刘玲娟
- 作品数：28 被引量：47H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
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- ox-LDL抑制大鼠骨髓间充质干细胞的体外增殖和Oct-4表达被引量：4
- 2014年
- 目的以大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)为研究对象,在体外培养过程中观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对MSCs增殖、干细胞表面标志Oct-4表达的影响。方法将体外培养的MSCs分为4组:对照组,不加任何干预因素;Ox-LDL组,在培养基中分别加入不同浓度(1、5、10、20μg/mL)的ox-LDL;Ox-LDL+NAC组,采用抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后再加入ox-LDL;阴性对照组,在培养基中加入对应浓度的天然低密度脂蛋白(nLDL)。在不同培养时间点收集细胞计数并绘制生长曲线;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测干细胞特异表面标记Oct-4表达水平;电子顺磁共振技术检测氧化活性产物(ROS)产量。结果 ox-LDL抑制MSCs的增殖,浓度越大细胞增殖抑制越明显,当浓度大于5μg/mL时细胞出现凋亡,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平减弱;ox-LDL干预后Oct-4的表达水平显著减弱,且与干预浓度呈正相关;ox-LDL干预后ROS的产量明显升高,而nLDL对ROS生成没有影响。结论 ox-LDL抑制MSCs的体外增殖和Oct-4表达,可能与ROS增加有关。
- 吕铁伟孙慧超张蕾刘玲娟吴晓云刘晓燕朱静刘振国田杰
- 关键词：骨髓细胞细胞增殖OCT-4
- BMP2对H9c2细胞心脏转录因子表达的影响及其组蛋白H3乙酰化调控机制
- 目的：在胚胎心脏发育早期,骨形态形成蛋白(BMP2)可诱导心脏转录因子的表达,然而其具体机制并不清楚.本课题组前期研究发现组蛋白乙酰化修饰对调控心脏特异性基因的表达至关重要.本研究探讨BMP2对心脏核心转录因子的调控作用...
- 郑敏朱静吕铁伟刘玲娟孙慧超田杰
- 关键词：骨形态形成蛋白组蛋白H3
- HIF-1α基因启动子-1946位点基因多态性与紫绀型先天性心脏病低氧耐受的相关性被引量：7
- 2017年
- 目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因多态性与紫绀型先天性心脏病(CCHD)低氧耐受能力是否具有相关性。方法用靶向捕获技术,对97例CCHD患儿和108例非紫绀型先天性心脏病(ACHD)患儿HIF-1α基因二代测序;生物信息学分析后找出差异分布的多态位点;用Sanger测序验证。针对HIF-1α启动子区多态位点,构建不同基因型HIF-1α启动子-荧光素酶报告基因载体;转染HEK293T和H9C2细胞;用双荧光素酶报告基因检测系统,分析HIF-1α不同基因型启动子活性。结果 CCHD组HIF-1α启动子区-1 946位点A碱基删除变异频率高于ACHD组(P<0.05)。与AA基因型比较,DD基因型HIF-1α启动子转录活性更高(P<0.05)。结论 HIF-1α基因-1 946位点与CCHD耐受低氧能力相关,DD基因型HIF-1α转录活性明显增高,可能是耐受低氧的分子遗传学机制之一。
- 欧阳娜田鹤锋刘玲娟田杰吕铁伟
- 关键词：HIF-1Α紫绀型先天性心脏病低氧
- EGCG预防老年小鼠心脏肌钙蛋白Ⅰ表达下降及其机制研究
- 2018年
