顾玮彦
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：浙江大学材料与化学工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 重组牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的表达和纯化
- 2007年
- 密码子优化全基因合成了牛肠激酶轻链基因(sBEKLC),采用pET-39b(+)构建了融合表达载体,在大肠杆菌中进行了成功表达.37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(D600)达到0.5时,降低温度到28℃,加入终浓度为0.1 mM的异丙基硫代-βD-硫代半乳糖苷诱导外源蛋白表达,继续培养6 h后收集菌体,融合蛋白(DsbA-sBEKLC)产量达到151.2mg/L,相当于80.6 mg/L sBEKLC.使用渗透冲击技术从细胞周质中提取sBEKLC,经过亲和层析可从每升发酵液中得到6.8 mg sBEKLC,经检测sBEKLC具有生物活性.
- 黄磊阮红徐志南顾玮彦岑沛霖
- 关键词：肠激酶纯化生物活性
- 利用his-tag纯化和复性基因工程产物肠激酶
- 对肠激酶的重组产物进行了诱导表达，分离纯化以及复性研究。结果表明，该工程菌用LB 培养基在37℃扩增至OD6000.5~0.6 时，加入0.4mmol/L IPTG，26℃诱导培养4 小时，此时目的蛋白的表达量可达菌体总...
- 顾玮彦黄磊徐志南岑沛霖
- 关键词：牛肠激酶HIS-TAG纯化工艺
- 文献传递
- 利用his-tag纯化和复性基因工程产物肠激酶被引量：3
- 2006年
- 构建了融合表达肠激酶轻链（EKLC）的基因工程大肠杆菌，将该菌于37℃在含30mg／L卡那霉素的LB培养基中培养，当细胞密度（OD600）达到0．5～0．6时加入最终浓度为0．4mmol／L的IPTG并降温至26℃进行诱导表达，4h后目的蛋白质的表达量可达菌体总蛋白质的40％以上，但所表达的重组产物大多以包涵体形式存在于菌体中。利用产物N端携带6个组氨酸标签与金属螯合层析介质中镍离子的亲和性，应用镍离子金属螯和层析对样品包涵体进行了纯化和复性研究。实验结果表明，在变性条件下纯化的样品在柱上不经洗脱，直接用复性液洗涤6h，可以使EKLC在得到提纯的同时实现复性，得到了电泳纯度为96％的具有生物活性的EKLC，最高活性为712U。
- 顾玮彦黄磊徐志南岑沛霖
- 关键词：牛肠激酶复性
- 重组大肠杆菌生产肠激酶的研究
- Enterokinase（EK）是哺乳动物消化系统中最基础的丝氨酸蛋白水解酶之一,由重链和轻链组成,两条链通过一对二硫键相连。重链参与EK在消化道细胞膜上的锚定以及与胰蛋白酶的结合,轻链具有催化活性。切出的目标产品首位氨...
- 顾玮彦
- 关键词：肠激酶
- 文献传递
