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粘膜佐剂肠毒素LT蛋白制备及配伍疫苗研制: 刘惠莉赵艳敏师小潇唐思静哈卓殷秀辰陶洁倪建平董端凝李星潘洁饶柏钟; 项目属于兽医学领域-新型疫苗及疫苗佐剂研制。大肠杆菌热敏性肠毒素(Heat-labile toxin，LT)是高效粘膜佐剂，基因改造的无毒mLT粘膜佐剂蛋白与畜禽疫苗配伍，研制可经粘膜免疫的新型疫苗，提升免疫的针对性和...; 关键词：; 关键词：兽医学

猪流感病毒分离株A/Swine/Zhejiang/1/2007遗传特性分析: 用套式PCR检测结合鸡胚分离鉴定方法,从发生呼吸道疾病的猪场分离到一株病毒A/Swine/Zhejiang/1/2007（SW/ZJ/1/2007）。对其基因组序列分析,发现SW/ZJ/1/2007与禽源H1N1 SIV...; 张鹏超师小潇潘洁饶柏忠刘惠莉; 关键词：猪流感病毒遗传进化分析; 文献传递

猪流感病毒表位抗原基因串联表达及小鼠免疫试验: 猪流感（Swine influenza，SI）是由A型流感病毒引起的一种猪的急性呼吸道传染病，一年四季均可发生，各种日龄的猪都可感染，目前对猪流感尚无有效的治疗手段，临床上主要通过疫苗接种预防该病.SI的商品化灭活疫苗主...; 师小潇; 关键词：猪流感病毒免疫试验

猪流感病毒多表位抗原的小鼠黏膜免疫试验被引量：3: 2009年; 为探讨经黏膜途径免疫接种猪流感病毒(SIV)多肽疫苗的可行性,选择STV主要结构蛋白血凝素(HA)的T、B抗原表位,将多个表位片段串联,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,对串联表达的重组猪流感病毒蛋白SIV-ep1、SW-ep2、SIV-el2进行了小鼠免疫试验。重组蛋白以包涵体形式表达,经洗涤定量后,采用灌胃途径免疫6周龄KM小鼠,检测免疫小鼠抗体及细胞免疫水平。结果发现三免后各免疫组血清IgG抗体与PBS对照组差异极显著(P<0.01);黏膜分泌型IgA抗体,所有免疫蛋白组与PBS组差异均极显著(P<0.01);细胞免疫检测,所有免疫组小鼠外周血T淋巴细胞增殖明显;猪流感病毒血凝抗体检测,SIV-ep1免疫组、SIV-ep2免疫组、SIV-ep1与LT蛋白免疫组抗SIVH1N1亚型HI效价达1:1024,SIV-el2蛋白免疫组HI效价达1:512。结果表明,猪流感病毒重组多表位抗原灌胃免疫小鼠,能产生理想的黏膜免疫抗体和血清抗体。; 师小潇马勋唐思静刘惠莉; 关键词：猪流感病毒多表位抗原黏膜免疫小鼠

猪流感病毒分离株的特性及致病性被引量：2: 2013年; 为了解猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)分离株A/Sw/SH/1/2007(H1N2)的特性,对毒株的抗原位点、受体位点、潜在糖基化位点进行比较分析,并进行雏鸡、小鼠致病性试验。结果表明,A/Sw/SH/1/2007与北美经典株A/Sw/Tennes/1455/1977(H1N1)HA抗原位点最接近,HA1蛋白4个抗原位点中只有Ca位点有2个氨基酸改变,发生抗原变异,Sa、Cb抗原位点均只有1个氨基酸发生改变,不影响其抗原性;受体位点高度保守,只有183位发生改变;A/Sw/SH/1/2007有6个潜在的糖基化位点,在276位丢失了1个潜在的糖基化位点,但同时在274位出现了1个新的糖基化位点。NA蛋白抗原位点序列与广西分离株A/Sw/Guangxi/13/2006(H1N2)同源性最高,除401位氨基酸发生G→R改变外,其余抗原位点均保守。耐药性分析显示,该病毒对金刚烷胺、扎那米韦药物均敏感。致病性试验结果表明,A/Sw/SH/1/2007对雏鸡无致病性,ICPI为0;肌注小鼠2周内死亡100%,滴鼻小鼠死亡80%,存活小鼠血凝效价为27,而与经典H1N1亚型SIV毒株只有较低的交叉凝集,HI为23.4～3.6。; 哈卓张鹏超李倩师小潇饶柏忠刘永杰刘惠莉; 关键词：猪流感病毒抗原位点受体位点

