陈琳
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅科研基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人巨细胞病毒IE1真核表达载体的构建与表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建人巨细胞病毒(HCMV)IE1真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达,为HC-MVIE1核酸疫苗的相关研究奠定基础。方法将质粒pNEB193-IE1用SalⅠ、BamHⅠ双酶切与载体pEGFP-C1连接构建重组载体pEGFP-C1-IE1;双酶切鉴定后,取重组载体pEGFP-C1-IE1用EcoRⅠ、HindⅢ双酶切与载体pcDNA3.1(-)连接构建重组质粒pcDNA3.1(-)-IE1,双酶切和测序鉴定;将重组质粒pcDNA3.1(-)-IE1转染HeLa细胞,RT-PCR检测IE1 mRNA的表达。结果重组载体pEGFP-C1-IE1和pcDNA3.1(-)-IE1双酶切后均可切出约1 476 bp目的片段;重组载体pcDNA3.1(-)-IE1测序结果登录GenBank,作BLAST分析,含有1 476 bp目的基因片段,无碱基错配和移码突变,与读码框完全一致;转染重组载体pcDNA3.1(-)-IE1的细胞中可扩增出约1 476 bp的目的条带。结论成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-IE1,且其能在真核细胞内表达。
- 曹清香陈琳余敏君蔡恒玲万艳平
- 人巨细胞病毒IE1蛋白功能研究进展被引量：2
- 2007年
- 人巨细胞病毒(HCMV)在人群中多数呈隐性感染,但对免疫功能低下者可引起严重的疾病甚至死亡。HC-MV IE1蛋白为一种多功能调节蛋白,是HCMV感染后表达最早且表达量最丰富的蛋白,它可影响病毒和细胞启动子的转录活性,调控HCMV基因的时序性表达,并通过参与不同的信号转导通路,在细胞中发挥促进凋亡或抑制凋亡作用,IE1蛋白与HCMV在体内持续性感染以及肿瘤的形成密切相关。
- 陈琳万艳平
- 关键词：凋亡
- 人巨细胞病毒IE1-GFP融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的构建增强型绿色荧光蛋白(GFP)与人巨细胞病毒(HCMV)IE1融合蛋白真核细胞表达载体,为IE1基因的表达和功能研究提供基础。方法将质粒pNEB193-IE1和载体pEGFP-C1分别进行双酶切获得目的基因IE1片段和空载体,回收纯化后用T4连接酶将两者连接并转化E.coli JM109,用SalⅠ、BamHⅠ双酶切后琼脂糖电泳鉴定阳性克隆。结果双酶切pEGFP-C1-IE1后,琼脂糖电泳可见到大小约1 476 bp的片段,与IE1预期片段大小一致,即IE1亚克隆入pEGFP-C1。结论成功地构建了HCMV IE1-GFP融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1-IE1。
- 陈琳陈熙曹清香尹卫国余敏君万艳平
- 关键词：GFP真核表达
- 人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡被引量：1
- 2008年
- 为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mφ),转染48h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mφ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率。结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中。GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时高表达使Mφ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mφ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而GFP表达对Mφ分泌及其凋亡无影响(P>0.05)。HCMV IE1瞬时高表达可上调Mφ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mφ凋亡。
- 刘安元陈琳万艳平陈熙朱翠明余敏君曹清香
- 关键词：巨噬细胞IL-1ΒTNF-Α凋亡
