刘冬青
- 作品数：27 被引量：100H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院阜外心血管医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划北京市重大科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新的人心肌特异的蛋白激酶及其编码序列
- 本发明涉及一个在心肌特异表达的、与肌小节蛋白cTnI、MyBP－C、心肌α－actin、成人骨骼肌α－actin、转录因子芳香烃受体复合物组分AIP、心肌脂肪酸结合蛋白3和心肌线粒体参与脂肪酸β－氧化的羟脂酰CoA脱氢酶...
- 丁金凤赵勇孟宪敏赵秀文刘冬青曹慧青
- 文献传递
- 心肌特异表达基因p93在四种心血管疾病中血清水平的差异及其意义被引量：3
- 2006年
- 目的研究心肌特异表达的新激酶基因p93在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)、扩张性心肌病(DCM)、先天性心脏病(CHD)和风湿性心脏病(RHD)中的作用。方法以杂交瘤技术制备p93单克隆抗体;应用酶联免疫吸附测定(ELISA)直接法检测正常人与上述4种疾病患者血清中p93的表达状况及血清浓度的差异。结果成功制备了人p93单克隆抗体,效价达1:100 000;正常人及CAD、DCM、CHD、RHD患者血清中均有p93的表达;正常人血清水平对数值为2．32±0．19;4种疾病患者的p93血清水平(对数值分别为2．46±0．22,2．47±0．20,2．58±0．26,2．49±0．19)均高于正常人(P<0．05)。其中CHD组明显高于正常对照组及CAD组(P<0．05)。结论p93基因与这4种疾病均有密切关系,以CHD尤为突出。推测该基因可能在上述各疾病的发生、发展过程中起着重要作用,但其机制亟待进一步探讨。
- 郑晓静刘冬青时娜曹慧青田野王来元孟宪敏
- 关键词：心血管疾病基因酶联免疫吸附测定细胞凋亡
- 心肌特异表达基因p93的原核表达及鸡卵黄抗体的制备被引量：5
- 2005年
- 目的在大肠杆菌中高效表达心肌特异表达基因p93,以此作为抗原免疫产蛋母鸡,制备抗p93蛋白鸡卵黄抗体(IgY)。方法将p93基因分别插入原核表达载体pGEX-5X-1、pBV220、pET28a(+)中,选取表达量最高的载体进行表达纯化,其产物免疫产蛋母鸡。结果插入pET28a(+)中N端带有His标签的p93表达水平最高,且以包涵体形式存在,从含有pET28a-p93质粒的1L培养的菌液中可获得3mg纯化的p93蛋白。免疫产蛋母鸡,末次免疫后其卵黄抗体最高滴度达到1∶64000,Westernblot结果显示该抗体具有高度特异性。结论此抗体的制备为新基因p93的检测提供了良好的工具。
- 尤昕时娜赵秀文柳明洙刘冬青曹慧青孟宪敏
- 关键词：大肠杆菌蛋黄
- 自发性高血压大鼠肌肉注射心钠素基因的降压作用被引量：4
- 1997年
- 目的：研究骨骼肌注射重组的人心钠素（ＡＮＦ）基因对高血压动物的降压效应及机制。方法：用反转录酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从人胚胎脑组织克隆出全长人ＡＮＦ互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ），并将其重组进质粒ｐｃＤＮＡ３，形成重组质粒ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ。给５周龄（幼年）和１１周龄（成年）卒中易感型自发性高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）的股四头肌分别注入２００μｇ和６５０μｇｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ，并用放射免疫分析、ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交和免疫组化技术检测人ＡＮＦｃＤＮＡ在体内的表达。每周测血压１次。最后在麻醉下收集尿和血，测定某些生化参数。结果：一次肌肉注射人ＡＮＦｃＤＮＡ可明显延缓幼年ＳＨＲｓｐ的血压升高；能降低成年ＳＨＲｓｐ的血压达２．７～４．０ｋＰａ（２０～３０ｍｍＨｇ），并伴有血浆ＡＮＦ浓度的明显升高及尿量、尿钠排泄的增加，局部肌肉组织的信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）和ＡＮＦ表达阳性。结论：肌肉注射人ＡＮＦ基因可引起ＳＨＲｓｐ的持续性血压下降，显示了人ＡＮＦ基因对高血压患者降压治疗的可能性。
