赵秀文
- 作品数：15 被引量：62H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院阜外心血管医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划北京市重大科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 可溶性支架转移基因的实验研究被引量：16
- 1997年
- 为解决小血管吻合术后保证其通畅率的问题，作者将可溶性支架在含Ａｄｖ５－ＣＭＶ／ＬａｃＺ质粒的高浓度葡萄糖溶液中浸泡半小时，然后置于血管腔内进行吻合，行β－半乳糖苷酶（ＬａｃＺ基因的表达产物）活性测定和组织化学染色。结果表明这种新的在体血管转基因方法能使外源性基因在血管壁内获得有效表达，从而为小血管吻合术后血栓形成和再狭窄的基因治疗提供了理论依据。
- 黄志雄郭加强李晓惠赵秀文
- 关键词：血管吻合术血栓形成再狭窄基因治疗
- 反义TR和p21双基因共表达对人主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的作用被引量：3
- 2002年
- 目的观察携带反义凝血酶受体(ATR)或/和p21的单、双基因重组腺病毒伴随病毒(rAAV)载体对人主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖与凋亡的影响。方法以携带ATR或/和p21的单、双基因rAAV感染人ASMC。半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达;MTT法测定感染不同时间点的细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期与凋亡细胞数目的变化;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色检测凋亡细胞的比率。结果单、双基因在ASMC中均获得整合,且双基因发生了共表达;病毒感染4d时,ATR组、p21组和AP双基因组的细胞存活率与对照组相比分别降低了16.7%、21.6%和29.4%;三组的G0/G1期细胞数分别为(61.8±2.9)%、(82.5±4.0)%和(80.4±6.1)%;凋亡细胞数为(4.8±0.5)%、(5.7±0.1)%和(9.2±0.9)%;AO/EB染色显示的凋亡细胞比率分别为:对照组(1.5±0.8)%、ATR组(7.2±3.3)%、p21组(10.7±5.6)%、AP组(18.3±2.7)%。结论(1)双基因共表达对抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用均较单基因具有较强的生物学效应。(2)为再狭窄的基因治疗提示了更优化的途径。
- 孟宪敏米立国赵秀文曹慧青刘冬青高润霖丁金凤
- 关键词：细胞增殖P21基因共表达主动脉平滑肌细胞
- 携带反义凝血酶受体和p21双基因共表达腺病毒伴随病毒载体的构建与包装
- 2002年
- 为探讨双基因共表达对再狭窄的防治作用 ,分别构建了含反义凝血酶受体 (ATR)或 /和 p2 1单、双基因及报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)的腺病毒伴随病毒 (AAV)载体 .上述载体经脂质体介导转染BHK 2 1细胞 ,G4 18筛选获得整合有外源基因的细胞株 .克隆形成过程中显示单、双基因转染后细胞增殖受到了不同程度的抑制 ,克隆形成速度减慢 ,细胞形态改变 ,且双基因的作用明显大于单基因 .以绿色荧光出现说明报告基因得到表达后 ,又以DNA印迹证实ATR和p2 1单、双基因已整合于细胞基因组中 ,并维持了凝血酶受体 (TR)基因的反义位置 .半定量RT PCR证实TR基因表达降低 ,p2 1基因表达升高 ,ATR和p2 1(AP)双基因得到了共表达 .以具有可提供复制和包装功能的重组单纯疱疹病毒rHSV rc/ΔU12分别感染载有不同基因的BHK细胞株 ,包装产生重组AAV (rAAV)病毒 ,并经点杂交法测定其滴度 (每毫升病毒液中所含病毒颗粒数 ) .rAAV/AP中ATR与 p2 1的病毒颗粒数分别为 1 0 2× 10 13 /ml和 1 0 8× 10 13 /ml,单基因rAAV/ATR的滴度为 6 5 4× 10 12 /ml,rAAV/P2 1为 1 0 6× 10 13 /ml,为进一步的体内外实验奠定了物质基础 .
