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大肠杆菌cysE和cysM基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备: 山羊绒的主要组成成分是角蛋白,角蛋白同时又是多种氨基酸的组合体,其中含量最高的是谷氨酸和胱氨酸,胱氨酸是含硫氨基酸。羊等哺乳动物自身不能直接合成半胱氨酸,只能依靠反式硫化蛋氨酸间接的合成半胱氨酸。利用转基因技术,将半胱氨...; 方堃; 关键词：原核表达; 文献传递

生产转基因山羊的piggyBac转座子载体构建方法及其应用: 本发明公开了一种能用于生产转基因山羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆...; 陈玉林白丁平方堃杨明明何晓琳; 文献传递

piggyBac转座子在绒山羊基因组中的整合位点及其特征分析被引量：4: 2012年; 【目的】构建piggyBac(PB)转座子表达载体系统,研究PB转座子在绒山羊基因组中的整合位点。【方法】构建pB-CMV-EGFP-Neo转座载体和pcDNA-Trans辅助载体,利用lipofectamine 2000介导共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得稳定转染的转基因细胞系。提取转基因细胞基因组DNA,利用反向PCR检测piggyBac转座子整合位点。【结果】构建了转座系统并成功介导外源基因在绒山羊成纤维细胞染色体中整合,获得了转基因细胞系;反向PCR检测显示在绒山羊基因组中有21个PB转座子整合位点;整合位点TTAA毗邻一侧的5个碱基组成中,PB转座子3′倾向于插入到富含AT(58.35%)碱基的区域,PB转座子5′倾向于插入到富含GC(57.8%)。【结论】PB转座子可在绒山羊基因组中发生高效转座,获得的整合位点信息可为利用PB转座子开展绒山羊研究提供理论参考。; 白丁平方堃杨明明屈雷陈玉林; 关键词：PIGGYBAC 绒山羊基因组整合位点

陕北白绒山羊Lhx2基因cDNA序列的克隆与原核表达被引量：1: 2012年; 根据GenBank中已发表的Lhx2基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织克隆Lhx2基因编码区cDNA,对其进行生物信息学分析,并构建原核表达载体pET-Lhx2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。最终获得陕北白绒山羊Lhx2基因,长1 221bp;酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-Lhx2构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。; 刘敏白丁平耿荣庆方堃陈玉林; 关键词：陕北白绒山羊克隆原核表达

piggyBac转座子介导生产体内合成半胱氨酸转基因山羊的载体构建方法及其应用: 本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆位...; 陈玉林白丁平方堃杨明明何晓琳

生产转基因山羊的piggyBac转座子载体构建方法及其应用: 本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5’端和PB3’端碱基序列，合成时在PB5’端和PB3’端中间预留出多克隆位点...; 陈玉林白丁平方堃杨明明何晓琳; 文献传递

大肠杆菌cysE和cysM基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2: 2011年; 【目的】克隆大肠杆菌半胱氨酸合成酶(包括丝氨酸乙酰转移酶(cysE)和O-乙酰丝氨酸硫化氢解酶(cysM))的基因,对其进行原核表达,并制备相应蛋白的抗体。【方法】用PCR方法从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增cysE和cysM基因,构建其原核表达载体pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM,对其进行BamHⅠ和SacⅠ双酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot(以His抗体作为一抗)检测。用纯化的cysE和cysM蛋白作为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价。【结果】PCR获得了822bp的cysE基因和912bp的cysM基因。原核表达质粒pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM构建成功,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的cysE和cysM重组蛋白分子质量分别为56和58ku。制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度均达到1∶102 400。【结论】成功克隆了大肠杆菌cysE和cysM基因,并实现了原核表达,同时制备出了相应的多克隆抗体。; 方堃白丁平陈玉林; 关键词：大肠杆菌

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方堃