- 丁金凤秦阳君孙巨忠陈光慧陈光慧赵秀文汤健
- 关键词：心钠素基因高血压
- 反义凝血酶受体基因表达对猪主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用被引量：7
- 1999年
- 目的寻找抑制血管损伤后血管内皮增生的有效方法以预防介入治疗后再狭窄的发生。方法利用重组ＤＮＡ技术构建了含有部分反义凝血酶受体（ＡＴＲ）ｃＤＮＡ片段的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ＡＴＲ，应用超大球囊损伤及高胆固醇饲喂法建立了小型猪主动脉内皮损伤模型并培养了其主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ掺入及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ观察ＡＴＲ的表达对猪ＡＳＭＣ增殖及生长因子基因表达的影响。结果ＡＴＲ基因的稳定表达：（１）能抑制ＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成（正常猪ＡＳＭＣＤＮＡ合成下降４１．８％，而内皮损伤血管下降５０３％）；（２）能从ｍＲＮＡ及蛋白水平抑制ＡＳＭＣ凝血酶受体基因的表达；（３）能使猪ＡＳＭＣ中ＰＤＧＦＡ链及ｂＦＧＦ的表达明显降低。结论ＡＴＲ可有效地抑制猪ＡＳＭＣ的增殖与凝血酶受体所介导的细胞内信号传导有关。
- 张茜姜玉新刘冬青丁金凤
- 关键词：ATR基因表达平滑肌细胞增殖
- 氯沙坦对高血压病人肾素活性的影响被引量：2
- 2002年
- 目的 :研究血管紧张肽II受体阻断剂氯沙坦对原发性高血压病人的降压疗效及其对肾素活性水平的影响。方法 :坐位舒张压 12 .7～ 15 .2kPa的原发性高血压病人 36例 ,经 1wk药物洗脱期 ,2wk安慰剂期后服用氯沙坦 5 0mg ,po ,qd ,4wk末坐位舒张压≥ 11.7kPa者剂量加至 10 0mg ,po ,qd× 4wk。服用氯沙坦前后测坐位血压和立位血浆肾素活性水平。结果 :8wk末平均动脉压从 15 .2kPa±1.1kPa下降至 13.7kPa± 1.1kPa(P <0 .0 1)。平均血浆肾素活性水平从 1.5 5 μg·L- 1·h- 1增加至5 .5 4 μg·L- 1·h- 1。结论 :氯沙坦使肾素活性水平增加 。
- 黄洁蒋文贾友宏李一石刘冬青
- 关键词：氯沙坦高血压肾素活性肾素-血管紧张肽系统
- Nelin的肌动蛋白结合特性及与其相互作用蛋白质的筛选被引量：5
- 2004年
- 为了研究人新基因nelin及其心肌表达产物Nelin蛋白的生物特性,并寻找能够与其发生相互作用的蛋白质,对Nelin蛋白的全长及其部分结构域进行了肌动蛋白结合共沉淀实验,并在真核细胞内进行了免疫荧光共定位实验.结果发现,在体外共沉淀和细胞内共定位实验中Nelin均表现出同肌动蛋白相结合的能力.进一步采用酵母双杂交的方法将Nelin与人心脏cDNA文库进行杂交筛选,得到了3个阳性克隆分别为细丝蛋白(Filamin)C亚型、肌联蛋白(Titin)N2B亚型和胰蛋白酶抑制物重链前体(ITIH).通过免疫共沉淀实验,验证了Nelin能够同Filamin的羧基末端免疫球蛋白样结构发生相互作用.通过上述实验证明了Nelin为一个新的肌动蛋白结合蛋白,并且能够同Filamin相结合.由此推论新基因nelin的心肌表达产物Nelin是一个细胞骨架相关蛋白并且很可能作为一个膜-细胞骨架连接蛋白,起到了参与细胞黏着斑形成的过程.
