郑敬民
- 作品数：59 被引量：267H指数：10
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金军队“十五”重点课题资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 糖尿病肾病小鼠新相关基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
- 2003年
- 目的 :构建小鼠“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因表达载体pPRO 6AB ,了解此表达载体在大肠杆菌中表达的情况。 方法 :从克隆有“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因cDNA的载体pUCm 6AB中切取长约 1 1kb的“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因cDNA ,将它克隆到原核表达载体pPROTet E的多克隆位点中。以限制性内切酶酶切分析的方法对重组克隆进行初步鉴定 ,以测序法对重组子进行验证。在确证得到了预期的表达载体pPRO 6AB后 ,以氯化钙转染法将表达载体导入大肠杆菌BL2 1PRO中作蛋白表达分析。蛋白分析方法采用SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,所用胶浓度为 1 0 % ,交联度为 3 3 %。电泳结束后利用考马丝亮蓝染色法进行染色。 结果 :得到了预期的“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因原核表达载体pPRO 6AB ;“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因成功地在大肠杆菌中实现了表达。 结论 :我们成功地构建了小鼠“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因表达载体pPRO 6AB ,在大肠杆菌中成功地进行了“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因的表达 ,从而为进一步研究“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因编码蛋白的结构和功能 ,探讨“REKENcDNA 0 61 0 0 0 6H1 0”基因在糖尿病肾病发生。
- 郑敬民刘志红张鑫黎磊石
- 关键词：糖尿病肾病小鼠基因表达载体大肠杆菌克隆
- 基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用
- 2001年
- 目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的置换型打靶载体 ,经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后 ,用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞 R1株进行基因转染 ,经 G418/ 6 - TG(6 - thioguanine)分组药物筛选 ,进行 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo载体的应用研究。结果 :得到了与设计一致的置换型打靶载体 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo;将线性化的打靶载体导入 ES细胞后 ,能与靶位点有效地发生同源重组 ,获得了 2 0个靶基因被灭活了的 ES细胞克隆。结论 :此研究成功构建了含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6针对小鼠 HPRT基因位点的置换型打靶载体 。
- 郑敬民李坚杨桦傅继梁
- 关键词：基因打靶HPRT基因CRE重组酶小鼠
- CYP3A5和MDR1基因多态性与普乐可复血药浓度的关系
