郭凯
- 作品数：14 被引量：23H指数：3
- 供职机构：华农动物保健品股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 马立克病病毒1型LZ1309株的分离鉴定与生物特性分析被引量：4
- 2015年
- 从免疫马立克病(MD)HVT和CVI988疫苗的甘肃某规模化鸡场采集MD阳性病鸡抗凝全血,分离淋巴细胞,接种于鸡胚成纤维细胞,分离出1株马立克病病毒(MDV)。病毒蚀斑纯化后经PCR和间接免疫荧光鉴定,该毒株为MDV1型毒株,命名为LZ1309株。PCR扩增并测序致瘤基因meq。核苷酸同源性分析结果显示,与国内分离株LS株的同源性最高(99.9%),与CVI988株的同源性最低(98.8%)。氨基酸序列分析显示,氨基酸突变位点符合国内强毒株的特征。为掌握LZ1309株的致病力,进行了LZ1309株攻毒试验。结果显示,LZ1309株攻毒组鸡的死亡率为13.3%,攻毒组鸡体重显著降低,肝、脾、腺胃乳头和心脏均出现肿瘤结节,胸腺和法氏囊严重萎缩。PCR检测攻毒鸡的器官组织,均能扩增到MDV1型强毒株meq基因的特异性条带。本研究成功分离鉴定出1株MDV强毒株,此结果为研究国内MDV毒力演化、致病机理和疫苗研发奠定了重要基础。
- 李慧敏罗琼刘郁夫郭凯赵兵温良海陈瑞爱
- 关键词：马立克病病毒生物特性
- 马立克氏病毒强毒GD0908株感染性克隆的构建
- 2013年
- 为研究马立克氏病毒(MDV)新型疫苗及MDV致病机理,将MDV强毒GD0908株的全基因组作为细菌人工染色体(BAC)转化进大肠杆菌,构建GD0908株的感染性克隆。利用同源重组将BAC载体插入MDV基因组的US2区,将包含BAC载体的MDV DNA电转化入大肠杆菌菌株DH10B,最后将鉴定成功包含GD0908株全基因组的BAC DNA转染鸡胚成纤维细胞(CEF),成功拯救出重组病毒,命名为rGD0908,其与父代病毒GD0908株在CEF细胞上的生长速度没有差异。该感染性克隆将为MDV的相关研究提供技术平台。
- 陈瑞爱罗琼郭凯刘正伟王亚欣
- 关键词：马立克氏病病毒细菌人工染色体感染性克隆
- 禽戊型肝炎病毒组织切片免疫荧光检测方法的建立及应用被引量：2
- 2014年
- 为建立对禽戊型肝炎病毒(HEV)鉴别诊断的组织切片免疫荧光方法,制备禽HEV ORF2蛋白的单因子血清,对感染HEV、禽白血病病毒(ALV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)鸡的病变肝组织切片进行间接免疫荧光检测。结果显示制备的禽HEV ORF2蛋白的单因子血清具有良好的特异性,利用组织切片免疫荧光方法能够特异地检测禽HEV的感染,从而有效地区分HEV与易混淆的ALV、REV的感染。建立的鉴别诊断禽HEV的组织切片免疫荧光方法,可以有效地诊断禽HEV感染,给实验室诊断带来极大的方便。
- 陈瑞爱李延鹏同戈郭凯刘正伟
- 关键词：组织切片免疫荧光
- 肉鸡硫氧还蛋白原核表达载体的构建、蛋白纯化及其活性鉴定
- 2014年
- 根据GenBank中肉鸡硫氧还蛋白(Trx)基因的cDNA序列及载体pET28a(+)中的多克隆位点设计引物,进行Trx克隆和原核表达载体的构建,并在大肠杆菌中表达。应用镍柱亲和层析对该融合蛋白进行纯化;采用胰岛素还原法对重组Trx进行活性鉴定。结果显示:成功构建了pET28a-Trx重组质粒,纯化的目的蛋白纯度可达到90%,质量浓度为4g/L。纯化的重组Trx(GgTrx)具有较高的还原胰岛素二硫键能力,并且呈现出浓度依赖效应。本研究为Trx蛋白应用于治疗氧化应激性疾病奠定了基础。
- 余文兰胡莲美王朵朵吴富旺张晓战郭凯郭剑英唐兆新
- 关键词：硫氧还蛋白肉鸡原核表达蛋白纯化
- 不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响
- 选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加0.045、0.1、0 4和0.8 mg/kg硒.结果表明：1)Ⅰ组日粮能显著降低小鼠肝脏中的硒沉积量(P＜0...