- 王震孟宪敏曹慧青刘冬青冯艳尤昕王茵郭莲军屈伸
- 关键词：肌动蛋白结合蛋白相互作用蛋白白质新基因阳性克隆
- 心肌特异表达基因p93的激酶及丝氨酸结构域在大肠杆菌中的高效表达被引量：3
- 2004年
- 目的 在大肠杆菌中高水平表达并分离纯化心脏特异表达基因p93的激酶与丝氨酸结构域片段。方法 利用DNA重组技术 ,构建C末端带有 6×His标签的p93激酶与丝氨酸结构域(p93 C)片段的原核表达载体pET2 8a p93 C。对诱导表达条件和包涵体洗涤条件优化后 ,用Ni2 +金属螯合吸附层析柱纯化。结果 成功构建了pET2 8a p93 C原核表达载体 ,诱导后摇床转速在 35 0r/min下表达量最高 ,包涵体洗涤在超声条件下较好 ,分离纯化后从 10 0ml菌液中可获得 2 5mg蛋白。结论建立了高效稳定的p93 C原核表达体系以及较好的包涵体洗涤方法。
- 尤昕时娜柳明洙曹慧青刘冬青孟宪敏
- 关键词：原核表达
- 反义凝血酶受体和p21双基因共表达对损伤的大鼠颈总动脉的影响
- 2001年
- 目的 :观察反义凝血酶受体 (ATR)和 p2 1双基因治疗对WKY大鼠颈总动脉损伤后新生内膜的抑制效果 ,探寻基因治疗再狭窄的有效途径。 方法 :将 42只雄性WKY大鼠随机分成基因治疗组 (导入rAAV/AP组 ,n =18)、载体对照组 (导入rAAV/GFP组 ,n =18)和正常对照组 (n =6 )。构建含有ATR和 p2 1双基因及含有绿色荧光蛋白 (GFP)基因的腺病毒伴随病毒(AAV)载体pSNAV/AP和 pSNAV/GFP ,用重组单纯疱疹病毒 (rHSV )生产体系包装重组腺病毒伴随病毒 (rAAV ) :rAAV/AP和rAAV/GFP。将rAAV/AP或rAAV /GFP导入拉伤的WKY大鼠的颈总动脉。分别于术后 2、 4、 6周取材 ,用半定量—逆转录多聚酶链反应和免疫组织化学方法检测凝血酶受体 (TR)和 p2 1在动脉壁中的表达。图像分析和统计学检验双基因的疗效。 结果 :逆转录多聚酶链反应和免疫组织化学结果显示外源基因已导入血管壁的新生内膜和中膜并获得稳定表达。图像和统计学分析说明 :基因治疗后 2、 4和 6周 ,双基因治疗组 ( p2 1和ATR)的颈总动脉内膜厚度分别较载体对照组组内膜减少 5 9 2 %、 5 8 7%、 6 4 1%;中膜厚度分别减低 7 8%、 10 8%、 8 3%;中膜细胞密度减低 30 0 %、2 9 4 %、 2 6 2 %。 结论 :ATR和p2
- 米立国孟宪敏赵秀文刘冬青王学礼吴小兵丁金凤
- 关键词：P21基因治疗重组腺病毒血管成形术
- 论实验室仪器设备的管理被引量：4
- 2007年
- 仪器设备的管理是实验室的重点工作内容之一,如何进行管理,不同实验室有自己独特的方式。本文仅就如何对仪器设备进行分类管理进行了初探。
- 叶珏刘冬青时娜宋莉王来元孟宪敏
- 关键词：分类表
