张巍
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- CYP3A4基因转染人骨髓间充质干细胞联合环磷酰胺的抗肿瘤效应研究
- 目的:从人肝细胞中克隆细胞色素P4503A4（CYP3A4)基因，构建含CYP3A4的真核表达载体。分离、培养人骨髓间充质干细胞(Bonemarrow-derived mesenchymal stem cells，BMS...
- 张巍
- 关键词：慢性髓细胞白血病骨髓间充质干细胞环磷酰胺抗肿瘤效应
- 文献传递
- 含CYP2E1基因的重组腺病毒载体转染人骨髓间充质干细胞联合达卡巴嗪的抗肿瘤效应被引量：1
- 2010年
- 目的 构建含人细胞色素P-450 CYP2E1（CYP2E1）基因的缺陷型重组腺病毒载体,检测其协同化疗药物的抗肿瘤效应,为基因介导酶前药治疗提供新的思路.方法 克隆人肝CYP2E1全长cDNA,制备高滴度的重组腺病毒颗粒（1.2×1012 pfu/ml）.分离、培养、传代纯化及鉴定人骨髓间充质干细胞（BMSC）.用Transwell小室检测BMSC向肿瘤细胞的趋化迁移.将重组腺病毒分别转染BMSC和人黑色素瘤细胞A375细胞.荧光显微镜和RT-PCR、Western印迹法分别检测转基因细胞中外源增强绿色荧光蛋白（EGFP）、CYP2E1的表达.倒置显微镜、四甲基偶氮唑盐（MTT）和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）和碘化丙啶（PI）双染色法检测CYP2E1协同酶前药达卡巴嗪（DTIC）的抗肿瘤效应（实验分A375-CYP2E1组、BMSC-CYP2E1组和BMSC-CYP2E1＋A375组,并以各自空载体组作为对照;细胞接种后分别加入不同浓度DTIC）.结果 成功构建重组腺病毒载体pAd5CMV-NpA-CYP2E1和pAd5CMV-NpA-EGFP.成功分离BMSC,并证明BMSC可通过聚碳酸酯膜分别向下室内的K562和A375细胞迁移.荧光显微镜检测到转基因靶细胞EGFP表达,RT-PCR和Western印迹法均检测到目的基因在转基因细胞中高表达.倒置显微镜下见加入DTIC后BMSCCYP2E1＋A375组的死亡细胞明显多于对照组.MTT法示DTIC呈浓度依赖性抑制转CYP2E1基因的细胞生长,其中BMSC-CYP2E1＋A375组药物半数抑制量（IC50）值为（0.17±0.13）mmol/L,其对照组为（0.65±0.20）mmol/L,二者差异有统计学意义（P＜0.01）,可选0.05 mmol/L DTIC浓度作人BMSC的相对安全浓度.Annexin V/PI法示0.05 mmol/L DTIC处理细胞48 h后BMSC-CYP2E1＋A375组细胞凋亡率明显高于其对照组（26.8±2.0比8.7±1.3,P＜0.01）.结论 BMSC体外具有向肿瘤细胞趋化迁移的特性.重组腺病毒载体介导的CYP2E1转染BMSC具有协同化疗前药的抗肿瘤效应.
- 王季石胡晓彦张巍袁军杨远方琴
- 关键词：细胞色素P-450CYP2E1达卡巴嗪
- 细胞色素氧化酶P450 3A4基因联合环磷酰胺的体外抗肿瘤效应被引量：1
- 2009年
- 目的克隆细胞色素氧化酶P4503A4(CYP3A4)基因,构建真核表达质粒并导入K562细胞进行表达,研究CYP3A4联合环磷酰胺(CPA)的体外抗肿瘤效应。方法利用RT-PCR从人肝细胞中克隆CYP3A4基因,构建重组真核表达载体。脂质体法导入K562细胞,RT-PCR和Western blot检测CYP3A4基因在K562细胞中的表达并筛选稳定转染的细胞克隆。MTT法检测CYP3A4联合CPA对肿瘤细胞的抑制作用。结果成功克隆CYP3A4基因并构建了真核表达质粒pcDNA3.1/myc-HisA(+)-CYP3A4。RT-PCR和Western blot分别显示转基因组的CYP3A4 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于转空载体组和对照组。MTT示转基因组IC50值为1.09016mmol/L,明显低于转空载体组和对照组。酶诱导剂和抑制剂分别能够减低和增高转基因组IC50。结论CYP3A4体外具有联合CPA的抗肿瘤作用,这种作用能够被CYP3A4相应的诱导剂和抑制剂增强或减低。
- 张巍王季石杨远方琴
- 关键词：环磷酰胺肿瘤治疗基因转染
- 间充质干细胞介导“酶-前药基因”CYP1A2靶向抗肿瘤效应研究
- ＜正＞目的:传统的放疗、化疗存在抗肿瘤能力低、杀伤指数过小、不良反应多且较严重等不足,因此肿瘤靶向治疗成为今后肿瘤治疗的发展方向。基因介导的酶前药治疗（Gene Directed Enzyme Prodrug Thera...
- 杨远王季石张巍袁军杨明方琴
- 文献传递
- 间充质干细胞介导“酶一前药基因”CYPIA2靶向抗肿瘤效应研究被引量：1
- 2009年
- 目的将人细胞色素P4501A2（CYP1A2）基因转染骨髓间充质干细胞（BMSC），检测转基因BMSC协同化疗前药达卡巴嗪（DTIC）对人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞的靶向促凋亡作用，为以间充质干细胞为载体的“基因介导的酶-前药双靶向抗肿瘤策略”提供体外实验依据。方法从人肝细胞中克隆CYP1A2基因，构建真核表达载体，分离、鉴定并培养BMSC，脂质体法将CYP1A2基因导入BMSC和Raji细胞中，RT—PCR和Western blot法检测CYP1A2基因的表达，Trans well法检测BMSC的肿瘤靶向性，MTF法检测转基因Raji细胞对DTIC敏感性的改变，Annexin V／PI染色标记法检测转基因BMSC联合DTIC诱导Raji细胞凋亡的作用。结果成功克隆CYP1A2基因并将构建的真核表达载体转染BMSC和Raji细胞，流式细胞术检测体外诱导分化结果符合BMSC特性，RT-PCR和Westernblot检测到转基因细胞中CYP1A2表达，Transwell迁移实验证实BMSC有肿瘤趋向性，MTT法检测显示DTIC呈剂量依赖性抑制转CYPIA2基因的Raji细胞生长，而转CYP1A2基因的BMSC细胞对DTIC相对耐受（IC50值分别为1．67mmol／L和7．53mmol／L，P〈0．01）。AnnexinV／PI染色法显示CYP1A2能够使细胞在体外代谢DTIC，产生细胞毒效应使肿瘤细胞凋亡，而且具有旁观者效应。结论CYP1A2可使细胞在体外代谢DTIC产生细胞毒效应。以BMSC为载体的CYP1A2-DTIC酶-前药系统可发挥双靶向抗肿瘤作用，在体外诱导人恶性淋巴瘤细胞凋亡。
- 杨远王季石张巍袁军杨明方琴
- 关键词：基因CYP1A2达卡巴嗪
