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类风湿性关节炎滑膜细胞中DDR2相互作用蛋白的筛选被引量：1: 2015年; 目的筛选盘状结构域受体(discoidin domain receptors 2,DDR2)的相互作用蛋白。方法原代培养类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)。用人DDR2过表达腺病毒(Ad5-DDR2)感染FLSs,上调DDR2的表达。采用Ⅱ型胶原诱导的方法活化FLSs细胞膜上的DDR2;提取细胞总蛋白,通过小鼠来源的DDR2抗体免疫沉淀FLSs中的DDR2蛋白复合物;双向电泳分离抗原抗体复合物,质谱分析确认DDR2活化前后的差异蛋白。结果 Ad5-DDR2感染RA FLSs后,Westernblot结果显示细胞中DDR2表达水平显著上调。双向电泳分离DDR2免疫沉淀复合物,考马斯亮蓝染色显示胶原刺激前后,DDR2免疫复合物存在7个差异蛋白点。质谱分析及生物信息学分析显示,DDR2相互作用蛋白主要包括波形蛋白(vimentin)、膜脂联蛋白A2(Annexin A2)、免疫球蛋白和肌动蛋白等。结论筛选获得了两个可能与RA病程相关的DDR2相互作用蛋白——波形蛋白和膜脂联蛋白2,为DDR2-MMPs通路作用机制的阐明奠定了基础。; 赵薇董晓薇舒震徐玉金张伟; 关键词：滑膜成纤维细胞盘状结构域受体2 相互作用蛋白

应用酵母双杂交系统筛选Foxp3△2相互作用蛋白被引量：1: 2010年; 目的：应用酵母双杂交系统从人外周血白细胞cDNA文库中筛选与转录因子Foxp3相互作用的蛋白，为进一步研究Foxp3的转录调控机制奠定基础。方法：首先构建pG—BKT7／-Foxp3△2酵母双杂交诱饵载体，转化AH109酵母细胞，检测其毒性及自激活作用；然后将诱饵质粒与人外周血白细胞eDNA文库共转AH109酵母细胞，筛选了与Foxp3△2存在相互作用的蛋白。结果：成功构建了pGBKT7-Foxp3△2酵母表达载体，经转染AHl09酵母细胞，无有毒性，无自激活作用。获得了40个阳性克隆，经生物信息学分析，其中9个具有开放读框。结论：应用酵母双杂交技术筛选出一组可与Foxp3△2相互作用的候选蛋白，为进一步研究Foxp3△2功能奠定了基础。; 徐玉金姜昌丽张存秦鑫李萌郝强李维娜张伟张英起; 关键词：酵母双杂交相互作用蛋白

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1: 2010年; 目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。; 舒震侯登勇李晶侯健伟徐玉金陈琳张伟张英起; 关键词：杂交瘤细胞单克隆抗体

重组人胸腺素β4二串体蛋白的原核表达、纯化及生物活性被引量：1: 2012年; 目的:获得具有生物学活性的重组人胸腺素β4二串体蛋白(Tβ4②)。方法:人工合成人Tβ4全长基因,构建Tβ4②基因,并将该基因克隆入载体pET-22b(+)中,转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经疏水作用层析纯化重组Tβ4②蛋白,采用Western印迹鉴定表达产物,并对其进行生物活性检测。结果:表达和纯化了Tβ4②蛋白,重组人Tβ4②在体外可促进人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移。结论:重组人Tβ4②具有与化学合成Tβ4相同的功能,并有更高的生物学活性。; 徐天娇张昭舒震徐玉金赵薇李萌张伟张伟; 关键词：胸腺素Β4 纯化活性检测

PD-1核心启动子的获得及活性鉴定: 2010年; 目的:构建PD-1(programmed death receptor 1)全长启动子及不同截短体的报告基因,并对其转录活性进行检测。方法:通过PCR及双酶切方法,从人全血基因组DNA中获得PD-1基因编码序列,包含不同长度碱基的PD-1启动子序列,分别克隆到报告基因pGL3-Basic载体上,构建8个不同长度PD-1启动子的报告基因;用脂质体转染法将8个报告基因分别转染至Jurkat细胞系;采用双萤光素酶报告基因系统评估PD-1启动子的活性。结果:经PCR方法扩增出大小分别为1650、1450、1250、1128、874、674、474和274 bp的不同长度的PD-1启动子序列,测序正确(与GenBank报道一致),酶切鉴定正确;瞬时转染Jurkat细胞系后经报告基因检测,8个启动子均具有转录活性。结论:构建了PD-1启动子的报告基因,并证实均有转录活性,且以pGL3-1128活性最高,为PD-1的核心启动子,为进一步研究PD-1的转录调控奠定了实验基础。; 侯建伟秦鑫李晶舒震陈霖徐玉金赵薇张伟张英起; 关键词：PD-1 核心启动子转录调控

重组人半乳凝集素-1的原核表达、纯化及生物活性检测: 2010年; 目的:在大肠杆菌中表达半乳凝集素-1(galectin-1),并进行纯化及生物活性检测。方法:将人半乳凝集素-1基因克隆至带有His融合标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western印迹鉴定,并用红细胞凝集试验检测其生物学活性。结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定表明重组表达质粒pQE-30-Galectin-1构建正确;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的50%,主要以可溶形式表达,纯化后蛋白纯度达95%以上,且具有良好的红细胞凝集活性。结论:在大肠杆菌中表达了重组人半乳凝集素-1,且具有良好的生物活性。; 李晶贺丽清舒震侯建伟陈霖徐玉金张伟张英起; 关键词：原核表达纯化

十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞功能的影响被引量：2: 2012年; 目的:观察十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞株HUVEC增殖、周期、迁移及小管形成的影响。方法:用不同浓度(0、1、5、10、50、100μg/mL)的BPC-157作用于HUVEC细胞株,采用MTT法检测药物对内皮细胞增殖的影响,通过流式细胞仪观察细胞周期的变化,经细胞划痕和Transwell实验检测药物对内皮细胞迁移的影响,并且通过小管形成实验观察BPC-157对内皮细胞小管形成能力的影响。结果:HUVEC细胞株经BPC-157刺激48 h后,细胞增殖率和各时期细胞比例没有明显变化;而在刺激12 h时,BPC-157显著性促进细胞伤口愈合及穿膜细胞数的增加(P<0.01);刺激8 h时,给药组细胞开始聚合,形成复杂的管状网络结构,特别是5μg/mL剂量组。结论:十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞株HUVEC增殖及细胞周期的改变基本没有影响,但对内皮细胞的迁移及小管形成能力具有明显的促进作用。; 黄同列张昭舒震徐玉金赵薇张存张伟张伟; 关键词：人脐静脉内皮细胞增殖细胞周期迁移小管形成

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徐玉金