高晓冬
- 作品数：55 被引量：45H指数：3
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生化学工程更多>>
- β-1,6-葡聚糖合成相关基因对酿酒酵母孢子壁形成的影响
- 潘华平王宁中西秀树高晓冬
- 毕赤酵母含硫氨基酸生物合成途径
- 2019年
- 含硫氨基酸是所有生物生长繁殖不可缺少的氨基酸。尽管毕赤酵母在工业发酵中作为重要的表达菌株,但是其含硫氨基酸的生物合成途径尚未明了。作者采用生物信息学及表型分析的方法,阐明了毕赤酵母含硫氨基酸的生物合成途径。结果表明,毕赤酵母可通过O-乙酰同丝氨酸及O-乙酰丝氨酸与无机硫元素合成含硫氨基酸,甲硫氨酸与半胱氨酸也可通过转硫途径实现相互转化。另外毕赤酵母cys3Δ突变菌株在未添加半胱氨酸的合成培养基中对硒代甲硫氨酸表现出显著的抗性。综上所述,未来有望应用毕赤酵母表达硒蛋白用于蛋白质三级结构的分析。
- 张平平喜多岛敏彦王宁高晓冬中西秀树
- 关键词：毕赤酵母
- 植烷醇磷酸甘露糖的酶法合成及应用
- 2020年
- 内质网(ER)腔内的甘露糖基化修饰共同存在于N-糖基化、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定化、O-和C-甘露糖基化中,对于真核生物来说具有重要的作用。ER腔内的甘露糖基化的底物供体为多萜醇磷酸甘露糖(Dol-P-Man),因此Dol-P-Man的合成对于理解不同种类的糖基化修饰具有重要的意义。本研究原核表达纯化了酵母Dol-P-Man的合成酶(Dpm1),并鉴定了重要的DXD motif。利用纯化的Dpm1蛋白,及简单的植烷醇(Phytanol)代替复杂的多萜醇(Dolichol),体外酶法合成了Dol-P-Man的替代结构Phy-P-Man。在N-糖基化途径中Alg3催化Dol-PP-GlcNAc2-Man5和Dol-P-Man生成Dol-PP-GlcNAc2-Man6。通过体外酶反应,本研究证明Phy-P-Man同样能够作为Alg3的底物供体用于N-糖基化途径的研究,为以后合成高甘露糖型的N糖结构及GPI、O-和C-甘露糖基化的研究奠定了基础。
- 李盛陶王宁高晓冬
- 酿酒酵母中PiggyBac转座子筛选系统的构建被引量：1
- 2019年
- PiggyBac(PB)是来源于粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的TTAA型转座子。PB转座子系统可作为一种插入型突变工具,应用于多种真核细胞中。本研究在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中构建了一个基于PB转座子的筛选系统。系统由插入ADE2基因编码框的PB转座子及由半乳糖启动子调控表达的PB转座酶(PBase)两部分组成。在PBase诱导下,PB转座子可以从原始位点无痕移除并随机插入新的基因位点。PB转座子在转座过程中保持单一拷贝数,在每个突变细胞中只有一个插入位点,并可快速检测突变基因。实验结果表明:所构建的PB转座子筛选系统可应用于酿酒酵母中的基因筛选。
- 周林希柳艺石赵神保张慧杰高晓冬藤田盛久
- 关键词：酿酒酵母PIGGYBAC转座子基因筛选
- 巨噬细胞识别酿酒酵母孢子的研究
- 2021年
- 酿酒酵母是一种对人类和动物重要的益生菌,在不同的营养条件下有营养态和孢子态两种形态。为了研究酵母孢子对免疫系统的作用,初步探讨了巨噬细胞对酵母孢子的响应机制。通过比较巨噬细胞对营养态酵母和野生型孢子的内吞效率,发现巨噬细胞对野生型孢子的内吞效率更高。通过Syk或PI3K抑制剂抑制实验,发现野生型酵母孢子和营养态酵母的内吞都依赖于Syk途径。但野生型酵母孢子的内吞更依赖于PI3K途径,这表明酵母孢子和营养态酵母的内吞都是受体介导的吞噬,但其吞噬途径不同。高盐和蛋白酶处理实验表明,野生型孢子的配体是紧密结合到孢子壁,并且配体物质不是蛋白质。糖竞争抑制剂实验表明,葡聚糖能够抑制巨噬细胞吞噬营养态酵母,但不能抑制其吞噬野生型酵母孢子。野生型孢子和突变体孢子吞噬实验进一步表明,野生型孢子的吞噬与二酪氨酸层结构有关。本研究表明,巨噬细胞吞噬野生型酵母孢子的信号途径和配体分子不同于营养态酵母,为后续酿酒酵母的免疫应用提供一定的参考价值。
- 汪沁中西秀树高晓冬
- 关键词：酿酒酵母葡聚糖
