汪云飞
- 作品数：13 被引量：4H指数：1
- 供职机构：广东溢多利生物科技股份有限公司更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金安徽省高等学校优秀青年人才基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 一种优化改良的耐高温植酸酶PHYTH及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种优化改良的耐高温植酸酶PHYTH及其基因和应用。其氨基酸序列中的第66位用I替代L，第91位用E替代D，第102位用T替代S，第154位用L替代V，第160位用S替代A，第1...
- 吴迪汪云飞罗长财张娟陈丽芝谢建华
- 文献传递
- Sedlin蛋白稳定表达细胞株的建立
- 2008年
- 目的建立稳定表达Sedlin蛋白的细胞株,研究Sed-lin蛋白在细胞内的分布。方法扩增SEDL基因全长编码序列,经双酶切后克隆至真核表达载体pCDGFP中,将重组表达质粒转染至HEK293细胞,用G418筛选阳性克隆,荧光显微镜和Western blot检测Sedlin蛋白的表达,并观察Sedlin蛋白在HEK293细胞中的分布。结果经测序鉴定,成功构建了SEDL基因的真核表达载体,转染HEK293细胞后,Western blot检测,证明SEDL基因能够稳定有效的表达,荧光观察显示,Sedlin蛋白在细胞核和细胞质中都有表达。结论成功建立了稳定表达Sedlin蛋白的细胞株,Sedlin蛋白广泛分布于整个细胞中。
- 朱恒锐汪云飞张庆慧武标邢昕刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达转染蛋白质类细胞株
- 一种酸性β-甘露聚糖酶VMAN及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明提供一种来源于Aspergillus niger保藏编号是：CGMCC No.4235的β-甘露聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，且本发明提供了编码上述β-甘露聚糖酶...
- 张娟吴迪罗长财汪云飞陈丽芝谢建华
- 一种酸性β-甘露聚糖酶VMAN及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明提供一种来源于Aspergillus niger保藏编号是：CGMCC No.4235的β-甘露聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，且本发明提供了编码上述β-甘露聚糖酶...
- 张娟吴迪罗长财汪云飞陈丽芝谢建华
- 文献传递
- 人phb1基因在哺乳动物细胞株中的转染定位和表达
- 2010年
- 目的构建带Flag标签的phb1真核表达载体,将其转染至COS7细胞中观察phb1蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其表达。方法以含人phb1全长cDNA序列的质粒pLenti6-phb1为模板,用PCR方法扩增phb1全长序列,连接至T载体,构建pUCm-T-phb1,KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入真核表达载体pCDNA3中,将重组表达质粒pCDNA3-Flag-phb1转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测。结果经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3-Flag-phb1,转染后荧光显微镜观察phb1在COS7细胞中主要定位于胞质;经Western blot检测phb1基因在HEK293T细胞中能够有效表达。结论实验结果为进一步了解phb1的功能打下了基础。
- 邢昕刘晓颖武标汪云飞朱恒锐范礼斌
- 关键词：转染哺乳动物
- PAM14缺失突变体在哺乳动物细胞中的表达和定位
- 2011年
- 目的构建带HA标签(标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇)的PAM14缺失突变体PAM14-N和PAM14-C的真核表达载体,将其分别转染至COS7细胞中观察PAM14-N和PAM14-C蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其是否表达。方法以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板,PCR法扩增PAM14-N-HA,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入真核表达载体pCDNA3.1中,同理构建pCDNA3.1-HA-PAM14-C,将重组表达质粒pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测。结果经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C,转染后荧光显微镜观察PAM14-N在COS7细胞中主要定位于细胞核,PAM14-C定位不明显;经Western blot检测PAM14-N在HEK293T细胞中能够有效表达,PAM14-C无表达。结论实验结果确定了PAM14功能最小区域及PAM14-N的定位和表达,为进一步了解PAM14的功能奠定了基础。
- 杨军陈应炉汪云飞朱恒锐刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达转染核蛋白类
- 一种木聚糖酶及其基因、高效表达的方法和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种产木聚糖酶的菌株Escherichia coli，和从该菌株中得到的一种新型木聚糖酶V-XYL及其高效表达的方法和应用。本发明提供一种来源于Escherichia coli(...
- 罗长财吴迪汪云飞张娟陈丽芝谢建华
- 文献传递
- Sedlin突变体S124A对其与PAM14相互作用的影响
- 2009年
- 目的构建Sedlin的点突变体,研究其与PAM14在酵母中的相互作用,寻找其相互作用的位点。方法用蛋白质在线序列分析软件CPHmodels预测Sedlin蛋白的磷酸化位点,可能的磷酸化位点主要有S2、S30、S119、S124、Y115,针对其中一个磷酸化位点(S124)设计定点突变引物;以pAS-Sedlin为模板,以两条含有突变位点的互补序列为引物进行PCR扩增,将得到的PCR产物用DpnⅠ酶切除去模板,消化产物转化大肠杆菌感受态DH5α,对得到的阳性克隆进行测序;将构建的定点突变质粒pAS-SedlinS与pACT2-PAM14共转化至酵母Y190中,并对生长至合适大小的克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析。结果构建了pAS-Sedlin的定点突变质粒pAS-SedlinS,其与pACT2-PAM14共转克隆的β-半乳糖苷酶活性反应呈阳性,并且Sedlin S124A蛋白与PAM14蛋白的相互作用比野生型Sedlin蛋白与PAM14蛋白相互作用强。结论成功构建了Sedlin S124A,Sedlin蛋白的S124并不是其与PAM14在酵母中相互作用的特异性结合位点。
- 汪云飞朱恒锐张庆慧邢昕武标刘晓颖范礼斌
- 关键词：双杂交系统技术骨骺
- 一种优化改良的耐高温植酸酶PHYTH及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种优化改良的耐高温植酸酶PHYTH及其基因和应用。其氨基酸序列中的第66位用I替代L，第91位用E替代D，第102位用T替代S，第154位用L替代V，第160位用S替代A，第1...
- 吴迪汪云飞罗长财张娟陈丽芝谢建华
- PAM14与Sedlin相互作用的初步研究
- 目的利用酵母双杂交技术了解Sedlin/PAM14（protein associated with MRG, 14kD）之间的相互作用,并构建PAM14缺失突变体以及Sedlin的点突变体,研究它们在酵母中的相互作用的具...
- 汪云飞
- 关键词：酵母双杂交系统蛋白质相互作用转录调控共定位
- 文献传递
