司伏生
- 作品数：23 被引量：91H指数：6
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- ORF3蛋白促进猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上的增殖被引量：6
- 2018年
- 【背景】猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪而引起的一种急性肠道传染病,常导致病猪水样腹泻、呕吐、脱水。自2010年起,其大规模的暴发给养猪业造成巨大的经济损失。由于对PEDV免疫机理及侵入机制知之甚少,至今仍缺乏有效的PED防治措施。【目的】研究orf3对PEDV体外增殖的影响。【方法】利用基于RNA同源重组的PEDV反向遗传学操作技术拯救一系列携带不同orf3基因及orf3基因缺失的重组PEDV;将获得的重组PEDV以MOI 0.1感染Vero细胞,分别于感染的第8、16、24、32、40、48 h测定其TCID_(50)并绘制病毒生长曲线;分别在感染25 h和36 h利用全自动细胞计数分析仪对6孔板内的细胞进行计数,并于感染后的第12、24、36、48 h用CCK-8试剂盒对其细胞活力进行测定。【结果】RT-PCR结果及细胞病变观察证明成功拯救到了携带不同orf3基因或orf3基因缺失的重组PEDV;进一步的免疫组化分析结果证实PEDV的ORF3蛋白可以在Vero细胞中合成。SPSS软件分析表明携带orf3基因的重组PEDV的滴度(TCID_(50))显著高于缺失orf3基因的重组PEDV的滴度;带有orf3基因的重组PEDV感染Vero细胞25 h和36 h时的活细胞数显著高于缺失orf3基因的重组病毒感染相同时间时的活细胞数;而且重组PEDV感染Vero细胞24 h后,带有orf3基因的重组PEDV的细胞活性显著高于缺失orf3基因的重组病毒。【结论】ORF3蛋白对于PEDV在Vero细胞中的增殖具有促进作用,该作用是通过延缓或减少感染细胞的死亡实现的。本研究为揭示PEDV orf3基因的功能和PEDV复制机制的研究提供理论基础。
- 胡晓霞于瑞嵩司伏生司伏生董世娟陈冰清李震
- 关键词：ORF3猪流行性腹泻病毒体外增殖
- 应用灰色系统GM(1,1)模型预测猪场中猪戊型肝炎的流行趋势被引量：1
- 2012年
- 为研究猪戊型肝炎的流行趋势及其预测,应用灰色系统理论对上海市2005-2010年的猪戊型肝炎资料进行分析,建立了灰色系统GM(1,1)模型,并进行了模型评价。结果表明:GM(1,1)模型精度检验结果为优,能精确地模拟猪戊型肝炎的流行趋势。应用该模型预测上海市2011年、2012年猪戊型肝炎的感染率分别为19.25%和18.34%。
- 董世娟黄芬芬施标朱于敏于瑞嵩司伏生李震
- 关键词：病害预测
- 与猪流行性腹泻病毒M蛋白互作的宿主蛋白的鉴定被引量：3
- 2019年
- 【背景】猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚。【目的】利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDVM蛋白相互作用的蛋白,为揭示M蛋白在病毒增殖过程中发挥的功能提供研究基础。【方法】将MOI=0.1的PEDV DR13疫苗株接种于长成单层的Vero细胞,感染36 h后,收集细胞并进行裂解。利用抗M的单克隆抗体沉淀与M相互作用蛋白复合物,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行鉴定并利用细胞功能富集分析(Gene ontology,GO)对感染组鉴定到的细胞蛋白进行分析,确定两个细胞内源性蛋白为候选蛋白,进行免疫共沉淀(Co-IP)验证和共定位分析。【结果】基于鉴定蛋白的肽段数的方法分析显示,感染组与对照组相比,鉴定了218个与M蛋白相互作用的细胞内源性蛋白,分别与蛋白质合成、代谢、细胞信号通路转导等密切相关,选择细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)、真核翻译起始因子3亚基L蛋白(eIF3L)为候选蛋白进行Co-IP(Co-immunoprecipitation)验证和共定位分析,结果证实CDC42、eIF3L蛋白分别与M蛋白在细胞内存在相互作用。【结论】鉴定出PEDV M蛋白能够与宿主细胞CDC42和eIF3L蛋白相互作用,并鉴定出其他可能与M蛋白发生相互作用的宿主蛋白60个,为开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用研究提供了重要理论依据。
- 王瑞阳于瑞嵩陈冰清陈冰清谢春芳司伏生谢春芳李震
- 关键词：免疫共沉淀猪流行性腹泻病毒CDC42膜蛋白
- 上海某猪场发现基因3型和基因4型戊型肝炎病毒共存被引量：4
- 2008年
- 在对猪戊型肝炎流行病调查过程中,通过Nested RT-PCR方法,扩增基因组ORF2的150 bp目的片段,测序并进行分析。结果表明:某猪场同时存在3型和4型HEV,这是我国首次在同一个猪场发现不同基因型HEV共同感染的报道。对基因3型HEV在该猪场流行趋势进行跟踪调查,基因3型阳性率最高达20%,最低4%,平均11.5%;基因4型最高阳性率30%,最低20%,平均23.5%。此研究结果提示基因3型HEV在该猪场与基因4型相比在竞争感染中不占主导优势。