- 张鑫刘志红郑敬民陈朝红唐政陈劲松黎磊石
- 普乐可复血药浓度与肝药酶P450 3AP1和多药耐药基因多态性的关系被引量：7
- 2003年
- 目的 :探讨普乐可复血药浓度的个体间差异与其在体内吸收、代谢相关基因肝药酶P4 5 0 3AP1(CYP3AP1)和多药耐药基因 1(MDR1)多态性的关系。 方法 :观察 4 1例口服普乐可复治疗的狼疮或膜性肾病患者的体重、普乐可复剂量、普乐可复全血谷浓度 ,并利用PCR 限制性片断长度多态性的方法检测患者CYP 3AP1基因— 4 4位A/G和MDR1基因 3435位C/T多态性 ,分析浓度 /剂量比与基因型的关系。 结果 :CYP 3AP1基因为AA型患者的血药浓度明显高于AG或GG型 (15 1 3± 93 4 ,n =2 1vs6 9 2± 39 4 ,n =2 0 ,P <0 0 0 1) ,MDR1基因为CC型患者的血药浓度明显低于CT或TT型 (73 7± 38 2 ,n =12vs 12 6 8± 91 3,n =2 9,P <0 0 5 )。 结论 :CYP 3AP1和MDR1基因多态性与普乐可复的血药浓度显著相关。根据上述基因不同基因型药物代谢的特点 ,有针对性地进行剂量调整 ,或在用药前通过检测基因型更合理地选择患者 ,有助于提高普乐可复的疗效 。
- 张鑫刘志红郑敬民陈朝红陈强牛建英黎磊石
- 关键词：普乐可复血药浓度免疫抑制剂多药耐药基因1多态性
- 高表达C3aR的肥大细胞在糖尿病肾病患者肾组织中的分布及病理意义分析被引量：9
- 2011年
- 选取糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期、中期、晚期以及正常移植供肾各15例,分别作为DN早期组、中期组、晚期组和正常对照组,利用各个病例的肾穿刺组织标本进行C3aR免疫组化染色,分析各组中高表达C3aR浸润细胞的数量和分布特点,及其与DN发生、发展的关系,利用连续切片、免疫荧光双套色染色、免疫电镜、及甲苯胺蓝染色等方法对DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞进行细胞类型鉴定.结果表明:a.光镜和免疫电镜的形态学分析显示DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞在形态上具有肥大细胞的特点,免疫荧光双套色染色的分析显示,C3aR浸润细胞CD45阴性、CD68和类胰蛋白酶阳性,与肥大细胞的情况一致,甲苯胺蓝特殊染色进一步证实这是一种肥大细胞.b.正常移植供肾组织中虽有肥大细胞分布,但数量很少;从DN早期组到DN中期组,再到DN晚期组,肾组织中肥大细胞的数量有一种不断增加的趋势;DN患者肾组织肥大细胞的数量与24 h尿蛋白和血肌酐水平均具有很好的线性相关性.上述工作不仅揭示了在DN发生发展过程中肥大细胞在DN患者肾组织中的数量及分布情况,提示肥大细胞很可能参与了DN的发生发展过程,同时,DN患者肾组织肥大细胞高表达过敏毒素C3a受体C3aR的发现,提示C3a/C3aR通路很可能在DN患者肥大细胞的招募和激活过程中有重要作用.
- 郑敬民朱小东张明超王建平徐丽丽刘志红
- 关键词：过敏毒素糖尿病肾病肥大细胞
- 一个糖尿病肾病相关新基因的筛选、克隆和序列分析被引量：9
- 2004年
- 利用Affymetrix寡核苷酸基因表达谱芯片对 2型糖尿病肾病模型动物———db/db小鼠的肾脏基因表达谱进行了研究 .在此基础上 ,利用末端快速扩增法和RT PCR方法 ,对筛选出来的一个糖尿病肾病相关表达序列标签(EST)进行了cDNA克隆和表达分析 .得到了一长为 1 4kb的cDNA ,并暂时命名为mdnr4 1 1 (mousediabeticnephropathyrelatedmRNANo 4 1 1 ) .序列分析和网上数据库比对说明 ,这是一个新的cDNA序列 .利用DNA序列分析软件对此cDNA阅读框进行的预测性分析表明 ,此cDNA包含了一个完整的阅读框序列 .其编码的蛋白质由 90个氨基酸残基组成 .以氨基酸序列进行的同源性搜索表明 ,此多肽只与Archaeoglobusfulgidus的Na+ /H+ antiporter(napA 2 )具有局部的同源性 .以上结果表明 ,mdnr4 1 1是一个功能完全未知的小鼠糖尿病肾病相关新基因 .mdnr4 1 1cDNA的成功克隆 ,为进一步研究其生物学功能及其在糖尿病肾病发生。
