范礼斌
- 作品数：71 被引量：125H指数：6
- 供职机构：安徽医科大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- PAM14缺失突变体在哺乳动物细胞中的表达和定位
- 2011年
- 目的构建带HA标签(标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇)的PAM14缺失突变体PAM14-N和PAM14-C的真核表达载体,将其分别转染至COS7细胞中观察PAM14-N和PAM14-C蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其是否表达。方法以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板,PCR法扩增PAM14-N-HA,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入真核表达载体pCDNA3.1中,同理构建pCDNA3.1-HA-PAM14-C,将重组表达质粒pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测。结果经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C,转染后荧光显微镜观察PAM14-N在COS7细胞中主要定位于细胞核,PAM14-C定位不明显;经Western blot检测PAM14-N在HEK293T细胞中能够有效表达,PAM14-C无表达。结论实验结果确定了PAM14功能最小区域及PAM14-N的定位和表达,为进一步了解PAM14的功能奠定了基础。
- 杨军陈应炉汪云飞朱恒锐刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达转染核蛋白类
- 抗凋亡细胞因子治疗急性放射病的实验研究进展
- 2010年
- 骨髓造血干细胞及各系造血祖细胞因其高度的增殖活性而成为辐射攻击的主要靶细胞，以往人们利用粒细胞集落刺激因子（G—CSF）或粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）等刺激残存定向造血干／祖细胞（HSPCs）增殖的造血因子作为急性辐射损伤（ARI）治疗研究的重点且卓有成效。随着科学的发展和研究的进一步深入，发现照射后造血细胞早期凋亡和坏死是导致体内造血干／祖细胞缺失的关键因素，
- 赵燕芳王欣茹范礼斌罗庆良
- 关键词：细胞因子治疗急性放射病粒-巨噬细胞集落刺激因子骨髓造血干细胞抗凋亡
- HECT类泛素连接酶Smurf1自身调控机制的研究
- 2011年
- 目的泛素连接酶Smurf1在胚胎发育、骨形成调控和细胞极性控制中具有重要的生理功能,但是其自身的泛素化降解机制尚不清楚。本论文拟研究Smurf1分子间自我调控的机制,以期揭示一种新的泛素连接酶调控方式。方法通过免疫共沉淀实验确证了Smurf1分子间存在相互作用,体内泛素化、半衰期及降解实验研究了Smurf1的自身泛素化降解。结果 Smurf1存在分子间相互作用和泛素化降解,这种分子间的相互调控是由C2和WW结构域介导。结论 Smurf1分子间存在自我泛素化修饰及蛋白酶体依赖的降解,是一种新的HECT类泛素连接酶的调控机制。
- 沈珊郭兴卢克峰张令强范礼斌
- 关键词：泛素化活性调控分子间相互作用转染
- Apak的亚细胞定位机制研究
- 2011年
- 目的探讨P53的调控分子Apak亚细胞定位的结构基础。方法在热休克及DNA损伤诱导剂MMS处理下,通过免疫荧光技术观察Apak的亚细胞定位变化,并通过激光共聚焦荧光显微镜观察Apak截短体的亚细胞定位。结果 Apak多以均匀的形式分布在细胞核质,偶见在核仁中聚集;在外界刺激后Apak核内的均匀分布减少,主要以点状的大颗粒形式在核仁中呈聚集样分布;Apak的9种截短体均可定位于核内,且在核质和核仁中具有明显的比例差异。结论在DNA损伤信号下Apak有一个从核质向核仁移位的动态过程;KRAB区可以拮抗Apak在核仁的定位,而锌指尤其是锌指数的数目(锌指数>14)则决定了Apak能否在核仁定位。
- 姚菲唐颖田春艳张令强范礼斌
- 关键词：肿瘤抑制蛋白质P53亚细胞定位核仁细胞凋亡DNA损伤转录因子
- Apak的组织表达谱及其白血病相关性分析
- 2011年
- 目的探讨P53负调控蛋白Apak的组织分布特征并分析其白血病相关性。方法利用组织斑点杂交分析Apak在多种组织中的分布情况,Northern杂交分析其在5种白血病细胞系的转录,并用RT-PCR分析Apak在32例白血病患者和12例健康人外周血中的mRNA水平。结果 Apak的组织表达谱分析表明该基因只在胎肝、胎脾以及成人唾液腺、膀胱、左右心室和心尖中高表达。在多种白血病细胞系Jurkat,AHH-1,MOLT-4,SKO-007和HL-60和部分白血病患者的外周血中Apak也呈现高转录,提示Apak在白血病发生中可能发挥重要功能。结论本研究揭示了Apak是一种具有组织特异性分布的P53负调节蛋白,其在白血病中的高表达提示其可能与该病的发生有一定的关联。