- 孟宪敏吴小兵米立国伍志坚赵秀文刘冬青丁金凤
- 关键词：共表达再狭窄
- 人细胞骨架调节蛋白基因Nelin N端片段的原核表达被引量：2
- 2003年
- [目的 ]构建Nelin基因N端片段的原核表达载体并表达此蛋白 .[方法 ]设计带有BamHI/EcoRI酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒pGEX 5X Nelin为模板 ,用PCR扩增Nelin基因N端片段 ,并用BamHI/EcoRI酶切PCR产物和原核表达载体 pGEX 5X 1,然后用T4DNA连接酶将其连接 ,得到重组表达质粒 pGEX 5X Nelin 1,经双酶切鉴定和测序验证 .重组表达质粒转化大肠杆菌BL 2 1,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,以SDS PAGE进行分析 .[结果 ]成功构建并表达了分子量约为 43KD的NelinN端片段的融合蛋白 .[结论 ]所表达的蛋白为蛋白纯化。
- 尤昕曹慧青时娜王震赵秀文丁金凤孟宪敏
- 关键词：基因表达原核表达抗体
- 不稳定性心绞痛患者凝血和纤溶活性的动态变化被引量：15
- 1997年
- 不稳定性心绞痛患者凝血和纤溶活性的动态变化陈纪林徐义枢孙继良赵秀文于全俊吴元陈在嘉斑块破裂诱发局部非闭塞性血栓形成虽然是不稳定性心绞痛的主要诱因［１～３］，但并非惟一因素。本研究通过对１５例恶化劳力型心绞痛和１０例自发型心绞痛患者凝血和纤溶活性的动态...
- 陈纪林徐义枢孙继良孙继良赵秀文赵秀文于全俊
- 关键词：心绞痛凝血纤溶活性
- 急性心肌梗死患者静脉溶栓及肝素治疗后血浆纤维蛋白肽A的变化
- 1999年
- 目的 通过测定血浆纤维蛋白肽Ａ（Ｆｉｂｒｉｎｏｐｅｐｔｉｄｅ Ａ，简称ＦＰＡ） 了解对急性心肌梗死患者静脉溶栓及肝素治疗时凝血酶活性及停用静脉肝素改为皮下注射后的凝血酶活性。方法 选择１９９７ 年１～５ 月我院冠心病监护病房发病在６ 小时内的１１ 例ＡＭＩ患者。于溶栓治疗前、溶栓后９０ 分钟、１８０ 分钟、第１ 天（ 即静脉肝素１０００ 单位／小时）及第３ 天（ 即停用静脉肝素后）的上午８ 时和下午８ 时分别取血。同时选择冠状动脉造影阳性的非ＡＭＩ冠心病患者９ 例，仅服用阿斯匹林５０ ｍｇ／ｄ 而未用其他抗凝药物者作为对照组，于入院后第１ 天上午８ 时和下午８ 时同上取血／ 处理。标本于三个月内进行检测，采用放射免疫法定量测定血浆ＦＰＡ 的水平。结果 血浆ＦＰＡ 浓度于溶栓治疗前、溶栓后９０ 分钟及入院后第１ 天上午８ 时比对照组显著增高（ｔ 检验，Ｐ＜０－０１） ，其他时间点的血浆ＦＰＡ值与对照组之间无显著差异（ｔ 检验，Ｐ＜０－０５）。结论 本研究结果初步显示，采用纤维蛋白溶酶原激活剂（ 如ＵＫ、ｒｔ－ ＰＡ） 对发病６ 小时内的ＡＭＩ患者进行静脉溶栓治疗，同时静脉合用肝素不能完全迅速抑制凝血酶的活性；入院后第１ 天晚８ 时起凝血酶活性完?
