韩伟
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白β-内酰胺酶报告系统的建立
- 鼠疫是一种烈性自然疫源性疾病，人类历史上，曾经发生过3次鼠疫的世界性大流行。鼠疫的病原菌是鼠疫耶尔森菌（以下简称鼠疫菌），在自然界，鼠疫的主要宿主是啮齿动物，主要通过节肢动物蚤的叮咬在宿主之间传播。通过蚤叮咬或者其它途径...
- 韩伟
- 关键词：鼠疫耶尔森菌
- 文献传递
- 鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白β-内酰胺酶报告系统的建立被引量：1
- 2012年
- 目的构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内。方法将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫菌研究的TEM报告基因载体。把待分析的鼠疫菌基因及启动子区克隆入TEM基因上游,使鼠疫菌蛋白与TEM蛋白融合表达。将鼠疫菌基因-TEM融合表达载体电转化到鼠疫菌中,并感染HeLa细胞2 h后,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦显微镜下观察结果。结果与结论应用本系统检测了YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla进入宿主细胞的情况,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa细胞呈蓝色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa细胞呈绿色,表明YopK及YscX可以进入宿主细胞,而YscK和YscL则不能。本研究成功地构建了适于鼠疫菌的TEM报告基因系统,该系统可作为分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的过程中进入宿主细胞的工具,为鼠疫菌T3SS相关蛋白致病机制研究奠定了基础。
- 韩伟谭亚芳杨慧盈郭兆彪杨瑞馥伏小平杜宗敏
- 关键词：鼠疫耶尔森菌质粒
- 鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关基因的功能研究
- 2013年
- 目的研究鼠疫耶尔森菌pCD1质粒上编码的假定蛋白YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16与pCD1质粒编码的Ⅲ型分泌系统（T3SS）在功能上的相关性。方法采用λ-Red重组系统构建鼠疫耶尔森菌YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因的突变株，通过测定分别培养于26℃下有钙、37℃下无钙和有钙TMH培养基中的以上3种突变菌株及野生菌株的生长曲线，分析突变菌株的低钙响应情况；在26℃和37℃条件下分别培养鼠疫菌突变菌株，并提取总RNA，采用定量PCR分析3种基因的转录水平及其对温度的依赖性；用β-内酰胺酶报告分子的方法分析3种基因的突变对效应蛋白转运的影响。结果在26℃和37℃低钙培养条件下，突变菌株△YpCD1．08、AYpCD1．09、△YpCD1．16的生长曲线与野生型菌株一致，表明其低钙响应正常。YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因在37℃与26℃转录水平的比值分别为2．3±0．3、2．3±0．5、3．2±0．7，表明这3个基因在鼠疫菌中均有转录，且其转录水平受温度调控，与T3SS基因转录水平的温度依赖性一致。β-内酰胺酶报告分子实验结果表明，突变菌株△YpCD1．08在140min时477与520nm波长的发光强度的比值为2．5，而野生型菌株仅为1．8，表明△YpCD1．08菌株对YopE的转运能力要高于野生株，而其他两个突变株与野生株类似。结论YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因有可能是T3SS的新成员，假定蛋白YpCDI．08可能参与效应蛋白YopE的转运及其调控。
- 张婷婷彭广能杨慧盈谭亚芳崔明全韦娜韩伟杜宗敏
- 关键词：耶尔森菌鼠疫毒力蛋白相互作用
