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大肠杆菌链长控制基因ddsA原位替换及多基因共表达对辅酶Q_(10)合成能力的影响被引量：2: 2009年; 目的强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力。方法利用途径工程的基本原理,对大肠杆菌辅酶Q生物合成途径中链长控制基因ispB进行遗传操作,并强化表达该途径中多个功能基因。结果首次成功用来自Gluconobacter suboxydans的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶基因ddsA原位替换大肠杆菌染色体上ispB基因,构建得到原位替换株JKL;同时强化表达CoQ生物合成途径的相关基因,发现在ubiCA和ddsA协同表达的重组菌pDCA/JKL中CoQ的合成能力比JKL提高了2.3倍,CoQ10合成量提高了2.5倍。检测该重组菌中ubiA的转录水平,发现其mRNA相对拷贝数是对照JKL的125倍。结论成功获得的重组大肠杆菌在降低内源性CoQ8合成能力的同时具备合成较长侧链CoQ10的能力,且通过强化表达相关基因使合成CoQ10的能力得到了提高。; 孔璐傅楠叶江吴海珍张惠展; 关键词：大肠杆菌辅酶Q10 QRT-PCR

yigP——大肠杆菌生长所必需的基因被引量：2: 2011年; yigP基因在大肠杆菌基因组上位于辅酶Q生物合成相关基因ubiE和ubiB之间,3者构成一个操纵子。利用温敏质粒pMAK705系统敲除大肠杆菌基因组上的yigP基因后,发现二次重组子内的温敏质粒无法通过高温培养丢失,即染色体上的yigP基因被敲除后,必须依靠质粒上完整的yigP基因才能存活;通过功能回补yigP基因的表达质粒pLac-yigP后,温敏质粒可以丢失;而将yigP基因分段获得的亚克隆回补yigP基因缺陷株,发现其下游367 bp的yigP-P4P2片段足以回补染色体上yigP基因的功能缺陷,从而表明yigP是大肠杆菌生长所必需的基因,且最小功能片段等于甚至小于367 bp。; 李月傅楠叶江张惠展; 关键词：大肠杆菌基因敲除

大肠杆菌coq生物合成途径中相关基因的遗传操作: 本课题系“构建高产coq10大肠杆菌基因工程菌”项目子课题。大肠杆菌coq生物合成途径中ubia基因编码4-羟苯甲酸转移酶，它催化coq生物合成的限速反应。本课题利用温敏质粒pmak-dubia敲除了大肠杆菌染色...; 傅楠; 关键词：大肠杆菌生物合成; 文献传递网络资源链接

基因局部改组技术在ubiA基因突变中的应用: 2011年; 辅酶Q(coenzyme Q,CoQ)作为线粒体呼吸链中的递氢体具有较高的学术及应用价值。由ubiA基因编码的4-羟苯甲酸聚异戊二烯转移酶(UbiA)是大肠杆菌CoQ生物合成途径的限速步骤,但通过系统突变对其结构进行研究鲜有报道。【目的】应用化学合成的随机序列寡核苷酸,对ubiA基因编码活性区域的DNA序列进行随机突变。【方法】以大肠杆菌MC4100的ubiA基因插入灭活突变株为受体,将化学合成的随机序列替换目标区域序列,进行ubiA基因的局部改组;最终对所得突变株的ubiA改组基因的突变序列及其功能进行对应分析。【结果】ubiA基因局部改组后经过两轮筛选,得到CoQ产量发生不同程度变化的7株ubiA基因突变株,与野生型ubiA相比改组型ubiA的编码序列呈显著变化,其测序结果从一个侧面证实了文献报道的3个天冬氨酸位点与ubiA基因所编码蛋白的催化活性之间的关系。【结论】本文建立的基因局部改组技术是可行的;利用该技术初步揭示了UbiA中对其活性具有重要贡献的部分氨基酸位点。; 顾超傅楠叶江张惠展; 关键词：辅酶Q

基因替换及多基因共表达强化大肠杆菌辅酶Q_(10)的合成能力: 2008年; 为了强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力,对大肠杆菌进行了相关的基因操作。通过敲除大肠杆菌染色体上的聚八异戊二烯焦磷酸合成酶基因ispB,并导入来自Gluconobactersuboxydans的聚十异戊二烯焦磷酸合成酶基因ddsA,使大肠杆菌具有CoQ10合成能力的同时降低了内源性辅酶Q8(CoQ8)的合成。采用双质粒共表达系统,对CoQ生物合成途径中多个功能基因进行了强化表达,构建得到的重组大肠杆菌CoQ的合成能力、CoQ10合成的专一性都有明显改善,其中ubiCA和ddsA基因的协同表达效果最为明显,CoQ的合成能力比对照提高了65%,而CoQ10的合成量也提高了1.1倍。; 傅楠叶江吴海珍孔璐张惠展; 关键词：大肠杆菌基因缺失辅酶Q

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傅楠