刘菲
- 作品数：13 被引量：38H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 蓝萼香茶菜种子人工老化过程中生理生化特性的研究被引量：13
- 2012年
- 研究了蓝萼香茶菜种子人工老化过程中发生的一系列生理生化变化。结果表明:随着老化程度的加深,种子各项发芽指标逐渐降低,电导率和丙二醛含量逐渐升高;老化种子内保护酶(CAT、POD、SOD)活性降低;种子内贮藏物质(可溶性蛋白质、可溶性糖)也呈现逐渐降低的趋势。说明蓝萼香茶菜种子老化过程中种子活力降低可能是由于细胞膜系统受损和有毒物质积累所致。本研究可为蓝萼香茶菜种子的合理贮藏及生产上种子活力的提高提供理论依据。
- 刘霞刘菲
- 关键词：蓝萼香茶菜生理生化变化
- 牛病毒性腹泻病毒E_0-E_2融合基因重组卡介苗的构建被引量：1
- 2015年
- 为了增强重组卡介苗对牛病毒性腹泻黏膜病的免疫效果,本研究将敲除疏水氨基酸及密码子优化的E0基因与去除了C末端的疏水序列E2截短基因采用重叠延伸PCR的方法进行融合后,将其分别与p MV261/p MV361载体连接,电转化至卡介苗中,构建重组卡介苗。45℃热诱导重组卡介苗表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果证明E0-E2融合基因在卡介苗中成功表达,目的蛋白大小为66.5 ku,且具有反应原性。
- 孙凡婷张云张妍李晶刘菲刘杨杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒重组卡介苗
- 不同毒力结核分支杆菌感染RAW264.7巨噬细胞不同时间细胞因子转录水平标准曲线的建立及应用被引量：1
- 2014年
- 为检测不同毒力结核分枝杆菌感染巨噬细胞后细胞因子转录水平的变化,构建IL-6、IL-10、TNF-α重组标准质粒,建立了实时荧光定量PCR标准曲线。应用该方法对不同毒力结核分枝杆菌感染RAW264.7巨噬细胞6个时间点细胞因子的转录水平进行分析,结果显示H37Rv组、BCG组相比于对照组刺激后均使三种细胞因子的转录水平发生变化,其中IL-6和TNF-α发生明显变化。本试验通过对不同时间点细胞因子转录水平的分析为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制的研究提供新思路。
- 张妍宋纪伟曾范利时坤李健明刘杨刘菲孙凡婷杜锐
- 关键词：RAW264.7细胞细胞因子
- 5株水貂阿留申病毒的分离与鉴定
- 2015年
- 为给水貂阿留申病疫苗的研制奠定基础,对疑似感染阿留申病死亡的水貂内脏处理后,接种猫肾传代细胞(CRFK)分离病毒,并对分离的毒株进行PCR鉴定及动物回归试验。与此同时,首次应用免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)对所分离的水貂阿留申病毒进行TCID_(50)的测定。结果成功分离并鉴定出5株水貂阿留申病毒株,分别命名为ADV-DL124、ADV-DL125、ADV-ZJ3、ADV-QD2、ADV-QD3,各分离株的TCID_(50)分别为10^(5.7)TCID_(50)/ml、10^(5.0)TCID_(50)/ml、10^(4.6)TCID_(50)/mL、10^(5.2)TCID_(50)/mL、10^(4.1)TCID_(50)/mL。动物回归实验显示,所分离的病毒对水貂具有致病性,为水貂阿留申病毒强毒株。
- 刘东旭时坤李健明曾范利刘菲杜锐
- 关键词：水貂阿留申病毒
- 不同毒力结核分枝杆菌对THP-1细胞凋亡及细胞因子表达的影响被引量：2
- 2015年
- 为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六个时间点的凋亡情况,应用荧光定量PCR检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-6的转录水平,应用ELISA方法检测细胞上清液中三种细胞因子的分泌量。结果显示:BCG组和H37Rv组的早期凋亡率均显著高于对照组(P<0.05)。巨噬细胞细胞因子TNF-α、IL-6的转录水平与分泌水平相符,弱毒菌株巨噬细胞凋亡情况随时间延长成上升趋势,其分泌的细胞因子TNF-α表现为相同趋势,IL-6表现为相反趋势。强毒株巨噬细胞凋亡情况低于弱毒株,细胞因子分泌情况复杂,一般表现为一种先增强后抑制的情况。本试验通过对不同时间点细胞因子与凋亡情况关系的研究为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制提供新思路。
- 张妍宋纪伟曾范利时坤李健明刘杨刘菲孙凡婷杜锐
- 关键词：THP-1细胞细胞因子
- 水貂圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
- 2024年
- 为快速检测水貂圆环病毒(MiCV),本试验根据MiCV Cap基因序列设计合成特异性引物,建立了水貂圆环病毒SYBR Green II实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在模板浓度为1.0×10^(6)~1.0×10^(1) copies/μL范围内呈良好线性关系,相关系数为0.9983。本试验建立的检测方法对水貂阿留申病毒、猪圆环病毒2型、水貂肠炎病毒、犬瘟热病毒和猪伪狂犬病毒进行检测均无特异性扩增,批内和批间CV均小于2%,对重组阳性质粒的检测下限为1.0×10^(1) copies/μL,比普通PCR的敏感度高100倍,对阳性样品DNA的检测下限为2.38×10^(-2) pg/μL,比普通PCR的敏感度高1000倍。应用该方法对吉林省部分毛皮动物养殖场的水貂、狐狸、貉和环境样品进行检测,结果其阳性率分别为57.23%、48.42%、39.71%和68.48%。上述结果表明,本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,为MiCV的诊断及流行病学调查提供技术支持。