- 郑敬民刘志红张鑫恽时峰黎磊石
- 关键词：基因芯片糖尿病肾病DB/DB小鼠
- 血管生成素样蛋白的研究进展被引量：6
- 2007年
- 血管生成素样蛋白(ANGPTL)是近年来发现的一类新的分泌性糖蛋白。虽然ANGPTL与血管生成素(Ang)在组成上具有一定的同源性,也具有相似的结构域,但在功能上与Ang又有明显的不同。作为一类新的蛋白族群,ANGPTL的许多方面仍有待于研究。作者就ANGPTL的结构和功能等方面的研究情况作一综述,并对AN-GPTL研究中存在的一些问题提出了一些看法。
- 郑敬民朱文杰
- 关键词：血管发生
- 条件性基因打靶及其研究进展被引量：3
- 2001年
- 条件性基因打靶是在常规的基因打靶 (基于同源重组原理的基因打靶 )的基础上 ,结合重组酶介导的位点特异性重组技术而发展起来的一种基因打靶新方法。与常规的基因打靶方法相比 ,它对生物基因组的修饰具有时空可控性 ,显示出广阔的应用前景。本文主要就条件性基因打靶的原理、方法。
- 郑敬民李坚傅继梁
- 关键词：CRE重组酶
- 基于Flp重组酶介导的盒式交换HPRT位点定点转基因研究
- 2001年
- 以电穿孔转染法将构建的交换质粒pF-HPRTF3和Flp表达载体pCMV-Flp共转染已在基因组HPRT位点整合有交换盒F-Neo-F3结构的ES细胞F18,经HAT筛选得到HAT抗性ES细胞克隆;G418敏感性试验和基因组Southern杂交表明,所分析的12个HAT抗性克隆中有3个克隆发生了预期的盒式交换重组,转基因定点整合的相对效率为25%。这一结果表明,Flp重组酶是可以在HPRT位点有效地介导盒式交换反应的,我们提出的利用Flp重组酶介导的盒式交换反应建立基于HPRT位点的转基因定点整合体系的策略是可行的。
- 郑敬民贺艳傅继梁
- 关键词：介导
- CXCL16在db/db糖尿病肾病小鼠肾组织中的表达被引量：3
- 2010年
- 目的:了解在糖尿病肾病(DN)发生发展过程中,CXCL16在db/db小鼠肾脏中的表达变化,并对其与DN的相关性进行初步探讨。方法:选取分别代表DN不同发展阶段的4、8、12、16和20周龄的db/db小鼠和同龄db/m小鼠各6只;取左肾的一半用于提取总RNA;右肾用于制作冰冻切片、石蜡切片、电镜标本等;利用半定量RT-PCR的方法分析各组小鼠肾脏中CXCL16 mRNA相对表达水平,以免疫组化的方法分析CXCL16蛋白在各组小鼠肾组织中的表达和分布情况;同时测定各组小鼠的体重、血糖、血三酰甘油、血胆固醇和24h尿白蛋白排泄量,分析各组小鼠的肾脏组织病理情况以了解小鼠DN的发生发展情况。结果:(1)与同龄的db/m小鼠相比,4周龄的db/db小鼠的体重有所增加,但血糖、血三酰甘油、血胆固醇、24h尿白蛋白排泄量均无明显差异,肾脏组织病理分析也无明显变化,说明4周龄的db/db小鼠尚未发生糖尿病;但8周龄的db/db小鼠的血糖、24h尿白蛋白排泄量均已有明显升高,且肾组织中也已出现肾小球肥大、系膜区扩张、基膜增厚等DN病理改变,说明8周龄的db/db小鼠已发生了DN,但从各方面的情况来看,8周龄db/db小鼠的DN仍较轻,可代表DN早期的情况;自8周龄以后,db/db小鼠的血糖、血三酰甘油、血胆固醇、尿白蛋白排泄量以及肾小球肥大、系膜区扩张、基膜增厚等情况随着鼠龄的增长而不断的增加,说明db/db小鼠的DN不断进展。(2)与同龄的db/m小鼠相比,CXCL16在4周龄的db/db小鼠肾脏中的表达并没有明显变化;但8周龄db/db小鼠肾脏中CXCL16的表达水平已有所增加。此后,随着鼠龄的增加,DN的进展,CXCL16的表达水平逐渐增加。(3)在成年正常小鼠,CXCL16主要分布于小鼠肾脏髓质的小管中,相对来说在肾脏皮质中的分布较少;在DN小鼠,分布在肾小管和小球中的CXCL16均有明显增加;且肾小球CXCL16的表达增加主要发生在足细胞的位置�
- 郑敬民朱小东张明超王建平徐丽丽谌达程刘志红
- 关键词：CXCL16糖尿病肾病DB/DB小鼠