- 目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)能否预防老年小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)表达下降,并研究其机制。方法:随机选取3、12、14、16和18月龄小鼠各5只,用RT-PCR、Western blot检测心脏中cTnⅠmRNA和蛋白质表达。12月龄小鼠32只随机分为空白组、EGCG低剂量组[EGCG-L,50 mg/(kg·d)]、EGCG中剂量组[EGCG-M,100 mg/(kg·d)]和EGCG高剂量组[EGCG-H,200 mg/(kg·d)],每组8只,通过饮水摄入EGCG持续干预6个月,3月龄小鼠为青年组(n=8)。RT-PCR检测cTnⅠ和HDAC1 mRNA表达,Western blot检测cTnⅠ蛋白质表达,CHIP-Q-PCR检测cTnⅠ启动子区H3K9乙酰化水平和HDAC1、GATA4、Mef2c结合水平。结果:小鼠衰老过程中,与12月龄[(1.483±0.226),(1.127±0.074)]比较,cTnⅠmRNA和蛋白质表达在16月龄[(0.913±0.150),(0.683±0.133)]时开始下降(P=0.002,P=0.003)。EGCG干预后,与空白组[(1.924±0.117),(0.963±0.105)]比较,EGCG-H组[(0.801±0.037),(0.225±0.153)]中HDAC1 mRNA表达和结合水平下降(均P=0.000)。空白组中cTnⅠ启动子区H3K9乙酰化,GATA4和Mef2C的结合水平分别为(0.392±0.138)、(0.404±0.150)、(0.347±0.093),EGCG-H组中H3K9乙酰化(0.723±0.208)和GATA4(1.051±0.239)、Mef2c(1.129±0.187)的结合水平均升高(P=0.014,P=0.000,P=0.000)。EGCG-H组[(0.943±0.114),(1.034±0.058)]中cTnⅠmRNA和蛋白质与空白组[(0.093±0.033),(0.619±0.179)]比较表达升高(P=0.000,P=0.007)。结论:高剂量EGCG通过抑制HDAC1,升高H3K9乙酰化预防老年小鼠心脏中cTnⅠ表达下降。
- 贾忠莉全珺珺潘博刘玲娟田杰
- 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯组蛋白去乙酰化酶
- 父代饮酒致子代小鼠心脏发育异常的组蛋白乙酰化修饰机制被引量：3
- 2019年
- 目的:探讨父代饮酒对子代心脏发育的影响,以及组蛋白乙酰化修饰机制。方法:雄性C57小鼠给予连续酒精(体积分数40%,每天10 mL/kg)暴露6周,分别设空白对照组(无处理)及阴性对照组(生理盐水灌胃)。干预后雌雄小鼠合笼,收集新生子代小鼠心脏组织。测量新生小鼠出生体重;电镜检测心肌细胞超微结构;TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平;qPCR检测caspase-3及Bcl-2的mRNA表达水平;Western blot法检测active caspase-3、caspase-3及Bcl-2蛋白表达水平;ChIP-qPCR法检测caspase-3及Bcl-2启动子上组蛋白H3K9及H3K27乙酰化水平。结果:父代饮酒小鼠子代出生体重明显较对照组降低(P<0.05);电镜下见酒精组新生小鼠心肌细胞出现肌丝溶解、肌浆网扩大和肌丝排列紊乱;同时其凋亡细胞较对照组明显增多;酒精组caspase-3 mRNA表达较对照组显著升高(P<0.05),active caspase-3蛋白水平较对照组显著升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白均较对照组显著降低(P<0.05);caspase-3基因启动子组蛋白H3K9乙酰化水平较对照组显著升高(P<0.05);Bcl-2启动子组蛋白H3K27乙酰化水平较对照组显著降低(P<0.05)。结论:父代饮酒可以引起子代小鼠心脏发育异常。组蛋白乙酰化修饰可能介导了子代小鼠心肌细胞凋亡过程。
- 路倩赵唯安刘玲娟潘博田杰
- 关键词：先天性心脏病心脏发育组蛋白乙酰化细胞凋亡
- 心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因的时序性表达规律研究被引量：11
- 2017年
