徐婧雯
- 作品数：23 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省科技厅科研基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗树鼩CD3ε单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的：制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法：以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测,筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株,经过3次亚克隆筛选后,制备小鼠腹水单克隆抗体,并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、Western blot和流式细胞荧光分选技术（fluorescence activated cell sorting,FACS）分析其生物学特性。结果：筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为78I、87I、92D1、75II和35C8,腹水单克隆抗体效价分别为1∶10～6、1∶10～6、1∶10～4、1∶10～6、1∶10～3,亲和力解离常数（Kd）分别为1.8×10^-5、2.9×10^-5、4.9×10^-5、7.3×10^-5、3.6×10^-5。5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位,而92D1和35C8识别另一抗原表位。经Western blot检测,HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应。经FACS检测,PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC。结论：成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体,为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础。
- 徐婧雯张雪梅吴忠香朱文兵蒋曦巩蔚严丽蔚宋杰李慧董少忠
- 关键词：树鼩单克隆抗体
- 狂犬病病毒糖蛋白表达及纯化及其记忆性B细胞结合能力的分析被引量：3
- 2017年
- 表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,纯化蛋白并分析比较其结合功能,荧光标记候选蛋白,结合CD19及CD27的抗体,流式细胞术检测狂犬疫苗免疫后PBMCs中抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞的情况,确认候选蛋白与抗狂犬病毒特异性记忆性B细胞的结合功能。本实验成功构建了3个表达载体pGEX-5X-1-RVG、pET28a-RVG和pET30a-G,优化表达纯化条件成功获得了糖蛋白GST-RVG、His-RVG和His-G。纯化后的GST-RVG、His-RVG和His-G经Western blotting和ELISA鉴定均有抗原特异性;由竞争ELISA法测得3个纯化后糖蛋白与抗狂犬病病毒抗体的亲和力。通过流式细胞术可以检测到狂犬疫苗免疫后阳性志愿者PBMCs中的抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞,从而获得了高亲和力、可用于分选抗原特异性的记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。
- 严丽蔚巩蔚朱文兵张雪梅徐婧雯吴忠香卢孔杰孙明董少忠
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白流式细胞术
- 抗GII.4型诺如病毒衣壳蛋白VP1和病毒样颗粒VLP单克隆抗体的制备方法和应用
- 本发明涉及一种抗GII.4型诺如病毒衣壳蛋白VP1和病毒样颗粒VLP单克隆抗体的制备方法和应用，通过将目的序列插入原核表达载体中构建重组质粒pGEX‑5X‑1‑VP1，利用大肠杆菌表达系统表达并纯化得GII.4型诺如病毒...
- 董少忠李慧宋杰徐婧雯张雪梅吴忠香朱文兵蒋曦李卫宇郑雪麟刘卓航
- 文献传递
- 一组鉴别Delta变异毒株和Omicron变异毒株的引物组和试剂盒
- 本发明提供了一组鉴别Delta变异毒株和Omicron变异毒株的引物组和试剂盒，涉及核酸检测技术领域。本发明所述引物组，利用Delta毒株和Omicron毒株相对于新冠病毒的缺失基因分别设计得到，并将所述引物组和探针组合...
- 刘红旗徐婧雯陈双鲁帅尧丁开云杨云陈泓宇杨程云刘建生
- 树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测被引量：1
- 2016年
- 目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a（＋）-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1（OH）3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度（Geometric Mean Titer,GMT）的比较结果为：弗氏佐剂组（GMT：97 420）＞Al（OH）3佐剂组（GMT：67 202）＞MF59佐剂组（GMT：55 128）;其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组（P＜0.001）;Al（OH）3组显著高于原蛋白组（P＜0.01）;而MF59组显著高于原蛋白组（P＜0.05）.结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.
