李洪涛 作品数:6 被引量:20 H指数:3 供职机构: 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 海外青年学者合作研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
干扰素诱导蛋白IFIT1的克隆与原核可溶性表达 被引量:1 2011年 目的研究干扰素诱导蛋白IFIT1的原核可溶性表达。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得IFIT1编码序列,克隆入原核表达载体,电穿孔转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,诱导细菌表达,蛋白凝胶电泳观察。结果构建的原核表达平台实现了较丰富的麦芽糖结合蛋白融合IFIT1(MBP-IFIT1)可溶性表达。结论 MBP-IFIT1的原核可溶性表达为后续IFIT1蛋白结合分析及免疫分析提供了材料及方法学基础。 李洪涛 粟永萍 徐建明 冉新泽 王军平 艾国平 程天民关键词:细胞应激 原核表达 烧伤小鼠IFIT1表达的初步观察 被引量:3 2006年 目的 观察烧伤小鼠干扰素诱导表达蛋白IFIT1的表达变化,初步探究其表达变化的原因。方法 实验小鼠致TBSA 15%Ⅱ度烧伤,1d及7d后处死,取肝、肺及脾组织。脂多糖掺入小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7的培养基中,至终浓度0.1~1.0μg/ml,作用6h。提取组织及细胞RNA,进行半定量逆转录-聚合酶链式反应,提取组织及细胞裂解上清,进行免疫印迹检测。结果 小鼠肝、肺、脾组织IFIT1的转录在烧伤后1d升高,伤后7d恢复至伤前水平;肝、肺、脾IFIT1的蛋白水平在伤后1d一致升高,伤后7d仍能检出升高。体外实验,细菌脂多糖显著激活RAW264.7细胞的IFIT1转录及蛋白表达。结论 烧伤小鼠伤后早期IFIT1表达迅速升高,此变化与同期的内毒素血症引起的细胞应激有关。 李洪涛 粟永萍 Jian-ming XU 王军平 艾国平 程天民关键词:烧伤 脂多糖 细胞应激 小鼠IFIT1多克隆抗体的制备 被引量:7 2007年 目的获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1)特异性多克隆抗体。方法扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,用Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价。结果纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1∶12800。结论MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体。 郭晓姝 李洪涛 方海立 王军平 粟永萍关键词:IFIT1 多克隆抗体 融合蛋白 抗原性 免疫应答 颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及相关机制研究 被引量:12 2006年 目的探讨颈交感神经阻滞(SB)对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及可能机制。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为:对照组、放烧复合伤组及伤后SB治疗组,比较各组血清糖皮质激素(GC)及ACTH浓度的差异;同时利用膜片钳技术检测各组间海马NMDA受体通道特性的变化。另外,将腹腔注射足量NMDA受体阻断剂MK-801的小鼠分为:放烧复合伤组、伤后SB治疗组,比较两组血清GC及ACTH浓度的差异。结果放烧复合伤后血GC及ACTH水平显著升高,SB治疗组血GC和ACTH水平显著底于放烧复合伤组。SB组海马NMDA受体通道开放概率、开放时间常数τ1、τ2虽然高于对照组,但显著低于放烧复合伤组。足量MK-801预处理的放烧复合伤组与SB组之间的血清GC和ACTH水平无显著差异。结论SB通过降低NMDA受体的活性,抑制了严重创伤(放烧复合伤)小鼠HPA轴的亢进。 陆建华 陶军 叶建宁 粟永萍 李洪涛 程天民关键词:颈交感神经节 放烧复合伤 HPA轴 NMDA受体 JAB1表达下调对LPS诱导炎性因子TNF-α和IL-6的影响 被引量:3 2007年 目的初步探讨JAB1基因表达下调对炎症反应的影响。方法构建特异性针对小鼠JAB1基因的RNA干扰真核表达载体,转染到RAW264.7细胞中降低其JAB1基因的表达,观察LPS刺激后培养上清中炎性因子TNF-α和IL-6的浓度变化。结果成功得到小鼠JAB1基因的RNA干扰真核表达载体(pPUR/U6-siJAB1),将其转染RAW264.7细胞后使JAB1的蛋白表达水平显著下降,经LPS刺激后培养上清中炎性因子TNF-α和IL-6的浓度较正常细胞明显降低。结论小鼠JAB1基因的低表达使RAW264.7细胞在经LPS诱导后的炎性因子产生降低,推测其在炎症反应中对致炎因素的影响更大。 任泂 粟永萍 李洪涛 李军 王军平 邹仲敏关键词:JAB1 炎性因子 IL-6 TNF-Α 糖皮质激素受体α基因RNA干扰的生物学效应研究 被引量:1 2004年 目的 采用RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)技术 ,通过构建人糖皮质激素受体α(glucocorticoidreceptorα ,GRα)基因的特异性siRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体 ,体外观察对GRα基因的沉默作用及生物学效应。方法 采用基因克隆技术 ,将合成的发卡样特异性GRα干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体 (pPUR/U6) ,构建GRαsiRNA的表达载体 ,转染体外ECV 3 0 4细胞 ,48h后观测胞内GRα蛋白水平 (Westernblot)及对LPS刺激后细胞因子产生的影响作用。结果 ①成功构建发卡样GRαsiRNA真核表达载体 (pPUR/U6 GRαsiRNA) ;②pPUR/U6 GRαsiRNA转染 (脂质体法 )ECV 3 0 4细胞 ,48h后明显下调胞内GRα蛋白水平 ;③转染pPUR/U6 GRαsiRNA的细胞 ,在LPS刺激后 ,其TNF α、IL 1β的表达释放显著高于空载体对照组。结论 该RNA干扰真核表达载体能明显干扰GRα蛋白的表达、释放 ,结果促进了LPS刺激后炎性细胞因子的表达释放。进一步说明严重创伤所引起的糖皮质激素受体下调是机体应激紊乱的重要原因。 王明海 粟永萍 程天民 王锋超 陆建华 刘晓宏 李洪涛关键词:RNA干扰