杨仕标
- 作品数：65 被引量：170H指数：7
- 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项云南省农业科技创新工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 云南省山羊皮下脓肿的病原菌种类调查分析
- 2023年
- 采用细菌分离鉴定和PCR 2种检测方法对来源于昆明市西山区、石林县、宜良县和弥勒县山羊养殖场的128份山羊皮下脓肿样品进行检测,并比较2种方法的检测结果。PCR检测结果显示,在128份皮下脓肿样品中,化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的检出率分别为17.19%(22/128),20.31%(26/128)和67.19%(86/128)。细菌分离鉴定结果显示,A.pyogenes、C.pseudotuberculosis、S.aureus和绵羊链球菌(Streptococcus ovis)的分离率分别为9.38%(12/128),20.31%(26/128),65.63%(84/128)和1.56%(2/128)。在128份皮下脓肿样品中,细菌分离鉴定和PCR 2种方法只检出1种病原菌的样品比例分别为95.31%(122/128)和92.19%(118/128),2种检测方法的总符合率为90.63%(116/128)。结果表明,S.aureus是云南省山羊皮下脓肿最主要的病原菌,S.ovis可能是山羊皮下脓肿的潜在新病原菌。
- 李富祥夏九鲜喻永福朱沛杨仕标赵文华高华峰
- 关键词：皮下脓肿山羊病原菌种类PCR
- 致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法的建立被引量：1
- 2019年
- 为建立一种快速鉴别检测致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR方法,根据溶血性曼氏杆菌16S rRNA和白细胞毒素(lktA)基因保守序列设计特异性引物及探针,并优化反应条件,建立了鉴别致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法与其他24种常见牛羊细菌均无交叉反应,具有较好的特异性;其检测lktA基因阳性和阴性溶血性曼氏杆菌的最低检出限度均为40 copies,具有较好的敏感性。应用建立的双重荧光定量PCR方法和普通PCR方法对48份临床样品进行检测,这2种方法检出的溶血性曼氏杆菌阳性率分别为27.1%和18.8%,检出lktA基因阳性溶血性曼氏杆菌的阳性率分别为20.8%和12.5%,阳性符合率为100%。本研究中建立的双重荧光定量PCR方法为牛羊溶血性曼氏杆菌致病性与非致病性菌株感染的高通量快速鉴别诊断提供了可行手段。
- 李富祥高华峰邵庆勇洪琼花朱建波赵文华杨仕标
- 非洲马瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 非洲马瘟病毒(AHSV)为双股RNA病毒,能感染所有马科动物。为建立一种AHSV快速检测方法,根据GenBank及作者所测AHSV 9个血清型VP7-ORF全长核苷酸序列,设计一对位于AHSV基因组S7片段的特异引物,然后进行荧光定量检测。经试验,证实该对引物对9种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,能检出特异荧光信号,而对与AHSV同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血症病毒(EHDV)及正常马淋巴组织和阴性对照均无扩增,无有效荧光信号可检出。以国家外来动物疫病诊断实验室已构建好的AHSV 9型pMD18-T-VP7质粒为标准品可建立良好的标准曲线,实现对检测样本的实时定量。本研究建立了模板预变性结合"三步"法敏感特异的AHSV实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,检测灵敏度可达102拷贝/μL。
- 赵文华杨仕标李富祥
- 关键词：非洲马瘟病毒血清型SYBR实时荧光定量RT-PCR
- 牛瘟研究进展被引量：2
- 2002年
- 邹云莲信爱国赵文华朱建波杨仕标张念祖
- 关键词：牛瘟牛瘟病毒疫苗
- 几种外来动物病毒多重普通和实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用
- 2022年
- 为了能够同时开展对小反刍兽疫病毒(PPRV)、蓝舌病血清8型病毒(BTV8)、鹿流行性出血热血清1型病毒(EHDV1)和非洲马瘟病毒(AHSV)4种外来动物疫病病原体的核酸检测,本试验根据GenBank中相关病毒序列设计引物和探针,建立多重普通逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在采集的临床样本检测中进行初步应用验证。结果显示:建立的PPRV/BTV8/EHDV1三重实时荧光定量RT-PCR检测方法仅对PPRV、BTV8和EHDV1有特异荧光信号,检测敏感度可达10^(1.70)~10^(2.08) copies/μL DNA;建立的PPRV/BTV8/EHDV1/AHSV四重普通RT-PCR方法可特异性同步检测PPRV、BTV8、EHDV1和AHSV,检测敏感度可达10^(3) copies/μL DNA;2种方法对羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、牛病毒性腹泻等临床相似的病毒均无扩增。在925份临床样本中检测出1例PPRV核酸阳性样本;经核苷酸序列测定及BLAST比对确定为谱系Ⅳ型PPRV毒株序列。本试验所建立的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法和四重普通RT-PCR方法可特异性同步检测相应的3种或4种病毒病原,且具有临床样本检测的应用潜力。
- 赵文华李富祥杨仕标
- 关键词：小反刍兽疫病毒非洲马瘟病毒
- 禽流感实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 引言禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染性疾病综合征。在禽流感疫苗大面积免疫的背景下,禽流感病毒感染后引起的临床症状和病理变化缺乏特征性症状和病理剖检变化,易与禽类其他相关疫病相混淆,因此禽流感确诊必需依赖实验室诊...
