RBM3)基因的慢病毒表达载体,产毒感染ST细胞,以评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果.应用分子生物学技术提取仔猪脾脏组织的总RNA,通过反转录方法扩增RBM3基因,将其连入慢病毒载体Plenti6/v5-DEST中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并进行RBM3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,收获病毒液,感染293T细胞并提取细胞RNA,用逆转录PCR方法检测RBM3 mRNA在感染病毒的293T细胞中的表达,用含有慢病毒空载体pLenti6/V5-DEST的病毒液、含有重组慢病毒载体pLenti6/V5-RBM3的病毒液和无菌去离子水分别感染ST细胞后通过Western blot方法检测RBM3蛋白在感染病毒的ST细胞中的表达.结果表明:构建的慢病毒载体Plenti6/v5-RBM3经测序分析证实基因序列正确.包装后的慢病毒滴度为107 PFU/mL.逆转录PCR方法检测到感染病毒的293T细胞中,RBM3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的ST细胞中,空载体组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量接近相同(分别为0.312±0.022和0.282±0.028);过表达组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量(0.568±0.045)显著增加(P<0.05),RBM3蛋白在翻译水平有表达.因此,本研究构建的携带RBM3基因的重组慢病毒能够感染ST细胞,并使其RBM3蛋白表达量增加.
- 李俭杨玉英李玉恒郭景茹计红郭丽李鹏杨焕民李士泽
- 关键词：冷休克蛋白慢病毒载体WESTERNBLOT
- 慢病毒载体介导的CIRP过表达体系的构建
- 慢病毒既可以感染分裂期细胞,又可以感染分裂缓慢或非分裂期的细胞,并且慢病毒携带的基因可整合入宿主基因组,目的基因可以在宿主细胞中得到长期稳定的表达,免疫反应很小。因此,为了得到有效的基因过表达效果,本实验中应用慢病毒载体...
- 李玉恒李静林增孟宇孙智峰李俭刘从李鹏沈冰蕾李士泽
- 文献传递
- 谷氨酰胺和L-肉碱对低温应激下AA肉仔鸡生产性能的影响
- 2013年
- 研究旨在从生产性能方面研究谷氨酰胺和L-肉碱在促进动物生长,减缓低温应激的影响,为生产实践应用抗应激添加剂提供理论依据和有益参考。采用L16(45)正交试验设计,将480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为16组,每组3个重复,每个重复10羽肉仔鸡。谷氨酰胺添加水平分别为0%、0.4%、0.6%、0.8%,L-肉碱添加水平分别为0、50、75、100 mg.kg-1。预饲一周,试验期2周。低温条件下,在AA肉仔鸡基础日粮中联合添加谷氨酰胺和L-肉碱,显著提高了冷暴露AA肉仔鸡生产性能(p<0.05);谷氨酰胺为0.8%,L-肉碱的添加量为75 mg.kg-1对低温环境下肉仔鸡的作用效果最好。
- 王雷纪丽丽李俭申凤华刘丛计红杨焕民李士泽
- 关键词：谷氨酰胺L-肉碱
- 利用梯度PCR和降落PCR扩增CIRP基因的比较被引量：12
- 2011年
- 提取SD大鼠总RNA,同时应用降落PCR和梯度PCR在常规PCR反应体系和低模板浓度PCR反应体系中扩增CIRP基因片段,对两种方法的扩增效果进行比较。结果表明:降落PCR法可以通过一次反应即顺利扩增出CIRP基因特异性条带,并且在模板浓度降低后也能扩增出产物;梯度PCR法扩增结果不稳定,不但有非特异性条带出现而且不能检测出低浓度模板的存在。结论:降落PCR省略了梯度PCR摸索最适退火温度的过程,并且其灵敏度和特异性均高于梯度PCR。
- 李玉恒赵明慧赵紫阳李峥袁雪李昌盛林增胡婧李俭李士泽
- 关键词：降落PCR退火温度
- CIRPmiRNA干扰质粒的构建及鉴定
- miRNA是一种新型RNAi技术,针对miRNA前体分子环状结构序列而设计的靶基因干扰序列,在生物体内经过作用后不仅可以与其对应互补的mRNA序列结合,使mRNA降解,还可以通过与目的mRNA靶基因的非翻译区特异性结合来...
- 李玉恒李静孟宇孙智峰李俭林增刘从李鹏沈冰蕾李士泽
- 文献传递
- 长白猪RBM3基因及其重组慢病毒载体的构建和应用
- 本发明涉及一种长白猪RBM3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了含有该基因的重组慢病毒载体和构建方法以及在提高猪的抗寒能力中的应用。本发明成功的构建了含RBM3基因的慢病毒载体plenti6/v...
- 李士泽李俭杨玉英杨焕民计红李玉恒孟宇李静辉张雪李云龙
- 文献传递
- 慢病毒载体介导的CIRP过表达体系的构建
- 2012年
- 慢病毒既可以感染分裂期细胞,又可以感染分裂缓慢或非分裂期的细胞,并且慢病毒携带的基因可整合入宿主基因组,目的基因可以在宿主细胞中得到长期稳定的表达,免疫反应很小。因此,为了得到有效的基因过表达效果,本实验中应用慢病毒载体的介导构建CIRP过表达体系。利用Invitrogen公司的Gateway Lentiviral载体系统。
- 李玉恒李静林增孟宇孙智峰李俭刘从李鹏沈冰蕾李士泽
- 关键词：慢病毒载体病毒载体介导免疫反应目的基因
