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缪家文: 作品数：10 被引量：25H指数：3; 供职机构：南京军区南京总医院更多>>; 发文基金：南京市科技发展计划项目江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省医学重点学科基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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颗粒酶A诱导一种新奇的caspases 非依赖性细胞死亡: 颗粒酶A,是存在于细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)细胞浆中的一种丝氨酸蛋白酶,在穿孔素协同作用下通过颗粒胞吐诱导一种caspases非依赖性细胞死亡.GzmA靶向作用于一种与内质网结合的特殊的复合体--S...; 缪家文李芳秋; 关键词：细胞死亡 T淋巴细胞; 文献传递

人穿孔素真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：2: 2008年; 目的:观察克隆的人穿孔素(pfn)基因在COS-7细胞中的表达情况。方法:用PCR方法获取人pfn全长基因,将所获基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),转染COS-7细胞,RT-PCR检测pfn基因在COS-7细胞中的表达。结果:成功获得人pfn全长基因,并构建了真核表达载体。转染COS-7后,检测出pfn基因的表达。结论:人pfn全长基因可以在转染的COS-7细胞中表达。; 张春华李芳秋缪家文; 关键词：穿孔素真核表达

人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究被引量：4: 2005年; 目的:构建人颗粒溶素(GNLY)全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR技术获取人GNLY全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,W ST-8法检测细胞增殖活性。结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P<0.01和P<0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/m l pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329。结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用。; 缪家文李芳秋杨爱龙张春华; 关键词：颗粒溶素真核表达细胞抑制作用

1.人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究;2.人精子蛋白17（hSp17）作为卵巢癌诊断指标及免疫治疗靶点的基础研究: 第一部分：人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究颗粒溶素(granulysin，GNLY)是近年来发现的一种小分子蛋白，主要表达于激活的细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)的...; 缪家文; 关键词：颗粒溶素基因真核表达肝癌细胞细胞抑制作用卵巢癌

人精子蛋白17放射诱导表达细胞模型的构建被引量：3: 2007年; 目的:构建pEgr-Sp17重组质粒,并检测其在人卵巢癌细胞系HO8910中的辐射诱导表达,探索Egr-1基因调控序列辐射诱导下游基因表达的功能,建立放射诱导表达人精子蛋白Sp17的细胞模型。方法:用双酶切、粘端连接的方法构建含有辐射诱导特性的早期反应因子Egr-1和人Sp17基因的pEgr-Sp17重组质粒,利用脂质体介导其转染人HO8910细胞,用免疫细胞化学方法检测X线照射后被转染细胞中Sp17的表达。在确证Sp17能瞬时表达后,继续用含G418的RPMI1640培养基培养细胞,筛选稳定表达Sp17的细胞株。结果:测序结果和酶切鉴定均证实pEgr-Sp17重组质粒构建正确;免疫细胞化学试验表明pEgr-Sp17重组质粒转染的人HO8910细胞表达Sp17蛋白。结论:X线可诱导pEgr-Sp17重组质粒在人HO8910细胞中表达Sp17蛋白,构建了Sp17蛋白放射诱导表达的卵巢癌细胞模型。; 张春华李芳秋杨爱龙缪家文朱锡旭; 关键词：EGR-1启动子 X线

不育患者血清精子蛋白17抗体的检测及临床意义被引量：3: 2007年; 目的:检测抗精子抗体(AsAb)阳性不育患者血清中抗精子蛋白17(Sp17)的抗体,探讨该抗体在免疫性不育血清学诊断和免疫避孕方面的潜在应用价值。方法:用重组人Sp17作为抗原,ELISA法检测62例AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率及滴度,分析AsAb中抗Sp17的含量。结果:AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率为56.5%,男女之间差异无显著性。Sp17抗体占AsAb的(10.09±7.45)%,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:Sp17是重要的精子抗原组分,血清中Sp17抗体的检测可作为不育患者辅助诊断指标,同时也提示Sp17可能是一种免疫避孕候选抗原疫苗。; 张春华李芳秋杨爱龙孙伟缪家文; 关键词：精子蛋白17 抗体免疫性不育免疫避孕

颗粒酶A诱导caspases非依赖性细胞死亡: 颗粒酶A（granzyme A,GzmA）,是存在于细胞毒T淋巴细胞（CTL）和自然杀伤细胞（NK）的细胞毒颗粒中含量最多的一种丝氨酸蛋白酶,在穿孔素（perforin）协同作用下通过颗粒胞吐（granule exocy...; 缪家文李芳秋; 文献传递

人穿孔素真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达: 目的：观察克隆的人穿孔素基因(pfn)在COS-7细胞中的表达情况。方法：用PCR方法获取人pfn全长基因,将所获基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),转染COS-7细胞,RT-PCR检测pfn基因在...; 张春华李芳秋缪家文; 关键词：真核表达基因克隆 COS-7细胞; 文献传递

人精子蛋白17单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：13: 2006年; 目的:制备抗精子蛋白17(Sp17)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:克隆人Sp17cDNA,表达带有6His标记的重组Sp17,用纯化的重组Sp17免疫BALB/c小鼠制备mAb。用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆。用免疫组化染色法及阻断试验鉴定mAb的特异性。结果:获得2株杂交瘤细胞系3C12和3D6,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶64和1∶32;腹水mAb的效价分别为1∶1×105和1∶5×104。用人和大鼠睾丸组织以及人精液精子免疫组化染色及阻断试验证明,抗Sp17mAb具有良好的特异性。抗Sp17mAb也可识别卵巢癌组织中异常表达的Sp17。结论:成功地制备特异性的抗Sp17mAb,为研究该蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础。; 李芳秋杨爱龙缪家文张春华吴波张新华; 关键词：精子蛋白17 单克隆抗体免疫组化染色

人精子蛋白17基因在大肠杆菌中的表达: 目的克隆人精子蛋白17（hSp17）基因,构建重组表达载体并表达重组蛋白。方法用RT-PCR法从人睾丸中克隆hSp17基因,构建重组表达质粒pET-28a（+）/hSp17,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表...; 杨爱龙李芳秋张春华缪家文; 关键词：基因克隆基因表达; 文献传递