钟剑波
- 作品数：6 被引量：25H指数：2
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 广东省不同亚型AIDS病人HIV-1 gp120 V3环基因变异及其利用辅助受体的情况被引量：8
- 2015年
- 目的了解广东省艾滋病病毒（HIV）主要流行亚型及V3环氨基酸的变异特点,并分析病毒株利用辅助受体的情况。方法收集2013-2014年期间,在广州市第八人民医院住院的艾滋病（AIDS）病人的血浆256份,巢式聚合酶链反应（Nested-PCR）方法扩增env基因C2-C3（HBX2：6972~7365）区并直接测序,用Geen tool软件将基因序列翻译为氨基酸序列进行比对和分析。结果共有214例（83.6%）扩增成功,其中143例（66.8%）为CRF01_AE;45例（21.0%）为B/C重组型;26例（12.1%）为CRF01_AE/B亚型。V3环顶端四肽基序,73.4%（157/214）为GPGQ,11.7%（25/214）为GPGR,8.9%（19/214）为GPGK,2.3%（5/214）为GQGQ,其他为（GPGG、GLGH、GPGS、GPGH）3.7%（8/214）。使用国际上普遍应用的4种软件（PSSMx4r5、SAAC＋BLAS、PSSMsisi、Geno2pheno）分别对V3环顶端四肽基序利用辅助受体的情况进行评估。综合评估结果显示,132例（61.7%）利用CCR5,67例（31.3%）利用CXCR4。在15例（7.0%）无辅助受体评估结果的病例中,14例为CRF01_AE,1例为CRF01_AE/B。研究还发现,71.1%（32/45）B/C重组型的V3四肽基序单一使用PSSMsisi软件的评估结果,与4种软件综合评估结果的一致率为100%。结论目前广东省HIV-1的主要流行株仍是CRF01_AE,其V3环氨基酸高度变异,顶端四肽基序主要是GPGQ。对毒株利用辅助受体的情况,宜采取国际普遍使用的4种软件进行综合分析。
- 饶嫚蔡卫平魏绍静肖桂娥钟剑波
- 关键词：辅助受体CCR5CXCR4
- 广州地区丙型肝炎患者HCV基因分型研究被引量：15
- 2014年
- 目的研究广州地区丙型肝炎患者HCV基因型分布的变化情况。方法收集207例HCV RAN阳性丙型肝炎患者血清,对其HCV Core区(C区)和NS5B区基因序列进行RT-nPCR扩增,两区扩增成功的PCR产物进行基因测序,测序结果分别与相应的参照株序列比对,构建系统进化树,两区基因分型结果一致者确定HCV基因亚型。结果 185例HCV C区和NS5B区都扩增成功,其中179例两区基因分型结果一致。共检出1、2、3、6型4种基因型和8种基因亚型,其中1b型占40.78%(73/179),6a型占27.37%(49/179),3b型占11.73%(21/179),3a型占8.94%(16/179),2a型占6.15%(11/179),1a型占3.91%(7/179),2b型占0.56%(1/179),6n型占0.56%(1/179)。1b株可分为A、B、C三大簇,A簇与中国广泛流行1b株接近、B簇与中国中部及南部地区流行1b株接近,6a株分为Ⅰ、Ⅱ两大簇,与献血人群及静脉吸毒人群中6a型株接近。结论广州地区丙型肝炎患者HCV基因型以1b、6a、3型为主,存在多种亚型;1b型株包含中国大部分地区的1b型株,6a、3型已取代2a型分别成为第二、三主要流行基因型;未发现6型变异株。
- 肖桂娥魏绍静张复春陈伟烈兰芸饶嫚钟剑波
- 关键词：丙型肝炎病毒基因型C区进化树
- 甲型H1N1流感病毒HA1、NAe重组蛋白的表达及纯化效率研究
- 2013年
- 目的研究甲型H1N1流感病毒血凝素HA1及神经氨酸酶NAe重组蛋白的表达效率及纯化方法。方法在2009年广东省首株甲型H1N1流感病毒的HA和NA全长基因克隆的基础上,去除其信号肽(或信号锚定序列)和跨膜结构,在原核表达体系中表达HA1和NAe蛋白,采用SDS-PAGE和Western-blot法研究蛋白的表达效率、IPTG诱导作用及His Bind树脂纯化对蛋白免疫活性的影响。结果获得了具有免疫活性的高浓度和高纯度的HA1-57 290 Mr及NAe-69 280 Mr重组蛋白。结论截短优化的甲型H1N1流感病毒HA1、NAe重组基因经IPTG诱导可在原核表达体系中高效表达且纯化后具有较好的免疫活性。
- 钟剑波肖春花张玲陈伟烈肖桂娥魏绍静
- 关键词：甲型H1N1流感病毒血凝素神经氨酸酶原核表达重组蛋白
- 甲型H1N1流感病毒重要抗原HA1、NAe蛋白的表达及应用
- 近些年来,用基因工程技术克隆表达甲型流感病毒表面抗原HA和NA进行患者血清抗体检测是诊断疾病的重要手段。国内外对流感病毒表面抗原血凝素HA、神经氨酸酶NA的表达进行了不少研究,但仍存在不少的问题。如对表达系统的选择,如何...
