杨璐
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 牛γ-干扰素在大肠杆菌中的表达及抗原性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的在大肠杆菌中高效表达牛γ-干扰素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ),并对其生物活性进行初步鉴定。方法依据GenBank上基因序列人工合成BovIFN-γ基因,PCR方法扩增该基因,将其插入PET-28a载体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21中,在IPTG诱导下表达BovIFN-γ,并进行Western blot鉴定。Ni-NTA亲和层析法和电洗脱方法纯化表达的重组蛋白,用Western blot和商品化的BovIFN-γ检测试剂盒进行重组蛋白的抗原性检测。结果成功构建了BovIFN-γ原核表达载体PET-28a-BIFN-γ,并在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的32%,表达产物主要以可溶性形式存在于菌体裂解液上清中;重组蛋白可与BovIFN-γ单克隆抗体反应,Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白抗原活性比电洗脱方法纯化的抗原活性高。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的BovIFN-γ蛋白,可与BovIFN-γ单抗发生反应,纯化的重组蛋白具有良好的反应原性。
- 刘巧荣孙明乔明明杨璐申屠芬琴马永缨曹振田克恭陈西钊
- 关键词：原核表达抗原性大肠杆菌
- 小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备及间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2017年
- 将编码小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的基因全长克隆到pBacPAK9载体中,并在昆虫细胞中进行表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析,并用PPRV阳性血清进行了Western blot鉴定。用Ni-IDA亲和柱对组氨酸融合表达的N蛋白进行了纯化,并对纯化产物进行了理化性质和抗原活性分析。最后以表达的N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,临床检测137份山羊血清并与IDvet公司的商品化PPRV抗体检测试剂盒进行比较。结果表明,制备的PPRV N蛋白抗原在溶液中以单体形式存在,具有非常好的抗原活性。用该蛋白建立的间接ELISA检测方法与IDvet试剂盒符合率为956%。本研究为小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备相关质量标准的建立奠定了基础,同时建立的ELISA抗体检测方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。
- 冯向辉陈三民孔汉金杨璐申屠芬琴田新生张丽孙明陈西钊
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白ELISA
- 牛γ干扰素在CHO细胞中的表达和鉴定
- 2013年
- 为获得高活性的牛γ干扰素(BoIFN-γ),依据GenBank中已发表的BoIFN-γ基因序列(M29867)进行人工合成,应用PCR方法扩增该基因,将其插入pIRESneo构建真核表达质粒,转染到CHO细胞中,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达,并用牛γ干扰素检测试剂盒鉴定其反应原性。结果:成功的构建了pIRES-BoIFN-γ真核表达载体,实现了其在CHO细胞上的表达。表达产物经γ-干扰素检测试剂盒检测具有良好的反应原性,为研究BoIFN-γ结构与生物学功能以及建立牛结核BoIFN-γ检测法奠定了基础。
- 冯向辉李文合孙明刘巧荣乔明明申屠芬琴杨璐陈西钊
- 关键词：CHO细胞
- 猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达被引量：5
- 2012年
- 目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序。再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化。Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品。结果构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中。Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别。以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9%、81.8%和81.8%。结论本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高;其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高。
- 包新奇黄绍华刘巧荣孙明杨璐申屠芬琴康立平陈西钊
- 关键词：PRVGBELISA
- 犬细小病毒VP2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：5
- 2007年
- 目的表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV VP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究。方法采用PCR方法对CPV VP2基因进行扩增,将CPV VP2基因克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPICZαA中,构建真核重组表达载体pPICZαA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化毕赤酵母菌GS115中,在甲醇诱导下表达CPV VP2,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白。结果成功扩增了CPV VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZαA-VP2在毕赤酵母菌中表达出约64.35 kD蛋白。Western blotting鉴定表明,表达VP2蛋白与犬细小病毒阳性血清有反应性。结论在毕赤酵母中成功地表达了CPV VP2蛋白,能被犬细小病毒阳性血清识别。
- 张云霞丁银巧赵铁柱杨璐孙明曹振王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：毕赤酵母真核表达
- 牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体胶体金免疫层析试纸条的研究
- 目的：研制牛口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白抗体胶体金免疫层析试纸条，用于FMDV感染动物检测、诊断。
方法：利用基因工程表达FMDV非结构蛋白VPg1-2，标记胶体金颗粒。采用双抗原夹心法原理建立胶体金免疫层...
- 马永缨杨璐赵铁柱孙明
- 关键词：动物感染口蹄疫病毒蛋白抗体免疫学检验
- 文献传递
- 猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒研究
- 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪高度接触性致死性传染病，给世界养猪业造成巨大威胁和经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的法定传染病之一。
本文将猪瘟病毒E2基因的起始的23个密码子中...
- 乔明明申屠芬琴马永缨杨欣艳杨璐孙明
- 关键词：猪瘟病毒病毒感染免疫学检验基因表达ELISA检测试剂盒
- 文献传递
- 高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段,并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSVNVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1∶210,腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。
- 胡鸿惠曹振赵铁柱王斌秦亚嫚杨璐王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：NSP2单克隆抗体
- 猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒研究
- 猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的猪高度接触性致死性传染病,给世界养猪业造成巨大威胁和经济损失,被世界动物卫生...
- 乔明明申屠芬琴马永缨杨欣艳杨璐孙明
- 关键词：猪瘟抗体ELISA检测试剂盒
- 文献传递
- 狂犬病病毒糖蛋白在大肠埃希菌中的表达及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的表达狂犬病病毒糖蛋白(GP),用于狂犬病疫苗免疫抗体评估和狂犬病病毒糖蛋白功能的研究。方法采用分析软件,分析其可能的抗原表位,利用PCR方法扩增狂犬病病毒SRV9疫苗株G蛋白抗原位点区域基因,PCR产物经EcoRI和SalI双酶切后,插入大肠埃希菌表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21感受态细胞中,在IPTG诱导下表达目的蛋白,进行SDS-PAGE分析。表达蛋白进行电洗脱纯化和Western blot鉴定分析。结果成功构建了pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a表达质粒,序列分析表明,插入片段大小分别为1314 bp和1275 bp。SDS-PAGE分析结果证明,在大肠埃希菌系统中成功表达了狂犬病病毒部分糖蛋白,表达的融合蛋白含有GST标签,大小分别约为74×103和73×103。Western blot鉴定结果表明,表达产物有抗原特异性并能与狂犬病病毒抗血清反应。结论利用大肠埃希菌表达系统成功表达了狂犬病病毒部分糖蛋白,表达产物有良好的反应原性。
- 张向利赵铁柱乔明明杨璐孙明王传彬田克恭陈西钊
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白