- 于水生司伏生朱于敏邹思湘董世娟范洪斌高全新李震
- 关键词：戊型肝炎病毒基因型RT-PCR同源性
- 规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎与牛病毒性腹泻的流行病学调查被引量：19
- 2016年
- 为初步了解上海市崇明岛地区奶牛养殖场IBRV和BVDV的流行情况,在两个规模化养殖场共采集385份血清样品,进行IBRV和BVDV抗体的检测与BVDV病原的检测。结果显示,两个规模化养殖场BVDV的抗体阳性率分别为97.4%和96.7%,IBRV的抗体阳性率分别为41.2%和74.3%。1号牛场BVDV病原阳性率为1.3%,检测到一头BVD持续感染牛(BVD-PI)牛。2号牛场没有检测到BVD-PI牛。数据表明,两个规模化养殖场存在IBRV和BVDV感染史和接触史,应采取防控净化措施。
- 谢春芳于瑞嵩李震张瑞华司伏生董世娟
- 关键词：牛传染性鼻气管炎牛病毒性腹泻抗体酶联免疫吸附试验
- 猪流行性腹泻病毒ORF3蛋白40-91 aa是其细胞质定位的关键结构域被引量：5
- 2020年
- ORF3蛋白是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)基因组编码的唯一的辅助蛋白,与病毒毒力相关。为确定PEDV ORF3细胞质定位信号,文中构建了系列PEDV DR13wt ORF3蛋白全长或截短肽重组表达载体,转染Vero细胞并利用激光共聚焦显微镜分析与EGFP融合表达的全长ORF3蛋白和其系列截短肽在细胞内的分布。结果表明,全长ORF3蛋白或所有包含2个跨膜域的40–91 aa基序的ORF3截短肽均只定位于细胞质中,而不包含40–91aa基序的ORF3截短肽分布于整个细胞中(细胞质和细胞核均有分布)。这表明40–91 aa是猪流行性腹泻病毒ORF3蛋白细胞质定位的关键结构域。PEDVORF3蛋白细胞质定位结构域的明确为进一步研究其细胞内转运和生物学功能提供了参考。
- 陈冰清沈媚司伏生司伏生于瑞嵩董世娟李震
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 新发猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传进化分析被引量：3
- 2014年
- 从浙江地区分离的2株代表性样品与全国范围内流行的参考毒株进行比对和遗传进化分析,结果分为4个组,代表性样品与大部分国内的毒株落入G4-2组,与国内早期CH-S毒株核苷酸(氨基酸)同源性为98.4%~98.5%(99.1%~99.6%);以华南地区为主的2011-2012年分离的毒株自成一组,与中国其他地区的毒株的同源性为95.0%~97.2%,与其余3组比较有9个核苷酸的变异。遗传进化分析表明所分离毒株与大部分中国的流行毒株属于一个基因型;以2011-2012年中国华南地区为主的毒株成为PEDV的一个新的基因型;提示2011-2012年中国流行着2种PEDV的基因型。
- 董世娟朱于敏于瑞嵩司伏生石明明张源淑李震
- 关键词：猪流行性腹泻病毒分子流行病学ORF3基因
- 一种猪的灵活保定装置
- 本实用新型公开了一种猪的灵活保定装置，属于畜牧兽医技术领域，包括固定架，所述固定架上部连接有升降装置，所述升降装置延伸至所述固定架内，并且所述升降装置连接有第一软板和第二软板，所述第一软板上开设有通槽，所述通槽内活动设置...
- 司伏生李震陈冰清董世娟于瑞嵩谢春芳
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒免疫及疫苗研制被引量：15
- 2021年
- 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是严重危害我国和世界养猪业的重要动物疫病,其致病原为猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),属冠状病毒科α冠状病毒属。文中综述分为5个部分。前两部分在介绍该病病原及其流行病学的基础上先概括了初生仔猪的被动免疫途径和初乳的重要功效。第三部分总结了母猪孕期免疫的特点,讨论了"肠道-乳腺-sIgA轴"理论及其可能的作用机理,提出了一系列PEDV免疫防控中应重点关注的理论技术问题。最后两部分分别总结了PEDV疫苗的研发现状并对PEDV免疫防控的未来发展作了展望。
- 董世娟谢春芳谢春芳陈冰清司伏生李震
- 关键词：猪流行性腹泻病毒冠状病毒疫苗
- 一种猪流行性腹泻病毒重组疫苗株及其制备方法
- 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒重组疫苗株及其制备方法，该猪流行性腹泻病毒重组疫苗株是以PED经典毒株DR13为骨架，将抗原基因S基因替换成PED流行毒株S基因。其中PED流行毒株S基因来源于美国流行毒株KF650375...
- 陈冰清李震董世娟于瑞嵩司伏生谢春芳
- 文献传递
