喻刚
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
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- 重组四价A群链球菌疫苗的基因克隆、表达纯化和免疫原性的初步研究
- M蛋白是A群链球菌细胞壁中的最重要的蛋白质抗原,根据其抗原特异性的血清分型有150种以上。抗M蛋白抗体为保护性抗体,于链球菌感染后数周至数月内产生,一般可存在1-2年,有的甚至长达10-30年,特异性的抗M蛋白抗体可抵抗...
- 喻刚
- 关键词：克隆原核表达免疫原性共同抗原
- 文献传递
- A群链球菌疫苗的研究进展被引量：3
- 2009年
- A群链球菌(GAS)是人类细菌感染最常见的病原菌之一,其疫苗的研发仍是尚未解决的难题。本文介绍了目前GAS疫苗研发的不同策略,并重点阐述了M蛋白多肽疫苗的最新研究进展。
- 喻刚董太明全家妩
- 关键词：A群链球菌M蛋白多肽疫苗
- 阳离子脂质体DOTAP佐剂对H5N1流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响被引量：4
- 2016年
- 目的研究阳离子脂质体DOTAP佐剂对H5N1型流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响。方法制备DOTAP阳离子脂质体流感病毒裂解疫苗（简称DOTAP流感裂解疫苗）,检测其包封率。将BALB/c小鼠分为13组,分别用含0.1、1.0、10.0μg HA/只剂量以DOTAP、Al（OH）3、CPG-ODN为佐剂以及不含佐剂的流感裂解疫苗于0、21天皮下免疫,PBS作为对照组,用血凝抑制试验检测小鼠初次免疫后21、42天血清HI抗体滴度;用ELISA检测初次免疫后21、42天血清特异性IgG抗体、IgG1、IgG2a亚类抗体滴度,以及初次免疫后42天小鼠脾脏单个核细胞体外经抗原刺激后细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌水平。将BALB/c小鼠分为3组,分别用含不同DOTAP剂量（100、300、600μg/只）的DOTAP流感裂解疫苗于0、21天皮下免疫,检测初次免疫后21、42天小鼠血清HI抗体滴度和IgG抗体滴度。结果 DOTAP流感裂解疫苗粒径在300-400 nm,带正电荷,包封率在50%以上;DOTAP流感裂解疫苗诱导的HI抗体水平和特异性IgG抗体水平均高于流感裂解疫苗,而与铝佐剂和Cp G-ODN佐剂间差异无统计学意义;DOTAP流感裂解疫苗产生的抗体仍以IgG1亚类抗体为主,免疫后42天诱导的IgG2a亚类抗体水平高于流感裂解疫苗和铝佐剂,低于Cp G-ODN佐剂;DOTAP流感裂解疫苗免疫后既分泌高水平Th1型细胞因子IFN-γ,同时也分泌高水平Th2型细胞因子IL-4;不同DOTAP剂量的DOTAP流感裂解疫苗免疫后,其HI抗体滴度和IgG抗体滴度在低、中、高剂量组之间存在明显的量效关系。结论 DOTAP作为H5N1型流感病毒裂解疫苗的佐剂可显著提高流感裂解疫苗的免疫原性,其对体液免疫应答的增强作用不低于铝佐剂和Cp G-ODN佐剂,并具有诱导细胞免疫应答的能力。
- 赵巍喻刚郝鹏亮韩锡鑫黄晓媛杨晓明
- 关键词：阳离子脂质体佐剂血凝抑制抗体细胞因子
- A群链球菌四价重组蛋白的表达、纯化及其免疫原性被引量：1
- 2010年