- 目的观察在心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因时序性表达规律,为心肌肥大机制研究提供线索。方法用异丙肾上腺素(ISO)干预心肌细胞,用CCK-8、细胞计数仪、免疫组化分别检测细胞存活率、细胞直径及表面积,用RT-PCR、Western blotting分别检测相关基因mRNA及蛋白表达水平。结果用ISO成功构建心肌细胞肥大模型。ISO干预后,GATA结合蛋白4(GATA4)、肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA5、脑钠肽(BNP)、心房利钠因子(ANP)于24h开始升高,P300、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、T-框蛋白5(TBX5)于12h开始升高,血清应答因子(SRF)、β-MHC mRNA于6h开始升高(P<0.05);其中GATA4、α-MHC、β-MHC、SRF、P300 mRNA表达呈先升后降的趋势,至干预72h GATA4、SRF、α-MHC、β-MHC、P300 mRNA表达仍高于正常(P<0.05),而MEF2C降至正常(P>0.05);GATA5、TBX5、ANP、BNP mRNA表达与对照组相比持续升高(P<0.05),而NKX2.5 mRNA(P>0.05)无明显变化。ISO干预48h后,GATA4蛋白表达水平升高,HEY2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论在心肌细胞肥大过程中,MEF2C的时序表达规律与心脏发育过程相似,而GATA4、GATA5、SRF、TBX5的时序性表达规律与心脏发育过程不完全一致,提示其在心肌细胞肥大由代偿转为失代偿过程中的重要作用。同时GATA4、MEF2C、SRF与乙酰化酶P300的时序性表达规律相似,提示在心肌细胞肥大过程中其时序性表达可能受P300调控。
- 罗漫吴晓云郑敏刘玲娟田杰
- 关键词：心肌细胞肥大时序性表达
- 儿童不同程度心肌致密化不全临床特点分析
- 2017年
- 目的探讨不同程度心肌致密化不全患儿的临床特征及预后,探讨非致密化心肌层与致密心肌层厚度之比(N/C)的临床指导意义。方法回顾分析心肌致密化不全患儿的临床资料,比较N/C>2.0和N/C 1.4~2.0两组患儿的情况。结果两组患儿各26例,年龄、性别、低出生体质量和营养不良比例,心脏病变及合并症的差异均无统计学意义(P>0.05)。出院时N/C>2.0组病情好转8例,无明显好转15例,死亡3例;N/C 1.4~2.0组病情好转18例,无明显好转8例,无死亡病例。两组治疗有效率差异有统计学意义(χ2=7.69,P=0.006)。随访出院后8年内N/C>2.0组病死率高于N/C 1.4~2.0组,差异有统计学意义(χ~2=6.993,P=0.008)。结论心肌致密化不全患儿的N/C值越大,治疗有效率越低,预后越差。
- 周挥茗刘玲娟吴瑶吕铁伟田杰
- 关键词：心肌致密化不全转归儿童
- 全生物可降解型封堵器封堵猪房间隔缺损的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的:评估全生物可降解型房间隔缺损(atrial septal defect,ASD)封堵器封堵猪ASD的疗效、组织覆盖情况、降解情况及生物相容性等。方法:15只小型猪经外科开胸术后在心脏超声指引下行房间隔穿刺术,并置入全生物可降解ASD封堵器。术后行心脏超声检查观察封堵效果并测量封堵器大小,于1个月、3个月、6个月及9个月各处死3只,大体肉眼观察组织覆盖情况并测量覆盖面积与封堵器双盘面积;苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察周围组织的炎症反应,酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定猪血清白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。结果:除了3只建模失败,其余12只均建模成功并进行了ASD封堵;术中及术后未出现感染、封堵器脱落等并发症。超声结果显示封堵器位置良好,无残余分流。大体解剖标本可见置入ASD封堵器术后1月新生组织部分覆盖封堵器装置表面,术后3个月、6个月及9个月均已完全覆盖。