- 宋建领赵文华杨仕标张富强
- 鸡源圣雷利气单胞菌(Aeromonas sanarellii)的分离鉴定及致病性研究
- 2019年
- 对1例鸡鼻炎样病例进行细菌学诊断,从病鸡鼻腔中分离到1株革兰阴性杆菌,编号为ZY17105,对其进行形态学、生理生化、分子生物学鉴定,对其致病性和耐药性进行分析,同时探讨gyrB基因在气单胞菌鉴定中的意义。16S rDNA进化分析显示ZY17105与圣雷利气单胞菌模式菌株LMG24682同源性为99.4%;gyrB基因进化分析显示ZY17105与各圣雷利气单胞菌株形成同一进化支,与圣雷利气单胞菌模式菌株LMG24682和A2-67之间的同源性为分别为97.8%和98.2%。根据形态学、生理生化特性、16S rDNA和gyrB基因进化分析,将分离株ZY17105鉴定为圣雷利气单胞菌,分离株ZY17105对小鼠和鸡有较强致病性;另外,进化分析表明gyrB基因在气单胞菌属各种间的区分能力高于16S rDNA。本研究首次从中国大陆分离到圣雷利气单胞菌,并证实gyrB基因可替代16S rDNA用于气单胞菌属各菌种间的进化分析鉴别。
- 白鱼城赵德宏李富祥杨仕标虎学礼宋建领赵文华李华春
- 进口禽大肠杆菌灭活苗免疫效力和安全性研究
- 2002年
- 对梅里亚动物保健公司生产提供的二种禽大肠杆菌灭活疫苗的免疫效力和安全性进行了试验研究。将二种禽大肠杆菌灭活疫苗各2倍剂量,经肌肉注射免疫12日龄雏鸡,试验鸡表现正常,局部疫苗吸收良好。在试验条件下,免疫鸡经5个分离株(O2、O83、O138、O78、O1)及其混合物攻击,二种疫苗的平均免疫保护率分别为76.85%和75.74%,而相同条件的非免疫对照组的平均免疫保护率为22.22%。
- 杨仕标廖启顺常志顺覃袖伟唐桂运
- 关键词：大肠杆菌灭活苗免疫效力安全性进口贸易
- 云南流产山羊中检出流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体混合感染被引量：6
- 2017年
- 建立山羊流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体基因组DNA特异扩增检测方法,对云南省河谷地区可疑流产病料时行病原检测并最终证实病原的存在,在此基础上了解病原的进化。获得特异基因产物完成测序验证后递交GenBank,能过BLAST初步分析后调取相关基因,应用DNAstar5.0计算序列间的相似性,计算遗传距离,应用MEGA5.2软件进行比对并构建系统发育树,进行聚类分析。云南流产嗜性衣原体KR778870与有参考序列的衣原体毒株比较其核苷酸同源性均为100%,属同一基因型,与鹦鹉热衣原体同源率最高为94.9%;Q热立克次氏体云南毒株KR697576与纳米比亚毒株CP007555同源性为100%,其次美国毒株为CP00102同源率99.7%,台湾株EU000273为99.4%,同源率最低的毒株EU009657仅为42.6%。通过基因特异性PCR确定流产山羊中检测到流产嗜性衣原体及Q热立克次氏体,流产嗜性衣原体PMP基因无变异,Q热立克次氏体TransⅢ基因则有一定的变异。
- 赵国洪姚俊赵文华杨仕标高华峰
- 关键词：流产嗜性衣原体Q热立克次氏体
- 山羊源无枝菌酸棒状杆菌(Corynebacterium amycolatum)的分离鉴定与耐药性分析被引量：1
- 2022年
- 为了对1起羊腹泻病例进行诊断,从腹泻病羊粪便中分离到10株革兰阳性棒状杆菌YN21083~YN210812,对分离株进行形态学和16S rDNA基因鉴定并研究其药物敏感性和耐药基因特征。NCBI数据库BLAST比对鉴定结果显示,10株分离株与无枝菌酸棒状杆菌(Corynebacterium amycolatum)德国分离株FDAARGOS_991的同源性为99.3%~100.0%。16S rDNA基因进化分析显示10株分离株与C.amycolatum参考株形成同一个进化分支,与C.amycolatum参考株之间的同源性为97.2%~100.0%,与C.amycolatum模式菌株ATCC49368之间的同源性为98.3%~99.2%,将10株分离株鉴定为C.amycolatum。药敏试验结果显示,10株分离菌株对青霉素、氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、头孢噻吩、头孢呋辛、氟苯尼考、阿米卡星和四环素敏感,对卡那霉素和磺胺甲恶唑耐药。耐药基因PCR检测结果显示,共检测到8种耐药基因aadA1、aadA2、tetA、tetM、qnrS、Sul1、Sul2和Sul3,其检出率分别为30.0%,30.0%,100.0%,60.0%,60.0%,100.0%,10.0%和20.0%。本研究首次报道羊C.amycolatum感染,对羊C.amycolatum感染的预防和控制具有重要指导意义。
- 李富祥洪琼花朱沛王金萍杨仕标宋建领高华峰
- 关键词：山羊腹泻耐药性