大肠杆菌热敏性肠毒素对NDV疫苗免疫增强效果研究: 大肠杆菌热敏性肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)是产肠毒素大肠杆菌分泌的一种不耐热肠毒素,具有很强的毒性。由于LT蛋白具有免疫原性并且能够增强共免疫原的免疫效果,是良好的粘膜佐剂。但LT的毒性...; 唐思静赵艳敏潘洁师小潇刘惠莉; 文献传递

猪流感病毒SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：11: 2010年; 为研究猪流感病毒(SIV)感染后SIV在体内的分布规律,本研究设计针对SIV NP基因保守区引物,建立了SIV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法对SIV核酸检测灵敏度为30TCID50,对健康猪肺组织cDNA、猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)核酸呈阴性反应。采用建立的荧光定量RT-PCR方法对人工感染A/swine/Shanghai/1/2007/H1N2(Sw/SH/1/2007)猪进行检测,结果显示:病毒在猪鼻腔粘膜持续存在至感染后第8d;肛门拭子在感染后2d～8d可持续检测到病毒核酸;喉头、气管在感染后第3d可检到病毒核酸,并持续至第10d;肺部淋巴结、脾脏在感染后5d～7d检测到病毒核酸阳性;其它脏器均未检测到病毒核酸,从而确定呼吸道系统及脾脏是SIV定殖的主要场所,SIV感染猪后向外排毒周期约为1周。; 张鹏超师小潇哈卓刘永杰刘惠莉; 关键词：猪流感病毒 SYBR

大肠杆菌热敏性肠毒素作为疫苗粘膜免疫佐剂功能研究: 刘惠莉赵艳敏潘洁袁世山唐思静葛艳师小潇邢继兰张建武陈波饶柏忠徐泉兴; 该研究通过定点突变技术，对决定LT蛋白毒性的几个关键位点进行突变，获得3个单位点突变体和3个双位点突变体，利用原核表达系统获得突变体蛋白的表达。通过对纯化的各突变体蛋白毒性、酶活性检测，筛选毒性降低的重组蛋白，与疫苗经粘...; 关键词：; 关键词：粘膜免疫佐剂免疫接种传染病预防

猪流感病毒多表位融合蛋白对小鼠的免疫原性分析: 2011年; 作者拟利用表位多肽的抗原性及黏膜佐剂免疫增强作用,设计可通过黏膜途径免疫接种的猪流感病毒通用型疫苗。体外合成H1N1、H3N2亚型猪流感病毒表位抗原基因,C末端串联大肠杆菌热敏性肠毒素LTb基因,构建pET30(a)-ep-LTb表达载体,利用SDS-PAGE、Western blot分析重组融合蛋白表达及生物学特性,小鼠免疫试验分析融合蛋白免疫原性。SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量约38ku,主要以包涵体形式存在。重组蛋白可与抗His-tag抗体和CTB抗体发生特异性反应。ELISA及HI试验检测,经黏膜途径免疫的小鼠产生了针对重组表位模拟抗原蛋白及H1N1、H3N2亚型猪流感病毒的血清抗体及局部黏膜分泌型IgA抗体。利用猪流感病毒表位抗原与LTb基因串连获得的融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,且在黏膜接种局部产生理想的分泌型IgA抗体,能有效阻断病原由黏膜局部感染,为研制猪流感病毒通用型疫苗奠定了基础。; 师小潇哈卓丁长根潘洁饶柏忠刘惠莉; 关键词：免疫原性

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师小潇