张巍
- 作品数：10 被引量：50H指数：3
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省教育厅高等学校科学研究项目教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学化学工程更多>>
- JAK2结构及其功能研究进展被引量：8
- 2009年
- JAK2作为JAK家族的一个成员，有JH1～JH7七个结构域，分为FERM区（JH3～JH7）、V617F假激酶区（JH2）和激酶区（JH1）3个部分．JAK2与STATs所构成的信号途径在肾小管上皮细胞转分化、骨髓增殖性疾病的发生、白血病的发生和创伤脓毒症等方面都有重要的影响．但是其具体的作用机理还有待进一步的研究．AG490等JAK2特异性抑制剂和姜黄素等非特异性抑制剂能有效地调节JAK2的异常活性，控制与JAKs／STATs信号途径相关的疾病的发生．
- 张巍陈品林杜丽王凤阳祁超
- 关键词：JAK2
- 采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)Ras结合结构域的空间结构
- 2015年
- Ras结合结构域(RBD)是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(Ral GDS)家族成员C-端的高保守区,通过它连接Ras和Ras相关蛋白。利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶,按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶Glu-C(w/w)的结晶溶液(2 mol/L(NH4)2SO4,0.2 mol/L Na Ac,0.1 mol/L HEPES,5%MPD,p H 7.5)中,晶体3天长成可组装大小。利用X-射线晶体衍射技术解析了人Ral GDS的Ras结合域(Ral GDS-RBD)的晶体结构,对比鼠和人Ral GDS-RBD,主要是Ras结合区的C-端不同。人Ral GDS-RBD通过Glu838和Glu840在Ral GDS和Ras蛋白间形成氢键,而在同一位点,鼠Ral GDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键。人Ral GDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象,一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构。
- 黄雪英雷明沈阳张巍刘艳丽刘珂赵浩斌祁超
- 关键词：RAS蛋白
- 鲫鱼和青虾GPT的动力学特性及对杀螺药物的敏感性
- 2010年
- 从鲫鱼和青虾肝脏中分离谷丙转氨酶(GPT),以比活力为指标,L25(56)正交试验与极差分析法研究了GPT酶活力测定的最适条件,测定了Nic(氯硝柳胺)和CuSO4(硫酸铜)对GPT活力的影响。正交试验分析鲫鱼GPT活力测定最适条件:酶质量浓度2.0g/L、底物浓度2.0μmol/L、反应体系pH值7.0、反应温度30℃、反应时间55min,青虾GPT活力测定最适条件酶质量浓度3.0g/L、底物浓度0.5μmol/L、反应体系pH值7.5、反应温度45℃和反应时间45min。Nic和CuSO4对鲫鱼和青虾GPT活力均显示诱导作用,其0.002g/L时对鲫鱼GPT的诱导率分别为641.01%和61.22%,对青虾的分别为45.99%和67.57%。研究结果表明:2种GPT活力测定条件相差较大,酶质量浓度和底物浓度影响作用最大。鲫鱼和青虾GPT对Nic和CuSO4敏感度高,推定GPT可能是Nic和CuSO4中毒的生化靶点之一。
- 李娟娟李文新张巍邓灵福祁超
- 关键词：鲫鱼青虾敏感性谷丙转氨酶
- 贝类免疫机制研究进展被引量：19
- 2008年
- 贝类动物细胞免疫主要通过细胞的吞噬作用完成。溶酶体酶、凝集素、抗菌肽等体液免疫因子以杀菌、促进吞噬等方式参与贝类的免疫防御,阿片样活性肽、细胞因子、细胞激酶等是贝类免疫通信中的化学递质。化学递质通过介导免疫信号传导参与贝类的免疫防御,也是近年贝类的免疫研究的新热点。贝类生活环境中的各种因子能显著改变贝类的免疫机能,贝类对生态因子的敏感性使贝类的生态学研究成为人类等高等动物的生态免疫学研究模式。现代养殖业通过基因工程技术的手段来提高贝类的免疫力以适应养殖业的发展。
- 杜丽张巍陆逵王凤阳王爱民
- 关键词：贝类免疫机制细胞免疫体液免疫
- D1蛋白酶的克隆表达、纯化、生物活性测定及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 为了开发以D1蛋白酶作为靶标的新型除草剂,需要对先导化合物的生物活性进行检测和筛选。从菠菜中提取总RNA,逆转录合成cDNA,采用PCR扩增了CtpA的基因,连接至表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达,通过降低IPTG和诱导温度获得了可溶性表达的重组蛋白酶。采用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤柱层析对重组蛋白进行了纯化,SDS-PAGE和Western blotting结果证实目的蛋白为含有His-tag的融合蛋白。以合成的D1前体蛋白羧基端24肽作为模拟底物,采用高效液相色谱法测定了其水解活性,结果表明活性可达1.10nmol/(mg·min),为文献报道数据的15倍。纯化后的CtpA蛋白免疫日本的长耳大白兔制备多克隆抗体,ELISA法测定其血清抗体的效价高达1:100000。该结果为抑制剂先导化合物的筛选和酶蛋白与化合物的作用机理研究提供了必要的基础。
- 李慧张巍申明霞李伟国刘艳丽刘素芳祁超
