李明华
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- Na^+/Ca^(2+)交换体α-2(807-844)抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na^+/Ca^(2+)交换电流的抑制作用
- 2012年
- 目的在制备和纯化抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流及L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。方法利用人工合成的α-2(807-844)多肽免疫兔制备抗α-2(807-844)抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)、L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。结果经主动免疫,抗Na+/Ca2+交换体α-2(840-877)抗血清效价达1∶243 000,纯化后抗α-2(840-877)抗体浓度为7.21mg/mL。纯化后的抗体在SDS-PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25kD和50kD左右。在1nmol/L～104nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+交换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用;对Ito和Ik1则均未见明显影响。此外,104nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用。通过氨基酸序列比对发现,α-2(807-844)肽段与L型钙通道第2结构域孔环(697～730位氨基酸)序列相似度为23.7%,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因。结论在1nmol/L～103nmol/L浓度范围内,抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)抗体可特异性抑制大鼠心肌Na+/Ca2+交换活动;对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响。
- 赵雷李明华杨啸燕高亚男封启龙吴博威
- 关键词：心肌抗体膜片钳技术离子通道
- 抗心肌Na+/Ca2+交换体α-1(138-177)和α-2(840-877)多克隆抗体的制备及其功能研究
- 目的：在制备抗心肌Na/Ca交换体α-1（138-177）和α-2（840-877）两种多克隆抗体的基础上，分别观察它们对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换体、L型钙通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流的影响。
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- 李明华
- 关键词：多克隆抗体膜片钳技术离子通道
- 抗心肌Na^+/Ca^(2+)交换体α-1_(138-177)抗体对心力衰竭大鼠心肌Na^+/Ca^(2+)交换电流的抑制作用
- 2011年
- 目的观察抗心肌Na+/Ca2+交换体α-1(138-177)抗体对心力衰竭大鼠心肌Na+/Ca2+交换电流的影响。方法通过腹主动脉结扎建立心力衰竭模型,利用人工合成的多肽免疫兔制备抗α-1抗体,应用酶解法分离心肌细胞,利用全细胞膜片钳技术观察抗α-1抗体对心力衰竭大鼠心肌Na+/Ca2+交换电流的作用。结果 10μmol/L的抗α-1抗体使内向和外向的Na+/Ca2+交换电流分别从给药前的(9.0±2.7)、(13.7±3.6)pA/pF降至(4.5±1.7)、(6.5±2.3)pA/pF(P<0.05)。结论抗α-1(138-177)抗体对心力衰竭大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流具有抑制效应。
- 李明华李昱封启龙吴博威
- 关键词：抗体
- 抗钠-钙交换体α-1(106-145)抗体对大鼠离体心功能的影响及其机制被引量：2
- 2012年
- 目的观察1～103nmol·L-1抗钠-钙交换体(NCX)α-1(106-145)肽段抗体对离体大鼠心功能的影响并分析其作用机制。方法用化学合成的NCXα-1(106-145)肽段主动免疫新西兰大耳白兔制备并纯化抗体,利用Langendorff离体灌流系统观察其对大鼠离体心功能的影响;利用全细胞膜片钳技术观察其对心肌细胞钠-钙交换电流、L-型钙电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响。结果经主动免疫后兔体内抗α-1(106-145)抗血清滴度明显升高,Protein A纯化后抗体浓度为13.1 g.L-1。与对照组相比,1～10 nmol·L-1α-1抗体可使大鼠离体心脏左室发展压(LVDP)和左室压最大上升速率(+dp/dtmax)明显增加(P<0.01),并使左室压最大下降速率(-dp/dtmax)减小(P<0.01),且KB-R7943(2μmol·L-1)可使α-1抗体(1 nmol·L-1)的上述效应进一步增强。然而,102～103nmol·L-1α-1抗体则可使大鼠离体心脏LVDP、±dp/dtmax呈不同程度地下降(P<0.01)。全细胞膜片钳实验结果表明,在1～103nmol·L-1浓度范围内,抗α-1抗体对大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+交换电流均表现出剂量依赖性的抑制效应,对瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无明显影响。此外,102～103nmol·L-1α-1抗体对L-型钙电流也具有抑制作用。结论低浓度α-1抗体(1～10 nmol·L-1)可明显增强心肌收缩,这一效应与其在低浓度时专一性抑制Na+/Ca2+交换电流有关;高浓度α-1抗体(102～103nmol·L-1)则可同时抑制心肌收缩和舒张,该作用与其同时抑制Na+/Ca2+交换电流和L-型钙电流有关。
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- 关键词：抗体心功能全细胞膜片钳L型钙电流离体心脏