- 郑良焰张琴刘碧涛郭凯余文兰刘正伟陈叶郭翠丽潘家强唐兆新
- 关键词：肝脏睾丸
- 日粮硒对小鼠肾脏硒沉积及抗氧化酶基因表达的影响
- 硒元素自1817年被发现以来,其在动物机体抗氧化、免疫力调节、代谢调节及癌症预防治疗等方面的功能都已得到证实.硒元素在体内主要以硒蛋白的形式发挥生物学作用,硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,T...
- 刘碧涛张琴郑良焰郭凯余文兰刘正伟郭翠丽陈叶唐兆新
- 关键词：硒抗氧化酶基因表达
- 不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响被引量：6
- 2013年
- 选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。
- 郑良焰张琴刘碧涛郭凯余文兰刘正伟陈叶郭翠丽唐兆新
- 关键词：肝脏睾丸
- 不同启动子表达载体的构建及其体外活性分析被引量：2
- 2014年
- 本研究以禽网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜糖蛋白(envelope,env)基因作为报告基因,定量检测不同启动子在体外的转录活性,为研发马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)活载体疫苗、选择适宜的启动子提供依据。本试验构建6个含不同启动子,且能表达env基因的重组质粒,并将构建好的重组质粒转染到鸡胚成纤维细胞中,通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量PCR检测不同启动子的表达转录水平。研究证明6种启动子均能使env基因在体外获得表达,且不同启动子的转录活性不同。比较发现MDV自身启动子相对其他组启动子的转录活性较弱,pec启动子的转录活性最强。
- 刘正伟李慧敏黄妙容郭凯王建丽李延鹏陈瑞爱
- 关键词：启动子活性分析
- 日粮硒对小鼠肾脏硒沉积及抗氧化酶基因表达的影响被引量：2
- 2014年
- 本试验旨在研究日粮硒对小鼠肾脏硒沉积及抗氧化酶基因表达的影响。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别以0.045、0.1、0.4和0.8mg/kg含硒量的试验日粮连续饲喂小鼠8周。结果显示,肾脏硒沉积水平随日粮中硒含量增加而升高,Ⅰ组显著低于其他组(P<0.05),饲喂到第56天,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组组间差异均不显著(P>0.05);Ⅰ组的硫氧还蛋白还原酶2(TrxR2)mRNA表达量显著低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ组高于Ⅲ组,且差异显著(P<0.05);Ⅰ组的超氧化物歧化酶1(SOD1)和超氧化物歧化酶2(SOD2)mRNA表达量均显著低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ组间SOD1表达量差异不显著(P>0.05),SOD2表达量差异显著(P<0.05),且Ⅱ组高于Ⅲ组;Ⅰ、Ⅱ组的过氧化氢酶(CAT)mRNA表达量显著高于Ⅲ组(P<0.05),但Ⅰ、Ⅱ组间差异不显著(P>0.05)。结果表明,补硒可提高肾脏组织硒沉积水平,且随着饲喂时间增加,肾脏硒沉积会在高硒添加组中趋于饱和;缺硒和补硒过量都会降低肾脏TrxR2、SOD1、SOD2和CAT mRNA的表达水平。
- 刘碧涛张琴郑良焰郭凯余文兰刘正伟郭翠丽陈叶唐兆新
- 关键词：硒抗氧化酶基因表达
- 禽网状内皮组织增生症病毒的分离鉴定、全基因序列分析及致病性试验被引量：3
- 2014年
- 本试验采集广东某鸡场疑似禽网状内皮组织增生症患病鸡病料并进行处理,经接种DF1细胞、聚合酶链式反应(PCR)及特异性间接免疫荧光试验(IFA),分离鉴定出1株禽网状内皮组织增生症病毒(REV),命名为GD1210。依据已发表的REV前病毒全基因组序列设计并合成6对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示,该分离株基因组序列全长8443bp。将该分离株的基因序列与国内外各参考株相应序列进行同源性比对分析,与SNV株亲缘关系最近,核苷酸同源性最高。将该分离株感染1日龄SPF鸡以鉴定其致病性,结果显示该分离株使SPF鸡产生严重的免疫抑制作用。
- 王建丽郭凯刘正伟刘郁夫刘传高赵大伟李慧敏董楠陈瑞爱
- 关键词：网状内皮组织增生症病毒