- 窦睿郭兴田春艳曾慧敏艾辉胜张令强范礼斌
- 关键词：组织表达谱白血病细胞周期转录因子
- 人COX6B1在哺乳动物细胞株中转染表达与定位的初步研究被引量：4
- 2012年
- 目的构建带FLAG标签的人野生型细胞色素氧化酶亚基COX6B1表达载体,转染至HEK 293T、COS7细胞观察COX6B1蛋白在细胞内表达与定位。方法以含人COX6B1全长cDNA序列的质粒为模板,通过上游带有FLAG标签的引物,PCR方法扩增出COX6B1全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中构建pCDNA3.1-FLAG-COX6B1表达载体。将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。结果成功构建了pCD-NA3.1-FLAG-COX6B1表达载体,其在HEK 293T细胞中能有效地表达;在COS7细胞中呈斑点状分布,且主要在胞质内分布,细胞核中未见其明显表达。结论 COX6B1在HEK293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在胞质内,这为进一步了解COX6B1的功能提供了一定的基础。
- 刘君耿慧武陈应炉刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达转染细胞定位
- Sedlin蛋白稳定表达细胞株的建立
- 2008年
- 目的建立稳定表达Sedlin蛋白的细胞株,研究Sed-lin蛋白在细胞内的分布。方法扩增SEDL基因全长编码序列,经双酶切后克隆至真核表达载体pCDGFP中,将重组表达质粒转染至HEK293细胞,用G418筛选阳性克隆,荧光显微镜和Western blot检测Sedlin蛋白的表达,并观察Sedlin蛋白在HEK293细胞中的分布。结果经测序鉴定,成功构建了SEDL基因的真核表达载体,转染HEK293细胞后,Western blot检测,证明SEDL基因能够稳定有效的表达,荧光观察显示,Sedlin蛋白在细胞核和细胞质中都有表达。结论成功建立了稳定表达Sedlin蛋白的细胞株,Sedlin蛋白广泛分布于整个细胞中。
- 朱恒锐汪云飞张庆慧武标邢昕刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达转染蛋白质类细胞株
- 催乳素A基因的克隆与表达
- 2004年
- 用PCR和限制性酶酶切方法将CS-A基因克隆到表达载体pCDGFP中,用免疫沉淀和Westernblot的方法检测转染后的表达以及表达产物在细胞中分布。结果表明表达产物的分子量与预测的一致,而且证明CS-A是一个分泌蛋白;荧光显微镜观察表明CS-A蛋白分布于细胞质中。
- 范礼斌
- 关键词：克隆
- 人通用转录因子GTFIIF2表达与定位
- 2014年
- 目的构建不同标签的人通用转录因子IIF多肽2(GTFIIF2)表达载体,观察其细胞内的表达和定位。方法设计GTFIIF2的引物,以全长cDNA序列为模板,利用聚合酶链式反应技术扩增GTFIIF2全长序列,构建pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞表达与定位;构建GST-GTFIIF2质粒,转化到BL21菌株,用IPTG诱导剂诱导融合蛋白表达,用SDS-PAGE分析诱导表达情况。结果免疫荧光法检测GTFIIF2蛋白集中分布在COS7细胞核中,在细胞质没有分布;pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒能够在HEK293T细胞中有效表达;GST-GTFIIF2在BL21菌株中很好的诱导表达。结论 GTFIIF2在COS7细胞、HEK293T细胞和BL21感受态细胞中能有效表达,为更好地了解GTFIIF2蛋白在细胞内的功能提供一定的研究基础。
- 赵健耿慧武乔正李春雨李克娟刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达蛋白定位BL21
- Ca^（＋＋）Na~＋离子对湖南产五步蛇蛇毒PLA_2酶活力的影响被引量：1
- 1995年
- Ｃａ^（＋＋）离子能极大地激活五步蛇蛇毒ＰＬＡ_２的酶活力，Ｎａ离子只能在一定程度上激活，作者推测在测定ＰＬＡ_２酶活力的底物溶液中可以不加Ｎａ~＋离子。
- 范礼斌冉永禄
- 关键词：五步蛇蛇毒酶活力PLA2
