张佳锴
- 作品数：10 被引量：9H指数：3
- 供职机构：厦门大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家大学生创新性实验计划厦门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Fas胞外区基因的构建、表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2010年
- 目的构建Fas胞外区(eFas)基因的表达载体,表达纯化重组蛋白,进行多克隆抗体的制备,为进一步功能研究奠定基础。方法通过重叠PCR获得eFas基因的编码序列,构建pET-22b(+)/eFas表达载体,转化大肠杆菌Rosetta-gami,IPTG诱导表达,Ni-NTA柱亲和纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白的纯度。将纯化的eFas融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,通过ELISA方法检测多克隆抗体的效价。结果获得了eFas的编码序列与表达载体,目的蛋白主要在包涵体中表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化的重组蛋白纯度达95%以上。结论eFas融合蛋白基因的构建、表达、纯化以及多克隆抗体的制备,为进一步研究Fas提供了材料。
- 张佳锴孟庆宇程小峰刘瑞振庄国洪
- 关键词：FAS细胞凋亡多克隆抗体
- 抗人死亡受体5单链抗体的构建表达纯化及活性分析
- 2012年
- 目的构建、表达、纯化抗人死亡受体5(DR5)单链抗体,并检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。方法采用RT-PCR获取鼠源性抗人DR5单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列,以一柔性连接肽连接二者,转入表达载体,以大肠杆菌表达融合蛋白,亲和色谱纯化后用MTT实验和凋亡检测试剂盒检测其凋亡诱导活性。结果获得的序列经比对为抗体重链和轻链可变区基因,表达纯化后的重组蛋白具有接近完整抗体的肿瘤细胞凋亡诱导活性。结论抗人DR5 scFv可作为诱导肿瘤细胞凋亡的候选药物,为肿瘤免疫学研究提供材料。
- 张佳锴程小峰庄国洪
- 关键词：死亡受体5单克隆抗体SCFV
- 抗人死亡受体5的单链抗体基因
- 抗人死亡受体5的单链抗体基因，涉及一种基因。提供抗人死亡受体5的单链抗体(aDR5-scFv)基因及制备方法与应用。所述抗人死亡受体5的单链抗体基因，是由连接肽连接抗体的轻链(V<Sub>L</Sub>)和重链(V<Su...
- 庄国洪张佳锴
- 抗人死亡受体5单链抗体特性分析被引量：3
- 2011年
- 目的探究抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(aDR5ScFv)的特异性。方法 ELISA检测aDR5ScFv的效价、亲和力和表位分析。Western blotting检测单链抗体的特异性。MTT检测aDR5ScFv对结肠癌细胞SW480的生长抑制。结果 ELISA显示抗人死亡受体5单链抗体抗体效价为1.2×104。通过间接ELISA证实aDR5ScFv与aDR5mAb识别DR5胞外段(eDR5,系本实验室自己构建)的同一个位点。aDR5ScFv的亲和力常数为2.12×10-2。eDR5与aDR5ScFv能够特异结合。MTT检测结果显示,aDR5ScFv抑制SW480细胞生长呈剂量依赖性,aDR5ScFv终质量浓度分别为0.225 mg/ml、0.45 mg/ml、0.9 mg/ml、1.2 mg/ml。200μl时,SW480细胞的存活率分别为97.7%,70.9%、70.1%、23.6%。结论 aDR5ScFv能与eDR5特异性结合,并有较强的活性。
- 程小峰张佳锴孟庆宇黄小平范鑫庄国洪
- 关键词：DR5单链抗体特异性SW480
- 抗人DR5单链抗体诱导HepG2细胞凋亡的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的探究抗人DR5单链抗体(scFv)ZF1对肝癌细胞株HepG-2的凋亡作用及机制。方法 MTT法检测ZF1对HepG-2的细胞毒效应;流式细胞术检测ZF1诱导HepG2的凋亡率;荧光显微镜观察经ANNEXIN-V/PI双染的HepG-2细胞;DNA Ladder检测HepG-2细胞的DNA特点;Western blotting检测Bcl-2、PARP蛋白的表达。结果 MTT结果显示ZF1抑制HepG-2细胞生长呈剂量依赖性,ZF1终浓度分别为0.225、0.45、0.9mg/ml、1.2mg/ml200μl时,HepG-2细胞的生长抑制率分别为28.8%、52.3%、65.3%、89.8%;流式细胞仪检测结果显示,终浓度分别为0.225、0.45、1.2mg/ml2ml作用HepG-2细胞4h,凋亡率分别为32.9%、56%、83.2%;荧光显微镜下可见早期凋亡细胞,细胞膜呈绿色荧光,细胞内有凋亡小体的形成,伴有核结构的变化;DNALadder出现明显的彗星尾状条带;Western blotting检测到ZF1诱导凋亡的细胞内Bcl-2、PARP蛋白表达上调。结论 ZF1可诱导HepG2细胞株凋亡,这种作用与HepG2细胞株表达Bcl-2、PARP蛋白蛋白表达上调相关。
- 孟庆宇程小峰张佳锴黄小平庄国洪
- 关键词：DR5单链抗体HEPG2细胞株凋亡
- 抗DR5单克隆抗体对佐剂型关节炎大鼠模型的作用分析及机制探讨
- 类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthrifis， RA)是以关节慢性炎症为特征的自身免疫性疾病。虽然RA的确切发病机制还不清楚，但是T细胞、B细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和滑膜成纤维细胞在关节发炎及疾病发展的过...