- 卢孔杰徐婧雯张雪梅吴忠香任芳芳马娜巩蔚严丽蔚朱文兵董少忠
- 关键词：树鼩纯化多克隆抗体
- 病毒基因组耦联报告基因用于筛选适宜丙型肝炎病毒培养的亚细胞克隆株被引量：1
- 2013年
- 目的快捷筛选到适合丙型肝炎病毒（HCV）培养的细胞系。方法将荧光素酶报告基因耦联到JFHlHCV基因组中，检测了多个人肝细胞系对HCV的易感性，进一步利用耦联荧光素酶的HCV复制子模型筛选并经过IFN-Ot处理更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株。结果实验结果显示BEL7402、BEL7404、QSG7701、SMMC7721、QGY7701、QGY7703和HepG等肝细胞均不易感染HCV，仅限于Huh7细胞能被HCV感染。同时实验获得了更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株——Huh7G3。结论在利用IFN-仅处理细胞的过程中，通过检测荧光素酶活性，显示IFN-Ot对HCV亚基因组的复制抑制效果具有剂量依赖效应，研究同时显示：HCV复制子细胞能否抵抗HCV的超感染依赖于细胞内是否存在HCVRNA复制而不是其复制水平的高低。
- 徐婧雯张雪梅王晓辉吴文龙吴忠香张智辉向昊姚宇峰寸鞲董少忠
- 关键词：报告基因
- 肠道病毒71型鼠源性中和单克隆抗体的制备被引量：1
- 2018年
- 目的制备肠道病毒71型(enterovirus A 71,EV71)鼠源性中和单克隆抗体。方法以灭活EV71病毒液为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得抗EV71单克隆抗体;ELISA法检测抗体的特征,获得具有高效结合性的单克隆抗体;SDS-PAGE和Western blot法鉴定Protein A纯化的抗体;通过体外和体内中和试验鉴定抗体的中和特性。结果得到3株针对EV71 VP1的高效结合性单克隆抗体15H7、15G7和6G2,且15H7经中和试验证明具有较强的中和活性。结论成功制备了EV71鼠源性中和单克隆抗体,其在小鼠体内能成功地抑制病毒增殖。
- 朱文兵严丽蔚巩蔚张雪梅吴忠香徐婧雯宋杰董少忠
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体
- 抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用
- 本发明涉及一种抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用，属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株，保藏名称为杂交瘤细胞株TSCD8α‑C16，保藏号为CCTCC NO：C2...
- 董少忠张雪梅吴忠香徐婧雯朱文兵蒋曦宋杰李慧
- 文献传递
- 肠道病毒71型类病毒颗粒在昆虫细胞Sf9中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建含有肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)P1和3CD基因的嵌合型重组杆状病毒质粒,探讨3CD蛋白酶对P1蛋白的切割作用及形成类病毒颗粒(Virus-like particles,VLPs)的可能性。方法将EV71的P1和3CD基因克隆至同一pFastBac Dual质粒上,转化感受态大肠杆菌DH10,构建重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD,转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒,经SDS-PAGE、Western blot及电镜对目的基因表达产物进行分析。结果重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD经PCR鉴定证明构建正确。重组杆状病毒感染的Sf9细胞经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约39 000、32 000和26 000的特异条带,大小与EV71的VP1、VP0、VP3蛋白相符;Western blot分析可见与EV71 VP1蛋白大小相近的特异条带;电镜观察可见EV71类病毒颗粒。结论 EV71的P1和3CD嵌合基因可以通过重组杆状病毒在昆虫细胞中表达,3CD蛋白酶可以切割P1蛋白得到VP1抗原,并能形成类病毒颗粒。
- 徐婧雯李鸿钧谢天宏张光明尹娜孙茂盛
- 关键词：P1基因类病毒病毒粒子
- SARS-CoV-2 S1-NTD蛋白在制备新冠肺炎的检测试剂中的应用
- 本发明属于血清学检测技术领域，具体涉及SARS‑CoV‑2S1‑NTD蛋白在制备新冠肺炎的检测试剂中的应用。本发明以SARS‑CoV‑2S1‑NTD蛋白为包被抗原对新冠肺炎进行检测，其灵敏度和特异性显著高于以SARS‑C...
- 刘红旗徐婧雯鲁帅尧丁开云禹文海陈泓宇杨云刘建生
