姜平
- 作品数：485 被引量：1,900H指数：22
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异与免疫控制新技术基础研究
- 姜平李玉峰王先炜蒋文明柏坤桃蔡宝祥黄娟王兴龙陈溥言杨宝收
- (1)在国内较早开展PRRSV遗传变异与分子流行病学研究，首先证明中国PRRSV流行毒株存在5种GP5糖基化位点变化类型，发现中国存在高致病性PRRSV，PRRSV流行毒株间存在自然基因重组现象；(2)利用重组腺病毒系统...
- 关键词：
- 关键词：兽药
- 猪Ⅱ型圆环病毒重组腺病毒
- 本发明猪II型圆环病毒(PCV-2)重组腺病毒，属于高新生物技术领域。通过PCR技术扩增PCV-2编码Cap蛋白的ORF2全基因序列，并把该基因序列克隆入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle-CMV中，与腺病毒载体系...
- 姜平王先炜李玉峰
- 文献传递
- 牛分枝杆菌感染巨噬细胞(THP-1)全基因表达谱变化的研究
- 2009年
- 目的分析可用于牛结核病免疫学诊断的候选靶标,同时初步探讨由牛分枝杆菌(Myco-bacterium bovis)引起人结核病的免疫学发病机制。方法牛分枝杆菌(AF 2212/97)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis(H37Rv))感染人的模式巨噬细胞(THP-1),采用含有22000个基因全长的基因芯片分析感染72h后的THP-1细胞全基因组的在转录水平的表达谱变化。在确定所分析的芯片的特异性和稳定性均达到要求的基础上,通过GO显著性统计分析,研究表达变化的基因所对应蛋白的分子功能,生物过程以及细胞组分;进一步采用Pathway显著性统计分析,研究表达差异蛋白之间的相互作用。结果感染H37Rv后的THP-1细胞,存在290个差异基因表达,其中170个上调表达,120个下调表达,与以往的结果类似。牛分枝杆菌感染的THP-1细胞中有1899(8.6%)个基因差异表达,其中1075个基因被上调表达(56.6%),其他43.4%被下调。1899个基因中1674个在GenBank有记录,263个是新基因,,基质金属蛋白酶12(H200000442)被上调达60.4921倍;下调幅度最大的蛋白丝氨酸/半胱氨酸抑制酶(H200006177)被下调6.29倍。采用GO分析发现,这些基因对应的多为炎症因子蛋白、凋亡蛋白、细胞外基质蛋白、T细胞受体信号通路相关蛋白等。其中与炎症相关的的蛋白有47个,如TNF、IL8、CXCL3、CCL8、CCL7、IFNK、IL-26、CCL28等。随后的Path-way分析差异表达基因对应的2014个蛋白,展示了一系列的引起结核病发病的重要信号传导通路。结论基因表达谱研究可为牛结核病发病机制及其诊断研究提供大量有益的生物学信息。
- 高峰李卫民李传友刘毅孙照刚张健源姜平范伟兴
- 关键词：巨噬细胞细胞因子类基因表达谱
- 塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用被引量：13
- 2019年
- 塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,可引起成年母猪水疱性病变,并导致新生仔猪死亡。为建立SVA的快速检测方法,本研究对NCBI发表的40株SVA的基因序列进行同源比较,选择保守区域设计了3对引物P1、P2和P3,从中筛选出最佳扩增引物,通过对引物浓度、退火温度、延长时间、循环次数进行优化,成功建立了SVA的RT-PCR检测方法。用该方法检测SVA、脑心肌炎病毒(EMCV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应,具有良好的特异性。敏感性试验结果显示,病毒检测限可达1TCID50,比国外文献报道的检测方法灵敏性更高。用该方法检测山东省的100份猪组织样品,阳性率为2%。本研究所建立的方法特异性强、敏感性高、可靠性好,为SVA的快速检测及流行病学调查提供了有效的技术手段。
- 范慧李亮姜平王先炜李玉峰白娟
- 关键词：RT-PCR
- 1株抗欧洲型和美洲型PRRSV核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子量约为40 ku。用纯化的重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体。经细胞融合获得一株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,命名为1 B6,将其连续培养20代后仍能稳定分泌抗体。亚型鉴定结果为IgG1型,其轻链为κ链;间接免疫荧光试验和免疫印迹试验均证明,1B6单抗既能与欧洲型PRRSV反应,也能与美洲型PRRSV反应;ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:640,腹水的效价为1:256 000,为猪繁殖与呼吸综合征的诊断奠定了基础。
- 王晓丰李玉峰王先炜王海燕姜平
- 关键词：PRRSV核衣壳蛋白单克隆抗体NUCLEOCAPSID间接免疫荧光试验免疫印迹试验
- PRRSV不同毒力毒株诱导Toll样受体和细胞因子表达特性的比较
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因容易变异,不同流行毒株毒力差异较大,造成严重经济损失,但其免疫和致病机制尚不清楚。本研究将24 头仔猪平均分成4 组,每组6 头,分别接种高致病性PRRSV 分离株BB0907(H...
- 张莉莉刘捷白娟王晓晔李玉峰姜平
- 关键词：PRRSVTLRS细胞因子
- 表达PRRSV M蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究
- 本研究通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株的M蛋白基因,将其克隆重组到人血清5型腺病毒载体中,转染293细胞,制备重组腺病毒rAd-M.RT-PCR和IFA方法鉴定,结果表明rAd-M可表达...
- 汤景元姜平蒋文明李玉峰马苏
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重组腺病毒免疫反应疫苗
- 重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在鸭体内的吸收代谢及组织分布
- 2014年
- 研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量;连续3次肌注rLTB后,观察临床症状和剖检病理变化,并采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和大脑制备组织切片,HE染色观察组织病理学变化,免疫酶组织化学染色观察rLTB在各脏器内的分布及含量变化。结果表明:鸭血清中的rLTB含量变化及维持时间与rLTB注射剂量呈正相关。1 mg/kg注射组2 h达到峰值,维持至6 h开始下降,24 h后基本检测不到;50,100 mg/kg注射组分别于2 h和1 h达到峰值,并均维持至12 h才开始下降,48 h后基本检测不到。HE染色切片显示50 mg/kg注射组肝细胞轻度浊肿变性,肺脏轻微炎症;100mg/kg注射组肝细胞浊肿变性明显、肺脏重度炎症、脑组织出现局灶性坏死。免疫组化染色结果显示,在被检脏器中均检出rLTB,以大脑含量最高,脾脏和肝脏次之,心脏和肺脏检出量低。rLTB大剂量肌肉注射可引起鸭一定的组织学病变,对鸭的安全使用剂量应不超过50 mg/kg。
- 周晓丽王一成姜平袁秀芳李军星杜晓莉
- 关键词：吸收代谢
- 串联表达PRRSV M与GP5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究被引量：16
- 2006年
- 利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因,按正确的读码框与GP5基因串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5,经PCR、测序鉴定正确。PmeⅠ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA。重组腺病毒DNA经PacⅠ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞,在细胞内包装成完整的腺病毒,通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确地表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应)。证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础。
- 蒋文明姜平李玉峰汤景元王先炜杜以军
- 关键词：PRRSVMGP5重组腺病毒体液免疫
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学研究进展
- 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染引起的一种急性接触性传染病,主要引起妊娠母猪的繁殖障碍...
- 姜平邓雨修
- 文献传递