- 关键词：纯化生物活性多克隆抗体
- 流式细胞仪在免疫学研究中的应用被引量：18
- 2008年
- 随着现代激光技术、电子检测技术和电子计算机技术等的迅速发展,流式细胞仪(FCM)在免疫学、生物学、遗传学、血液学、临床检验等领域中得到了更加广泛的应用。在免疫学研究领域,FCM以快速、灵活及定量等特点被广泛地应用于基础研究和临床治疗的各个方面,尤其是与单克隆抗体技术的结合,使其在免疫分型、分选、免疫监测、免疫细胞的系统发生及特性研究等方面发挥了重要的作用,成为现代免疫学研究不可缺少的工具。该文对近年来流式细胞仪在免疫学研究中的应用进展进行了综述。
- 刘涛张巍王凤阳杜丽成鹰
- 关键词：流式细胞仪免疫学
- 胰岛素受体底物PH结构域相互作用蛋白结构和功能研究进展被引量：2
- 2009年
- PHIP是一种与胰腺β细胞中胰岛素受体底物(IRS)的PH结构域相互作用的蛋白。根据小鼠PHIP(mPHIP)mRNA翻译的不同起始位点,除全长的PHIP1外,mPHIP基因还编码其他3种不同变异体。在胰岛素诱导的信号途径中,主要分布于细胞核的PHIP1和IRS-1的PH结构域相互作用,介导IRS蛋白酪氨酸的磷酸化。IRS-2和PHIP1的共表达能诱导IRS在细胞膜上的定位,促进葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)向细胞质膜的转移。PHIP1的表达能提高β-细胞内细胞周期蛋白D2的表达,促进β细胞的生长。PHIP1的表达活化蛋白激酶B(PKB),活化的PKB能明显抑制β细胞的凋亡。PHIP与胰岛素信号传导途径中其他信号分子的相互作用机制尚不明确。
- 张巍杜丽王凤阳祁超
- 关键词：PH结构域胰岛素受体底物
- 海南黄牛HSF1 cDNA全长的克隆与序列分析被引量：1
- 2008年
- 目的:根据人、小鼠HSF1cDNA保守区序列设计引物,通过PCR方法扩增海南黄牛HSF1cDNA,并进行序列分析。方法:利用RT-PCR、半巢式PCR以及3'-RACE技术分段扩增得到了海南黄牛HSF1cDNA序列,测序正确后进行拼接。用DNAMAN 生物信息学软件分析海南黄牛HSF1 cDNA与赫里福德牛、人、小鼠同源性和海南黄牛HSF1蛋白的氨基酸组成、等电点、亲/疏水区等蛋白质性质,并根据各种动物HSF1蛋白绘制进化树。结果:(1)海南黄牛的HSF1 cDNA序列全长为1 993bp,包括150bp的5'非翻译区,1 578bp的开放阅读框以及264bp(不含poly(A)尾)的3'非翻译区,编码524个氨基酸,分子量为56.42 kD,等电点(pI)为 4.79。(2)海南黄牛的HSF1 cDNA与赫里福德牛、小鼠和人HSF1 cDNA的同源性分别为98.99 %、81.78 %、87.82 %,相应编码蛋白氨基酸序列的同源性分别为98.86 %、83.84 %、89.06 %,其中N-末端和C-末端高度保守,而中间区域存在缺失或替换。(3)根据氨基酸序列构建不同动物HSF1蛋白的进化树,与采用经典遗传分类法构建的进化树基本一致。结论:首次克隆了海南黄牛 HSF1 cDNA全长,分析表明:海南黄牛HSF1蛋白是亲水性蛋白,在8种动物中,其同源性大于73 %,高度保守。海南黄牛与赫里福德牛HSF1蛋白同源性高达98.86 %,在三聚体化区域、转录调节域和激活域存在6个位点的单氨基酸突变,这些发现为进一步揭示海南黄牛抗热性状形成的分子机制提供了重要依据。
- 成鹰李治深杜丽王凤阳刘涛申明霞张莉娜张巍吴科榜林杰材满初日嘎米华存祁超
- 关键词：CDNA克隆
- 稀有海洋放线菌Salinispora arenicola CNH643 DSM 44819的sare4854基因异源表达对链霉菌抗生素产量的影响
- 2014年
- 稀有海洋放线菌Salinispora arenicola CNH643DSM 44819的sare4854基因编码1个典型的SARP,但其确切功能没有得到认证.为了研究sare4854基因的功能,我们在链霉菌Streptomyces sp.AM-7161中异源表达了sare4854基因.实验结果表明,对比野生菌,转化子中抗生素的产量被明显抑制.生物信息学分析表明,sare4854除了与编码SARPs蛋白家族中的其他1样在N-端编码1个SARP样结构域外,在其C-端还编码有1个核苷三磷酸水解酶(nucleoside triphosphate hydrolases,NTPase)结构域.这可能是sare4854基因对Streptomyces sp.AM-7161抗生素产量负调控的主要作用机制.
- 舒晓余金龙吴绍文张巍马艳玲朱珉喆夏思思夏诗超张浩李爱英祁超
- 关键词：放线菌
- 海南坡鹿CDC42 cDNA的克隆、原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 应用RT-PCR方法对海南坡鹿细胞分裂周期蛋白42(Cell division cycle 42,CDC42)编码区进行扩增,将扩增产物与PET-42a载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行生物信息学分析;构建pET42a-hdCDC42表达载体,经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE、可溶性分析、纯化及Western blot分析。结果表明,海南坡鹿CDC42含有1个576 bp的开放阅读框,编码191个氨基酸。经IPTG诱导表达后,得到一个带有His-tag和GST的约54 kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约54 kD的特异性抗体结合带,表明海南坡鹿CDC42原核表达载体成功构建并表达。
- 张巍陈品林雷明成鹰陈欢曹献英杜丽张冬琳刘涛许世英符运南祁超王凤阳
- 关键词：海南坡鹿CDC42克隆原核表达
