何晓琳
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 陕北白绒山羊FGF5基因及其转基因羊的研究
- 陕北白绒山羊的毛被属于异质毛被,其皮肤中含有两种毛囊类型,分别为初级毛囊和次级毛囊。初级毛囊生成的毛纤维称为粗毛(含髓质层),次级毛囊生成的毛纤维为无髓毛,称为绒毛。山羊绒属于一种高档精纺材料,有着“软黄金”的美誉,其细...
- 何晓琳
- 关键词：FGF5陕北白绒山羊毛乳头细胞PIGGYBAC转座子转基因
- 文献传递
- 生产转基因山羊的piggyBac转座子载体构建方法及其应用
- 本发明公开了一种能用于生产转基因山羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆...
- 陈玉林白丁平方堃杨明明何晓琳
- 文献传递
- 利用荧光定量PCR法检测转基因绒山羊外源基因整合拷贝数
- 2017年
- 外源基因拷贝数是转基因动物检测中的重要内容。本实验室使用PiggyBac(PB)转座子系统获得Tβ4-GFP、FGF5s-GFP、VEGF164-GFP 3种转基因类型陕北白绒山羊,为研究其外源基因整合情况,利用荧光定量PCR方法对其外源基因copGFP的整合拷贝数进行检测。以Gluc为内参基因,建立外源基因和内参基因的标准曲线方程,对转基因陕北白绒山羊DNA进行荧光定量PCR,将copGFP/Gluc的比率作为外源基因的拷贝数。同时,选取Tβ4-GFP转基因绒山羊对其整合位点进行检测,以验证拷贝数结果。结果显示:copGFP与Gluc的标准曲线方程分别为,y=-3.230 6x+39.216(R^2=0.998 8)、y=-3.564 8x+38.440(R^2=0.996 0);成功得到9只转基因绒山羊的整合拷贝数;Tβ4-GFP转基因绒山羊整合位点数目和拷贝数检测结果一致。结果表明,利用荧光定量PCR检测转基因绒山羊外源基因整合拷贝数,操作简单、灵敏方便,是一种切实可行的检测方法。
- 师丙波黄玉何晓琳朱海鲸于鸿浩金妙函屈雷陈玉林
- 关键词：拷贝数
- PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备被引量：2
- 2013年
- 本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选。并利用PCR和RT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况。结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT-PCR结果表明,该基因在转录水平上表达。另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座。本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础。
- 何晓琳袁超屈雷陈玉林
- 关键词：陕北白绒山羊PIGGYBAC转座子稳定转染
- 基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体及其应用
- 本发明公开了一种基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体及其应用，所述表达载体通过将保存的PB-CMV-FGF5s-EGFP载体中的CMV启动子更换为毛囊特异启动KAP6.1构建所得。
- 陈玉林何晓琳王小龙杨雨鑫
- 文献传递
- piggyBac转座子介导生产体内合成半胱氨酸转基因山羊的载体构建方法及其应用
- 本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆位...
- 陈玉林白丁平方堃杨明明何晓琳
- VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响被引量：7
- 2018年
- 本研究旨在探讨陕北白绒山羊毛囊外根鞘细胞的培养和VEGF对次级毛囊外根鞘细胞增殖、分化及细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、角蛋白10(K10)和成纤维细胞生长因子5(FGF5)mRNA表达量的影响。采集绒山羊体侧部皮肤,并利用消化等方法分离次级毛囊外根鞘细胞,置于37℃、5%CO_2、饱和湿度条件下培养;选用第5代次级毛囊外根鞘细胞,添加不同质量浓度血管内皮生长因子(VEGF),分别处理24、48h,噻唑兰比色法(MTT)检测细胞活力,EdU核酸标记技术检测细胞增殖;实时荧光定量PCR技术检测PCNA、K 10、FGF5mRNA的表达情况。结果显示:1)成功培养出次级毛囊外根鞘细胞,CK17和CK15细胞免疫组化呈阳性。2)VEGF可以促进绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖。相同浓度VEGF处理48h组的细胞活力极显著高于处理24h组(P<0.01);在48h处理组中,100ng·mL^(-1)组的细胞活力极显著高于对照组、1ng·mL^(-1)组、10ng·mL^(-1)组(P<0.01),并显著高于50ng·mL^(-1)组(P<0.05),50ng·mL^(-1)组的细胞活力显著高于对照组(P<0.05);100ng·mL^(-1)组和50ng·mL^(-1)组增殖细胞比例均极显著高于对照组、1ng·mL^(-1)组、10ng·mL^(-1)组(P<0.01),100ng·mL^(-1)组显著高于50ng·mL^(-1)组(P<0.05)。3)PCNA、K10、FGF5mRNA在次级毛囊外根鞘细胞中均有表达。在VEGF处理48h时,PCNA mRNA的表达量100ng·mL^(-1)组最高,极显著高于对照组(P<0.01),显著高于10ng·mL^(-1)组(P<0.05);K10mRNA的表达量对照组最高,极显著高于10ng·mL^(-1)组与100ng·mL^(-1)组(P<0.01);FGF5mRNA的表达量对照组最高,极显著高于100ng·mL^(-1)组(P<0.01)。综上表明,本研究成功分离培养了陕北白绒山羊次级毛囊外根鞘细胞;VEGF能够促进次级毛囊外根鞘细胞的增殖,抑制细胞的分化;VEGF可能通过抑制次级毛囊外根鞘细胞中FGF5基因的表达而促进毛囊生长。
- 张婧婧王德光周小兵高晔何晓琳陈玉林张恩平
- 关键词：绒山羊MRNA表达
- 生产转基因山羊的piggyBac转座子载体构建方法及其应用
- 本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5’端和PB3’端碱基序列，合成时在PB5’端和PB3’端中间预留出多克隆位点...
- 陈玉林白丁平方堃杨明明何晓琳
- 文献传递