- 酿酒酵母糖基化缺陷型菌株中ALG6基因的过量表达
- 2015年
- 利用酿酒酵母生产人源化糖蛋白,需对其糖基化途径进行基因工程改造。酿酒酵母糖基化相关基因ALG3、OCH1、MNN1的敲除导致胞内糖蛋白低的N-聚糖位点占有率和菌株缓慢的生长速度。为了提高糖基化缺陷型菌株的N-聚糖位点占有率,酿酒酵母的ALG6基因被过量表达。结果表明,ALG6的过量表达不仅能够提高菌株N-聚糖位点占有率,还能回补其生长速度,提高外源蛋白人类溶菌酶的分泌效果。
- 张阁元徐沙高晓冬中西秀树
- 关键词：酿酒酵母人源化糖蛋白
- 玛咖的现状研究与分析被引量：12
- 2018年
- 文章通过了解玛咖的形态特征、国内外应用历史与现状、国内引种现状、申请专利现状,并且整理与玛咖相关的现代化学成分、生物活性、临床应用等研究文献,对外来药物玛咖进行系统的详细分析。发现以玛咖作为原料已经开发生产了47种保健食品,其中与中药配伍的有27种,同时还有多项专利对玛咖进行研究。生物活性及临床试验文献研究表明玛咖具有抗疲劳、增强免疫力、提高性欲、提高生育力、抗骨质疏松、抗氧化、降血脂、降血糖、提高记忆力、缓解抑郁和抗肿瘤等多种功效。但是玛咖在保健食品开发申报功能方面较单一,因此深入系统全面的研究玛咖有利于为进一步合理开发利用玛咖资源提供参考依据。
- 李爱民王淳张建军王林元高晓冬黄永刚
- 关键词：玛咖化学成分生物活性
- 甘油激酶的表达纯化及在酮糖合成中的应用
- 2018年
- 研究了大肠杆菌MG1655来源的甘油激酶(GK)的表达及其在酮糖合成中的应用。本研究从大肠杆菌MG1655扩增了甘油激酶的基因片段glpK,连接到表达载体pET-28a上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达,利用Ni^(2+)亲和层析柱纯化目的蛋白。利用该甘油激酶可以催化成本较低的底物甘油生成L-3-磷酸甘油,再经过磷酸甘油氧化酶(GPO)的催化生成磷酸二羟基丙酮(DHAP),生成的DHAP可以在不同的DHAP依赖性醛缩酶的催化下与受体D-甘油醛合成酮糖-1-磷酸,最终用酸性磷酸酶脱掉磷酸生成一系列酮糖。结果表明,该酶成功地用于"一釜多酶法"合成体系中,以便宜的底物甘油为前体,合成出包括稀有糖在内的一系列酮糖,生成的产物、产率及比例用TLC、HPLC进行检测。该方法的建立将为其他稀有糖及其衍生物的合成提供理论依据。
- 吴晓茹李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：醛缩酶酮糖
- osw2对酿酒酵母孢子固定化酶影响的分析
- 2018年
- 构建了α-半乳糖苷酶(Mel1p)的多拷贝质粒pRS426-TEFpr-MEL1,转入酿酒酵母野生型AN120及osw2△突变株并进行固定化酶活性测定。实验分别选取蜜二糖、棉子糖(三糖)与水苏糖(四糖)3种低聚寡糖作为Mel1p的底物,检测两种菌株孢子固定化酶对这3种底物的催化活性,结果表明野生型AN120酵母孢子壁的孔径最大只允许介于三糖和四糖之间的底物通过,四糖不能通过;而osw2△突变株酵母孢子壁的孔径可以允许四糖通过。通过孢子固定化酶保护性实验,发现孢子固定化酶可以完全抵抗2%SDS的处理,也可部分抵抗10%SDS的处理。通过8 mol/L尿素处理后,酶活检测发现野生型AN120酵母孢子可阻挡尿素对孢子固定化酶的影响,而osw2△孢子不能;蛋白免疫印迹分析进一步表明,尿素处理后野生型AN120酵母孢子固定化酶的含量几乎不变,而osw2△突变株孢子固定化酶的含量明显降低,说明尿素可进入osw2△突变株孢子内部溶解并降低固定化酶的含量,但对AN120酵母孢子无影响。本研究也在多种突变株孢子中表达Mel1p,并进行活性比较,发现osw2△,osw2△ydl186w△及osw2△ydr326c△突变株固定化酶均有很高的催化活性。
- 赵强李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：Α-半乳糖苷酶固定化酶
- 多萜醇寡糖合成途径(DLO)中双功能甘露糖基转移酶Alg2的催化性质研究
- 糖基化是对蛋白质或脂质进行糖(寡糖)的修饰,形成糖复合物的过程,也是真核细胞翻译后修饰的主要形式之一,具有重要的生理功能。蛋白质N-糖基化开始于内质网膜(ER)多萜醇寡糖前体(dolichol-linked oligos...
- 高晓冬李盛陶
- 文献传递