- 宋杰刘冬青于全俊高润霖杨玉梅赵秀文杨跃进陈纪林
- 关键词：纤维蛋白肽A心肌梗塞静脉溶栓肝素
- 复杂性先天性心脏病围术期血浆血管活性多肽与血流动力学变化的关系
- 2000年
- 于存涛刘迎龙朱晓东赵秀文刘冬青
- 关键词：先天性心脏病血管活性多肽ANP
- 共表达胞嘧啶脱氨酶和胸苷激酶双自杀基因杀伤大鼠血管平滑肌细胞的机制研究被引量：2
- 2004年
- 目的 :研究共表达胞嘧啶脱氨酶 (CD)和胸苷激酶 (TK)双自杀基因对大鼠血管平滑肌细胞的杀伤机制。方法 :将表达CD和 (或 )TK的单、双自杀基因重组腺病毒载体分为 4组即Ad EF1α CD组、Ad CMV TK组、Ad EF1α CD CMV TK组和Ad lacZ组。感染原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,感染复数为 2 0。给予相应的前体药物 5 氟胞嘧啶和脱氧鸟苷后 ,用四甲基偶氮挫盐微量酶反应比色法 (MTT)和流式细胞术分析细胞死亡率。荧光染料Hoechst 3 3 3 42核染色观察凋亡细胞。琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞基因组脱氧核糖核酸 (DNA)的降解。结果 :血管平滑肌细胞可被重组腺病毒有效感染 ( 70 % )。MTT检测发现Ad EF1α CD CMV TK组双自杀基因及其前体药物 [5 氟胞嘧啶 ( 3 0 μg/ml)和脱氧鸟苷 ( 0 3 μg/ml) ]的细胞毒效应可达 91% ,高于Ad CMV TK组 ( 68% )和Ad EF1α CD组 ( 63 % )单自杀基因组。流式细胞仪分析Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的杀伤作用是以细胞毒性坏死和凋亡为主。凋亡细胞荧光染色显示Ad EF1α CD CMV TK组和Ad CMV TK组细胞的凋亡率分别为 11 0 %和 12 0 % ,高于Ad CMV LacZ组 ( 1 2 % )和Ad EF1α CD组 ( 5 0 % )。琼脂糖凝胶电泳发现在Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的基因组DNA可?
- 曹慧青孟宪敏刘冬青赵秀文丁金凤
- 关键词：双自杀基因血管平滑肌细胞胸苷激酶胞嘧啶脱氨酶凋亡细胞共表达
- 新的人心肌特异的蛋白激酶及其编码序列
- 本发明涉及一个在心肌特异表达的、与肌小节蛋白cTnI、MyBP－C、心肌α－actin、成人骨骼肌α－actin、转录因子芳香烃受体复合物组分AIP、心肌脂肪酸结合蛋白3和心肌线粒体参与脂肪酸β－氧化的羟脂酰CoA脱氢酶...
- 丁金凤赵勇孟宪敏赵秀文刘冬青曹慧青
- 文献传递
- 双基因共表达在血管再狭窄研究中的应用被引量：7
- 2003年
- 目的 观察携带反义凝血酶受体 (ATR)和p2 1的双基因载体共表达后对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,为再狭窄基因治疗寻求新途径。 方法 以携带ATR或 和p2 1的单、双基因载体重组腺病毒伴随病毒(rAAV)感染培养的人主动脉平滑肌细胞 (hASMC) ,用半定量RT PCR检测各基因的整合与表达 ,MTT法测定病毒感染后不同时间点的细胞存活率。将携带AP双基因的rAAV导入WKY大鼠拉伤侧的颈总动脉 ,免疫组织化学法分别检测凝血酶受体 (TR)和p2 1两基因在动脉壁中的表达。 结果 RT PCR结果显示 ,TR单基因的mRNA表达降低 ,p2 1单基因表达升高 ,AP双基因得到了共表达 ;MTT法测定的生长曲线显示 ,双基因对hASMC增殖的抑制作用大于两个单基因 ;免疫组织化学证实 ,AP双基因导入后 ,TR基因的表达受到完全抑制 ,p2 1基因的表达明显增加 ,血管新生内膜与平滑肌细胞的增殖受到了抑制。 结论 ATR和p2 1双基因共表达在体外可明显抑制ASMC的增殖 ,在体内可明显抑制血管内膜新生和中膜的增生。
- 孟宪敏米立国曹慧青赵秀文刘冬青高润霖丁金凤
- 关键词：血管再狭窄P21基因基因共表达平滑肌细胞