与降解前的封堵器扇面直径比较,术后1个月、3个月及6个月均降低(P<0.05),且随时间延长降低明显,差异有统计学意义(P<0.05);与降解前的封堵器高度比较,除了术后1个月无明显差异(P>0.05),术后3个月、6个月均降低(P<0.05)。与降解前封堵器双盘面积比较,术后1个月、3个月、6个月及9个月均降低(P<0.05),且随时间延长降低明显,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1个月、3个月封堵器周围组织炎症反应明显,在术后6个月、9个月消失;术后3个月及6个月血清IL-6浓度较术前升高(P<0.05),术后9个月降至正常(P>0.05),差异有统计学意义。结论:全生物可降解型ASD封堵器在猪ASD模型封堵技术成功率高,组织覆盖迅速,生物相容性与降解效果良好,是一种比较理想的可降解封堵器。
- 牛云鹤罗历李勇刚计晓娟白永虹王洪蒲晓芳刘玲娟易岂建
- 关键词：封堵器生物可降解房间隔缺损聚乳酸
- wnt5a诱导心肌祖细胞向心肌细胞分化的作用研究
- 2018年
- 目的探讨wnt5a诱导心肌祖细胞CP15-5a向心肌细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒Ad-wnt5a和Ad-GFP;转染CP15-5a细胞后,设置wnt5a组、GFP组和空白对照组。采用流式细胞技术检测Ad-wnt5a和Ad-GFP的转染效率;1周后,通过实时定量PCR(q RT-PCR)检测经Ad-wnt5a诱导的CP15-5a细胞中心肌组织特异性转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌增强因子2C(MEF2C)的表达;2周后,通过Western blotting及免疫荧光技术检测经Ad-wnt5a诱导的CP15-5a细胞中心肌连接因子43(CX43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达;全细胞膜片钳技术检测钠电流(I_(Na))表达。结果 Ad-wnt5a和Ad-GFP转染效率分别为42.8%、44.3%。腺病毒转染CP15-5a细胞1周后,wnt5a组GATA4和MEF2C基因的表达量(分别为1.717±0.220、1.847±0.190)较GFP组和空白对照组(GATA4:1.003±0.087、0.961±0.063,P<0.05;MEF2C:0.456±0.042、0.500±0.095,P<0.05)明显升高,而GFP组与空白对照组比较差异无统计学意义;腺病毒转染2周后,wnt5a组CX43和c Tn T蛋白的表达量(分别为1.597±0.267、0.727±0.100)较GFP组和空白对照组(CX43:0.723±0.047、0.783±0.1333,P<0.05;cTnT:0.217±0.021和0.253±0.102,P<0.01)明显升高,而GFP组与空白对照组比较差异无统计学意义。与GFP组及空白对照组比较,wnt5a组可检测出I_(Na)。结论 wnt5a可诱导心肌祖细胞CP15-5a向心肌细胞分化。
- 吴良宇向平刘玲娟何通川房松华吕铁伟田杰李谧
- 关键词：WNT5A心肌细胞
- mmu-miR-3475-3P在心脏发育中的生物信息学分析
- 2017年
- 目的探讨mmu--miR-3475-3P可能参与的生物学过程及信号通路。方法用实时荧光定量PCR方法测定mmumiR-3475-3P在小鼠胚胎心脏和成熟心脏中的表达。再综合应用TargetScan、miRDB、miRanda等常用microRNA在线数据库对miR3475-3p进行靶基因预测,对所得靶基因进行基因功能注释(Go)和信号通路分析。结果 mmu-miR-3475-3P在小鼠胚胎心脏和成熟心脏中存在明显的表达差异,运用TargetScan、miRDB、miRanda对miR3475-3P进行生物信息学分析发现该microRNA可能调控441个靶基因。结论 mmu-miR-3475-3P在小鼠胚胎心脏高表达,其预测的靶基因富集于多个信号通路及细胞生物学过程。
- 沈兴潘博潘博刘玲娟刘玲娟
- 关键词：生物信息学靶基因心脏发育