- 目的原核表达并纯化A群链球菌M1、3、6、18型四价重组蛋白,并检测其免疫原性。方法以克隆质粒pUC18-Strep4为模板,PCR法扩增四价重组蛋白基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒,转化E.coilM15,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。采用Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化重组蛋白。以该蛋白免疫家兔,ELISA法检测血清抗体滴度;间接免疫荧光法(IFA)检测A群链球菌型特异性抗体;体外杀菌试验检测杀菌抗体活性。结果四价重组蛋白表达质粒pQE30-Strep4经双酶切和测序,证明构建正确。重组蛋白相对分子质量与预期相符,表达量约占菌体总蛋白的30%,为可溶性表达。纯化后蛋白纯度可达90%以上,并可诱导家兔产生高滴度的M1、3、6型特异性杀菌抗体。结论已成功表达了A群链球菌四价重组蛋白,纯化后的蛋白可诱导家兔产生针对A群链球菌M1、3、6三个血清型菌株的特异性杀菌抗体。
- 喻刚杨京生全家妩
- 关键词：A群链球菌重组蛋白原核表达免疫原性
- 阳离子脂质体DOTAP作为乙肝疫苗佐剂的免疫增强效果被引量：2
- 2016年
- 目的探讨阳离子脂质体DOTAP（2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵）作为乙肝疫苗佐剂的免疫增强效果。方法薄膜蒸发复水法制备DOTAP阳离子脂质体乙肝疫苗,检测其粒径、Zata电位、包封率;将BALB/c小鼠随机分为5组：DOTAP阳离子脂质体乙肝疫苗组（DOTAP佐剂组）、不加佐剂的乙肝疫苗组（HBS组）、乙肝疫苗加铝佐剂组（铝佐剂组）、乙肝疫苗加CPG-ODN佐剂组（CPG-ODN佐剂组）以及PBS对照组,免疫剂量分别为0.2、2μg/（只·0.1ml）,每个剂量10只小鼠,分别于0、28d经肌肉免疫,0、14、28、42d采血,分离血清,ELISA法检测血清中抗HBs特异性IgG抗体、亚型抗体（IgG1、IgG2a）滴度。结果制备的阳离子脂质体乙肝疫苗平均粒径200~300nm,粒径分布均匀,带正电荷,包封率在70%以上。DOTAP佐剂组血清IgG抗体水平明显高于HBS组,其中2μg剂量组差异有统计学意义（P〈0.05）;与铝佐剂组相比,两个剂量组差异均无统计学意义（P〉0.05）;0.2μg剂量组显著低于CPG-ODN佐剂组（P〈0.05）。DOTAP佐剂组可同时诱导高水平的IgG1、IgG2a型抗体,两个剂量组产生的IgG1型抗体水平均与铝佐剂组相当（P〉0.05）,但IgG2a型抗体滴度均明显高于铝佐剂组（P〈0.05）;两个剂量DOTAP佐剂组产生的IgG1、IgG2a型抗体水平与CpG-ODN佐剂组相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论DOTAP阳离子脂质体作为重组乙肝疫苗的佐剂具有良好的免疫增强效果,其对体液免疫的增强作用不劣于铝佐剂和CPG-ODN佐剂,DOTAP佐剂可同时诱导Th2细胞和Th1细胞介导的免疫应答。
- 喻刚郝鹏亮韩锡鑫韩静赵巍黄晓媛杨晓明
- 关键词：阳离子脂质体乙肝疫苗佐剂抗体
- 一种作为A群链球菌四价疫苗保护性抗原的重组多肽
- 本发明提供了一种通过基因重组技术制备的重组多肽，该重组多肽由我国广东省流行的风湿热原性A群链球菌M1、M3、M6、M18四个血清型的M蛋白N端含保护性抗原表位，不含人体交叉反应表位的型特异性氨基酸序列以及这四个血清型M蛋...