- 钟剑波
- 关键词：甲型H1N1流感病毒免疫活性
- 文献传递
- 2009H1N1流感病毒神经氨酸酶基因克隆与表达被引量：2
- 2011年
- 目的制备2009H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)重组蛋白,为建立H1N1快速检测方法和神经氨酸酶抑制剂筛选模型奠定基础。方法采用MDCK细胞方法分离2009H1N1流感病毒,提取病毒RNA,RT-PCR生成NA基因,构建原核表达载体PET-102/D-TOPO-NA,IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、WersternBlotting鉴定重组蛋白。结果成功分离2009H1N1流感病毒,NA蛋白119、152、275、292位氨基酸分别为Glu、Arg、His和Cys。SDS-PAGE凝胶电泳蛋白分子相对分子质量约为64000,与预期一致。WesternBlotting证实该蛋白具有神经氨酸酶抗原活性。结论 IPTG诱导原核表达神经氨酸蛋白的最适浓度为0.1mmol/L。实验得到的蛋白尚需进一步纯化。
- 张玲魏绍静肖春花钟剑波陈伟烈张复春
- 关键词：MDCK细胞神经氨酸酶原核表达
- 艾滋病毒1型感染者外周血T细胞和B细胞及NK细胞亚群分析
- 2012年
- 目的检测和分析不同进展阶段的HIV-1感染者外周血T细胞、B细胞和NK细胞亚群变化。方法用全自动血液分析仪和流式细胞仪分别检测253例HIV．1感染者血常规和外周血CD3＋T细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、CD19＋B细胞、CD16＋CD56＋NK细胞亚群，其中CD4＋T细胞数超过500个／止37例（A组），在200～500个／止之间的152例（B组），低于200个／止64例（C组）。对照组为40例排除HIV、HCV、HBV感染的健康人（N组）。多组比较采用单因素方差分析。结果A、B、C三组中，CD4＋T细胞数越低的组，淋巴细胞占白细胞的百分比和总淋巴细胞数也越低，且差异均有统计学意义（PASCN〈0．01）。HIV感染A、B、C组CD3＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞、CD19＋B细胞占淋巴细胞的百分比均高于对照组（PAN〈0．05，PBN〈0．01，PCN〈0．01）；CD4＋T细胞数越低的组，CD3＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞和CD19＋B细胞绝对计数也相应越低，各组相比差异有统计学意义（PABcN〈0．01）。A、B、C三组CD16＋CD56＋NK细胞占淋巴细胞的百分比与NK细胞绝对计数变化呈相反趋势，CIM＋T细胞数越低的组，CD16＋CD56＋NK细胞百分比越高，而其绝对计数越低，且CD16＋CD56＋NK细胞占淋巴细胞的百分比与NK细胞绝对计数均低于正常对照组水平（PABCN〈0．01）。结论HIV-1感染不仅影响人体细胞免疫，可能还影响人体的体液免疫和天然免疫。
- 曹孟丽唐漾波魏绍静钟剑波
- 关键词：HIV-1淋巴细胞亚群
