高华峰
- 作品数：37 被引量：110H指数：7
- 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省农业科技创新工程项目云南省应用基础研究计划面上项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学一般工业技术更多>>
- 云南流产山羊中检出流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体混合感染被引量：6
- 2017年
- 建立山羊流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体基因组DNA特异扩增检测方法,对云南省河谷地区可疑流产病料时行病原检测并最终证实病原的存在,在此基础上了解病原的进化。获得特异基因产物完成测序验证后递交GenBank,能过BLAST初步分析后调取相关基因,应用DNAstar5.0计算序列间的相似性,计算遗传距离,应用MEGA5.2软件进行比对并构建系统发育树,进行聚类分析。云南流产嗜性衣原体KR778870与有参考序列的衣原体毒株比较其核苷酸同源性均为100%,属同一基因型,与鹦鹉热衣原体同源率最高为94.9%;Q热立克次氏体云南毒株KR697576与纳米比亚毒株CP007555同源性为100%,其次美国毒株为CP00102同源率99.7%,台湾株EU000273为99.4%,同源率最低的毒株EU009657仅为42.6%。通过基因特异性PCR确定流产山羊中检测到流产嗜性衣原体及Q热立克次氏体,流产嗜性衣原体PMP基因无变异,Q热立克次氏体TransⅢ基因则有一定的变异。
- 赵国洪姚俊赵文华杨仕标高华峰
- 关键词：流产嗜性衣原体Q热立克次氏体
- 鸭瘟病毒的PCR鉴定及相关序列分析被引量：10
- 2003年
- 设计、合成了 2对鸭瘟病毒引物 ,对云南省发现的 1例鸭瘟可疑病例 (YN DPV0 1)进行PCR鉴定 ,并对其扩增产物进行测序。结果显示 ,引物对被检测病料的扩增正确 ;所扩增的片段经序列测定与参考毒株 p4 81的同源性为 99.5 %。
- 赵文华高华峰宋建领朱建波李志华张念祖
- 关键词：鸭瘟鸭瘟病毒PCR同源性
- 大肠杆菌多价抗体(猪泻停)口服防治仔猪腹泻效果观察
- 2003年
- 姚俊高华峰单于乃纯解天珍李志华李春棣郎国强孟志宏孙石林韩自洪
- 关键词：仔猪腹泻
- 小反刍兽疫病毒原核表达体外转录系统的建立被引量：2
- 2016年
- 构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通过全基因合成构建含PPRV病毒5′端启动子序列(AGP)、3′端启动子序列(GP)、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列HamRZ及氯霉素乙酰转移酶(CAT),获得PPRV微型复制子重组质粒pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达T7RNA多聚酶(T7RNP)感染痘病毒VTF7-3后,通过脂质体法优化4种质粒配比,并将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光分析CAT的表达情况,荧光显微镜观察到荧光的表达,并通过免疫印迹分析CAT蛋白的表达,表明构建的PPRV微型复制子具有转录和复制功能,这将有助于进一步开展以PPRV反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。
- 高华峰赵文华高林杨仕标
- 关键词：小反刍兽疫病毒
- 云南省山羊皮下脓肿的病原菌种类调查分析
- 2023年
- 采用细菌分离鉴定和PCR 2种检测方法对来源于昆明市西山区、石林县、宜良县和弥勒县山羊养殖场的128份山羊皮下脓肿样品进行检测,并比较2种方法的检测结果。PCR检测结果显示,在128份皮下脓肿样品中,化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的检出率分别为17.19%(22/128),20.31%(26/128)和67.19%(86/128)。细菌分离鉴定结果显示,A.pyogenes、C.pseudotuberculosis、S.aureus和绵羊链球菌(Streptococcus ovis)的分离率分别为9.38%(12/128),20.31%(26/128),65.63%(84/128)和1.56%(2/128)。在128份皮下脓肿样品中,细菌分离鉴定和PCR 2种方法只检出1种病原菌的样品比例分别为95.31%(122/128)和92.19%(118/128),2种检测方法的总符合率为90.63%(116/128)。结果表明,S.aureus是云南省山羊皮下脓肿最主要的病原菌,S.ovis可能是山羊皮下脓肿的潜在新病原菌。
- 李富祥夏九鲜喻永福朱沛杨仕标赵文华高华峰
- 关键词：皮下脓肿山羊病原菌种类PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：7
- 2012年