- 张佳锴
- 关键词：单克隆抗体佐剂型关节炎类风湿性关节炎细胞凋亡
- 文献传递
- Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及机理初探
- 2009年
- 目的:探讨Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)大鼠滑膜细胞凋亡作用及其可能机理。方法:注射弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型,分离并体外培养大鼠滑膜细胞。MTT检测、DNA倍体分析及流式细胞术分析Anti-DR5 mAb对大鼠滑膜细胞的凋亡作用,Western blot检测大鼠滑膜细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,Caspase抑制剂实验分析Anti-DR5 mAb对大鼠滑膜细胞凋亡作用的机制。结果:MTT实验表明Anti-DR5 mAb能抑制大鼠滑膜细胞的增殖,流式细胞术分析这种作用模式为细胞凋亡。Anti-DR5 mAb处理后的大鼠滑膜细胞中Caspase-3蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下调。Cas-pase抑制剂实验证明Anti-DR5 mAb诱导大鼠滑膜细胞的凋亡是通过Caspase途径实现的。结论:Anti-DR5 mAb诱导大鼠滑膜细胞的凋亡,这种作用与滑膜细胞表面Caspase-3、Bcl-2蛋白表达相关。
- 李文珠殷平张佳锴邱劲华胡庆中陶惠然庄国洪
- 关键词：MAB佐剂型关节炎滑膜细胞细胞凋亡
- 抗人死亡受体5单链抗体ZF1对鼠H22肝癌细胞的作用分析被引量：3
- 2010年
- 目的:研究抗人死亡受体5单链抗体ZF1对H22肝癌细胞体内外抑制增殖作用。方法:MTT法检测ZF1对H22肝癌细胞体外杀伤作用,流式细胞术检测ZF1诱导H22的凋亡率,建立H22移植瘤模型,随机分为PBS组、ZF1组、EPI组和ZF1/EPI联合组四组。观察肿瘤生长和小鼠体重变化情况。治疗13天后分离肿瘤组织,进行HE染色检查、TUNNEL法检测细胞凋亡。结果:体外实验显示:ZF1可抑制H22细胞的增殖,呈剂量依赖性,抑制率最高为84.5%。体内实验结果显示单独应用ZF1或联合应用ZF1/EPI时,肿瘤增长受到明显抑制。HE染色和TUNNEL分析结果表明ZF1可有效诱导肝癌肿瘤凋亡,ZF1/EPI联合组效果更明显,而对正常肝细胞无毒性。结论:单链抗体ZF1具有良好抑制H22细胞增殖的作用。ZF1和EPI联合应用效果更明显。
- 孟庆宇程晓峰张佳锴庄国洪
- 关键词：DR5单链抗体凋亡H22
- 抗人死亡受体5的单链抗体基因
- 抗人死亡受体5的单链抗体基因，涉及一种基因。提供抗人死亡受体5的单链抗体(aDR5-scFv)基因及制备方法与应用。所述抗人死亡受体5的单链抗体基因，是由连接肽连接抗体的轻链(V<Sub>L</Sub>)和重链(V<Su...
- 庄国洪张佳锴
- 文献传递
- 人死亡受体5全长基因的构建及转染胶质瘤细胞
- 2009年
- 目的构建人死亡受体5(death receptor5,DR5)全长基因真核细胞表达载体pcDNA3.1/DR5,pcDNA3.1/GFP/DR5,并观察其转染胶质瘤细胞U138的效果。方法通过重叠PCR获得DR5全长编码序列,构建pcDNA3.1/GFP/DR5,pcDNA3.1/DR5表达载体,利用脂质体转染试剂盒,分别将2种质粒pcDNA3.1/GFP/DR5、pcDNA3.1/GFP共转染胶质瘤细胞U138,转染后72h,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测DR5mRNA的表达,流式细胞术检测DR5的表达强度、检测Anti-DR5对胶质瘤细胞U138生长的影响。结果获得了DR5全长编码序列,成功瞬时转染U138,RT-PCR、流式细胞术检测结果表明,转染后U138细胞DR5mRNA、蛋白水平的表达明显增加,Anti-DR5可以明显抑制U138细胞的生长。结论获得了DR5全长编码序列,探索到成功转染DR5的最佳方法,为稳定筛选高表达DR5的U138细胞提供依据。
- 庄国洪黎之静孟庆宇陈彩霞王娟李文珠张佳锴朱迅
- 关键词：胶质瘤转染DR5基因构建