- 盛陈艳麻宝艺李健明宫庆龙刘菲时坤孙志博刘艺冷雪杜锐
- 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中的优化表达被引量：3
- 2014年
- 为构建牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)基因工程活载体疫苗,根据已知的BVDV Changehun184毒株E2基因序列,利用DN.AStar生物学软件对其进行分析,预测了可能存在的抗原表位,设计6对引物,分别扩增了包含预测抗原位点的6个片段,1—297 aa、1—345 aa、1—374 aa、45—297 aa、45—345 aa和45—374 aa,克隆至穿梭表达载体pMV361中,经酶切、PCR扩增和测序证实已正确插入到表达载体中,构建了6个原核表达质粒。阳性重组质粒通过电转化到卡介苗(BCG)感受态中,热诱导后,进行SDS-PAGE分析和免疫印迹检测。结果表明6个重组质粒在卡介苗中均有不同程度的表达,表达产物与理论推测的相对分子质量一致。Western blot结果显示其融合蛋白能被牛抗BVDV的阳性血清识别,具有相应的反应原性。本研究为进一步研究BVDV基因工程活载体疫苗奠定了基础。
- 曾范利张云张梦时坤李建明刘菲李晶杜锐
- 关键词：卡介苗
- 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究被引量：2
- 2014年
- 为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示在体液免疫方面,两组rBCG均从第7 d开始产生BVDV抗体,抗体水平逐渐上升,在42 d达到峰值,并且rBCG-pMV361-E2刺激所产生的抗体水平始终高于rBCG-pMV261-E2;而rBCG血清中的抗结核菌抗体水平与正常BCG无显著差异,与BVDV阳性对照组和阴性对照组之间则差异显著;在细胞免疫方面,与阴性对照组相比,两组rBCG与BVDV灭活苗相同,免疫实验兔后淋巴细胞对特异性刺激均有明显的增殖。表明两组rBCG免疫实验兔后均使其产生了体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研制BVDV新型基因工程疫苗奠定基础。
- 李健明杨宇航王慧慧曾范利时坤张妍刘菲杜锐
- 关键词：E2基因重组卡介苗
- 19ku脂蛋白信号肽优化表达的牛病毒性腹泻病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究
- 2015年
- 为评价19ku脂蛋白信号肽优化表达的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组卡介苗对小鼠的免疫效果,本研究将已构建的rBCG/19ku-E_2、rBCG/E_2、rBCG/pMV261(pMV261空载体构建的rBCG作为实验对照组)、卡介苗(BCG)及BVDV灭活苗免疫小鼠,通过检测血清抗体效价、T淋巴细胞亚群含量及细胞因子水平,评价其体液免疫与细胞免疫效果。结果显示,rBCG/19ku-E_2可以引起BVDV特异性抗体的产生,并且抗体水平要高于rBCG/E_2、rBCG/pMV261组。对CD4^+、CD8^+T淋巴细胞亚群含量的检测结果表明,rBCG免疫小鼠对CD4^+、CD8^+T淋巴细胞亚群没有显著影响。通过对IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ细胞因子检测结果表明,rBCG主要诱导Th1型细胞免疫应答,rBCG/19ku-E_2诱导的细胞因子水平低于BCG免疫组,但均高于细胞因子的平均水平。结果表明,rBCG/19ku-E_2可以诱导小鼠产生较好的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,为BVDV新型疫苗研究奠定基础。
- 时坤孙凡婷张妍李晶刘菲刘杨杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒重组卡介苗
- NaCl胁迫下野生大豆生理生态反应的研究被引量：10
- 2011年
- 为明确野生大豆的耐盐性及其在盐胁迫下的生理生态反应规律,用NaCl溶液模拟盐胁迫处理野生大豆幼苗,分析了不同胁迫程度和胁迫时间下相关指标的变化。结果表明:低浓度盐胁迫对其生长无显著影响,但随着胁迫浓度的增加和胁迫时间的延长,其鲜重的增加速率逐渐降低,植物组织含水率降低,根冠比增加,可溶性糖含量先大幅增加后稍有降低,可溶性蛋白含量先升高后降低,丙二醛(MDA)含量升高,游离脯氨酸(Pro)含量成倍增加。各指标的变化规律证明野生大豆具有一定的耐盐性,根冠比、含水率、可溶性糖、可溶性蛋白、MDA、Pro等是检测野生大豆抗盐性强弱的重要指标。
- 贺莉徐晓腾刘菲刘霞
- 关键词：野生大豆NACL胁迫耐盐性