- 喻刚杨京生全家妩
- 四价重组A群链球菌多肽疫苗基因序列的合成及克隆被引量：1
- 2009年
- 目的设计针对可引起风湿热的A群链球菌M1、3、6、18四个血清型的重组多肽疫苗,合成并克隆该重组多肽疫苗的核苷酸序列。方法从美国疾病预防和控制中心(CDC)数据库获得A群链球菌1、3、6、18四个血清型M蛋白型特异性序列,根据文献报道并结合生物信息学的方法,筛选每一个血清型的特异性序列中与人体组织蛋白无同源性的区段,将其按1-3-6-18型的顺序串连,在串联序列的C-端加上一个四个血清型所共有的与人体组织蛋白无交叉表位、且具有一定免疫原性的保守序列J14。对设计的多肽疫苗的氨基酸序列进行与人体组织蛋白的BlastP比对、亲水性分析、二级结构分析、空间结构分析以及B细胞表位预测。采用DNAWORK2.0在线软件设计一组寡核苷酸引物,OverlapPCR方法合成该多肽疫苗的核苷酸序列,并在5′端和3′端分别引入BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点,将该序列双酶切后克隆至pUC18载体上,并测序。结果软件分析显示,设计的多肽疫苗与人体组织蛋白无同源性,有较好的亲水性,二级结构与空间结构均与天然M蛋白相似,在每一个血清型的区段都可能存在B细胞表位。成功扩增出了该多肽疫苗的DNA序列,并获得了一个与设计序列完全一致的重组克隆载体。结论已成功设计了一种四价重组A群链球菌多肽疫苗,为其重组表达和免疫原性的研究奠定了基础。
- 喻刚杨京生全家妩
- 关键词：A群链球菌多肽疫苗基因序列克隆
- 康赛宁对体外培养的人肝癌细胞的影响及与乙肝疫苗联合免疫对小鼠的免疫增强作用
- 2006年
- 目的研究A群溶血性链球菌制剂(康赛宁)对体外培养的人肝癌细胞系Hep3B和HepG22.2.15的影响及与乙肝疫苗联合免疫对小鼠的免疫增强作用。方法用不同浓度的康赛宁作用于人肝癌细胞Hep3B和HepG22.2.15,观察细胞形态学,MTT比色法检测细胞活性,EIA法检测培养上清HBsAg、HBeAg含量,吖啶橙直接染色检测细胞凋亡,Southernblot分析细胞DNA片段。给NIH小鼠腹腔注射康赛宁和乙肝疫苗,检测血清中HBs抗体、转氨酶水平。给普通小鼠腹腔注射康赛宁和乙肝疫苗,观察注射前后的体重变化。结果康赛宁可抑制HBsAg及HBeAg的分泌,使染色体DNA发生有规律的断裂,促使细胞发生凋亡。与乙肝疫苗联合免疫,可提高小鼠血清中HBs抗体水平。无论单用或合用康赛宁,对小鼠均无明显毒副作用。结论康赛宁对体外培养的人肝癌细胞系有影响,与乙肝疫苗联合免疫对小鼠有免疫增强作用。
- 陈克金刘建喻刚全家妩
- 关键词：康赛宁人肝癌细胞免疫增强作用体外培养
- 人白细胞介素-18突变体的虚拟筛选及其活性
- 2008年
- 目的筛选合适的人白细胞介素-18(hIL-18)突变体,并检测其活性。方法运用分子模建工具,模建出IL-18受体及IL-18/IL-18R复合物的分子结构,分别虚拟突变IL-18的4个半胱氨酸为另外19种氨基酸,以野生型IL-18为模板进行同源模建,建立其三维结构模型,计算其IL-18/IL-18R复合物三维结构及分子间作用能变化情况,筛选几种突变方案。运用分子生物学技术构建突变体,表达纯化后进行活性检测。结果根据理论预测情况,筛选了12株突变体。突变的质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确。突变体蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度大于90%。纯化的C38Glu、C127Ser等几株突变体在低浓度时,活性轻微上升,与理论预测结果基本相同。结论已成功构建了多株IL-18的突变体,运用生物信息学方法进行先期筛选有助于加快IL-18的突变研究。
- 杨京生喻刚胡勇全家妩
- 关键词：突变体活性
