宫倩
- 作品数：11 被引量：9H指数：2
- 供职机构：上海医药工业研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 白色生物技术及其应用进展被引量：1
- 2006年
- “白色”生物技术也叫做工业生物技术,是利用某些微生物或酶进行物质转化,生产新产品或改进原有工业处理过程的技术。其产品可生物降解,生产过程能耗低,废弃物少。它是一门涉及生物学、微生物学、分子生物学、化学以及工程学等多学科的研究领域。综述了白色生物技术的产业优势及其涉及的研究领域,并从生物催化、生物材料、生物能源等方面概述了白色生物技术的应用进展。
- 宫倩胡又佳朱春宝
- 关键词：生物催化生物材料生物能源
- 柔红霉素C-14羟化酶基因在E.coli中的克隆、融合表达及酶的纯化被引量：1
- 2006年
- doxA基因编码柔红霉素C-14羟化酶(DoxA)。本研究将来自Streptomyces coeruleorubidus SIPI-1482的doxA基因克隆至高效表达载体pET32a中,并在E.coli中表达。经Western blotting实验证明产物融合蛋白表达正确且以包函体形式存在,并初步研究了DoxA的分离纯化方法。
- 谢丽萍宫倩胡又佳朱春宝朱宝泉
- 关键词：融合蛋白纯化
- 天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中dnrV基因的克隆及应用被引量：1
- 2007年
- 通过PCR从柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌SIPI-1482基因组DNA中扩增出约840bp的目的片段,其中包括了长度为828bp的dnrV全长序列。将dnrV基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-32a(+)及pET-28a(+)中,在宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导后表达,经SDS-PAGE电泳和Western blotting验证正确。进一步将dnrV和doxA基因克隆至链霉菌表达载体pYG505和pYG907并转化SIPI-1482,筛选得到的硫链丝菌素抗性转化子发酵实验证明两个基因的协同表达能提高柔红霉素的产量。
- 宫倩谢丽萍胡又佳朱春宝朱宝泉
- 关键词：柔红霉素克隆
- 蒽环类抗生素产生菌dnrX基因片段及由其制得的基因阻断工程菌和应用
- 本发明公开了一种来源于蒽环类抗生素产生菌天蓝淡红链霉菌(Streptomyces coeruleorubidus)的dnrX基因的部分基因dnrX′、以及dnrX′的基因片段dnrX″的核苷酸序列，以及含有这些序列的表达...
- 朱春宝宫倩胡又佳朱宝泉
- 文献传递
- 天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中酮还原酶基因dnrU的阻断突变研究被引量：1
- 2007年
- 目的:研究柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中酮还原酶基因dnrU阻断后的产物(13s)-13-二氢柔红霉素及其他发酵产物的变化。方法:利用同源重组的原理,以大肠杆菌质粒pUC18为基础构建了dnrU基因交换质粒,通过在SIPI-1482染色体上的dnrU基因中插入安普霉素抗性基因来筛选dnrU的阻断突变株。结果和结论:PCR验证表明成功地阻断了dnrU基因。dnrU基因敲除后,重组菌发酵产物中(13s)-13-二氢柔红霉素消失,而其他发酵中间产物也有一定变化。
- 谢丽萍宫倩胡又佳朱春宝朱宝泉
- 关键词：天蓝淡红链霉菌同源重组
- 柔红霉素产生菌SIPI-1482中dnmV基因功能的阻断及恢复被引量：3
- 2006年
- dnmV基因产物为柔红霉素生物合成途径中TDP-15-脱氧已糖C4酮基还原酶,破坏该基因能阻断柔红糖胺的合成,进而阻断柔红霉素的产生。从天蓝淡红链霉菌(S．coeruleorubidus)SIPI- 1482基因组DNA中经PCR扩增出dnmV及其上游dnmU基因片段,并由此构建了用于阻断dnmV基因的同源重组质粒pYG817,转化SIPI-1482菌株后成功地破坏了dnmV基因,发酵结果显示阻断突变株不再代谢产生柔红霉素,为引入新的基因来改变代谢产物的糖基结构打下了基础。通过导入dnmV基因表达质粒可重建该突变株的生物合成途径,恢复产生柔红霉素,但产量比出发菌株要低。
- 尚珂宫倩胡又佳朱春宝朱宝泉
- 关键词：柔红霉素同源重组基因阻断
- 天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中dnrX基因的敲除及多柔比星产生菌的构建被引量：3
- 2007年
- 柔红霉素是合成重要抗肿瘤抗生素多柔比星的前体,由微生物发酵产生。通过PCR从国内柔红霉素生产菌种天蓝淡红链霉菌SIPI-1482基因组DNA中扩增出约1080bp的dnrX部分序列,将PCR扩增片段中985bp的片段亚克隆至大肠埃希菌质粒pYG813构建了同源重组突变质粒pYG963,转化SIPI-1482原生质体并成功地敲除了dnrX基因,得到一株稳定的突变株。该突变株的发酵试验表明dnrX基因所编码的酶的功能已经被有效地阻断,对酸敏感的副产物减少,柔红霉素的产量增加了近3倍,将原野生菌改造成为多柔比星产生菌,发酵效价与原野生菌株柔红霉素的发酵效价相当,为直接发酵法生产多柔比星打下了基础。
- 宫倩尚珂胡又佳朱春宝朱宝泉
- 关键词：多柔比星同源重组
- 蒽环类抗生素产生菌dnrX基因片段及由其制得的基因阻断工程菌和应用
- 本发明公开了一种来源于蒽环类抗生素产生菌天蓝淡红链霉菌(Streptomyces coeruleorubidus)的dnrX基因的部分基因dnrX′、以及dnrX′的基因片段dnrX″的核苷酸序列，以及含有这些序列的表达...
- 朱春宝宫倩胡又佳朱宝泉
- 文献传递
- 一种蒽环类抗生素产生工程菌及其应用
- 本发明公开了一种蒽环类抗生素产生工程菌及其在制备蒽环类抗生素中的应用。该工程菌是在天蓝淡红链霉菌的dnmV基因核苷酸序列的限制性内切酶位点处插入或替换成抗生素抗性基因和表柔红霉素合成基因，使dnmV基因被阻断的工程菌；或...
- 朱宝泉朱春宝尚珂宫倩胡又佳
- 文献传递
- 柔红霉素生物合成基因dnrV、dnrX的研究
- 柔红霉素和阿霉素是临床上重要的蒽环类抗生素，主要用于多种实体瘤和急性白血病的治疗，在临床上作为一线抗肿瘤药物使用。阿霉素是柔红霉素的C-14羟化产物，比柔红霉素抗肿瘤谱更广，毒副作用更低。目前工业上生产柔红霉素和阿霉素分...
- 宫倩
- 关键词：柔红霉素阿霉素同源重组
- 文献传递