- 根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmol/L)各0.5μL,探针prrsv-p(10μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%～1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。
- 宋建领高华峰信爱国李华春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR
- 致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法的建立被引量：1
- 2019年
- 为建立一种快速鉴别检测致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR方法,根据溶血性曼氏杆菌16S rRNA和白细胞毒素(lktA)基因保守序列设计特异性引物及探针,并优化反应条件,建立了鉴别致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法与其他24种常见牛羊细菌均无交叉反应,具有较好的特异性;其检测lktA基因阳性和阴性溶血性曼氏杆菌的最低检出限度均为40 copies,具有较好的敏感性。应用建立的双重荧光定量PCR方法和普通PCR方法对48份临床样品进行检测,这2种方法检出的溶血性曼氏杆菌阳性率分别为27.1%和18.8%,检出lktA基因阳性溶血性曼氏杆菌的阳性率分别为20.8%和12.5%,阳性符合率为100%。本研究中建立的双重荧光定量PCR方法为牛羊溶血性曼氏杆菌致病性与非致病性菌株感染的高通量快速鉴别诊断提供了可行手段。
- 李富祥高华峰邵庆勇洪琼花朱建波赵文华杨仕标
- 化脓隐秘杆菌可视化LAMP检测方法的建立
- 2023年
- 为建立化脓隐秘杆菌(A.pyogenes)可视化LAMP检测方法,本研究根据A.pyogenes 16S rRNA基因的特异性保守核苷酸序列设计两对LAMP引物,通过反应体系和反应条件的优化,结果显示,本研究建立的LAMP方法的最佳反应条件为62℃反应70 min。利用建立的LAMP方法检测金黄色葡萄球菌、伪结核棒状杆菌、A.pyogenes等山羊和绵羊常见的16种细菌的DNA样品,结果显示仅A.pyogenes DNA样品检测为阳性,其它细菌DNA样品和阴性对照检测均为阴性,表明该方法具有较强的特异性。利用建立的LAMP方法检测不同稀释度的重组质粒标准品pMD19T-Arc,结果显示检测限为8.2拷贝/μL,表明该方法具有较高的敏感性。利用建立的LAMP方法和普通PCR方法对128份山羊和绵羊皮下脓肿样品进行检测,结果显示两种方法对A.pyogenes的阳性检出率分别为18.8%(24/128)和17.2%(22/128),总符合率为98.4%(126/128)。结果表明,本研究首次建立了检测A.pyogenes的基于钙黄绿素指示剂的可视化LAMP方法,为山羊和绵羊A.pyogenes感染的检测提供了一种可视化快速的技术手段。
- 李富祥朱沛赵文华宋建领高华峰
- 关键词：化脓隐秘杆菌
- 化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2021年
- 为建立化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)和溶血性曼氏杆菌(M.haemolytica)快速核酸检测方法,本研究根据化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌16S rRNA保守序列设计2对特异性引物及2条TaqMan探针。经对反应体系和反应条件进行优化,建立了化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。特异性结果显示,该方法与金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、肠炎沙门菌和大肠杆菌等22种常见细菌无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌质粒标准品的最低检出浓度分别为31 copies/μL和65 copies/μL,且变异系数小于3%。对45份临床肺样品的检测结果显示,化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌的阳性率分别为15.5%和24.4%。本研究建立的双重荧光定量PCR方法为牛羊化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌感染的检测提供了敏感、快速的方法。
- 李富祥高华峰赵文华邵庆勇洪琼花杨仕标
- 关键词：化脓隐秘杆菌
- 小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5'FAM-TAMRA3'及5'JOE...
- 赵文华杨仕标高华峰王金萍
- 关键词：山羊小反刍兽疫病毒山羊痘病毒实时荧光定量PCR同步检测
