李晓玲
- 作品数：16 被引量：24H指数：3
- 供职机构：临沂市人民医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金临沂市科技发展计划项目更多>>
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- 慢病毒载体介导的siRNA抑制Jiyoye细胞c-myc基因表达的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨RNAi技术经慢病毒载体介导的siRNA对Jiyoye细胞c-myc基因表达的抑制作用。方法设计并合成RNA干扰序列,退火后连接到pLVX干扰载体上,构建PLVX-c-myc表达载体,经慢病毒介导转染人Jiyoye细胞株培养72 h。实验分为空白对照(未转染)、c-myc-neg、c-myc-1、c-myc-2、c-myc-3组。采用流式细胞术检测各组细胞转染率,采用real-time PCR和Western blot法检测各组细胞c-myc mRNA及蛋白表达水平的变化。结果构建pLVX-c-myc-neg、pLVX-c-myc-1、pLVX-c-myc-2、pLVX-c-myc-3重组表达载体。与c-myc-neg组相比,c-myc-1、c-myc-2和c-myc-3组c-myc mRNA及蛋白表达水平均明显下调(P<0.05),以c-myc-3组下降最显著(P<0.05)。结论成功构建c-myc shRNA表达载体,利用慢病毒介导转染Jiyoye细胞的c-myc基因表达下调,为进一步探讨沉默c-myc基因在白血病和淋巴瘤靶向治疗中的作用奠定了实验基础。
- 宋爱琴鞠秀丽孙立荣王玲珍李晓玲于洪升
- 关键词：基因MYCSIRNASHRNA
- 卡介苗HSP70基因转染新鲜白血病细胞瘤苗制备及抗瘤机制的研究
- 目的体外培养白血病细胞,并制备膜表面表达卡介苗热休克蛋白70(BCG HSP70)的瘤苗,以进一步研究其抗瘤作用和机制。方法(1)体外分离培养15例急性髓系白血病(AML)细胞,和15例B系急性淋巴细胞白血病(ALL)细...
- 孙立荣李晓玲赵艳霞李学荣
- 血清神经元特异性烯醇化酶对神经母细胞瘤的诊治价值
- ＜正＞目的探讨血清神经元特异性烯醇化酶（neurone specific enolase,NSE）在神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）患儿的诊断、分期及疗效评价中的作用。方法分析30例NB患儿、20例肾母细...
- 李晓玲孙立荣
- 文献传递
- 卡介苗HSP70基因转染HL-60细胞瘤苗制备及抗瘤机制的研究被引量：1
- 2014年
- 目的构建卡介苗(BCG)热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,通过基因转染表达HL-60细胞表面,研究其抗瘤作用和机制。方法利用多聚酶链反应(PCR)方法扩增HSP70基因,与真核表达载体pDisplay连接,构建重组载体pDisplay-HSP70,并利用脂质体2000将其转染HL-60细胞。HL-60细胞分为未转染的HL60-wt组、转染空载体pDisplay的HL60-pDisplay组、转染重组载体pDisplay-HSP70的HL60-HSP70组,分别与外周血T淋巴细胞培养72 h,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记和流式细胞术测定淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测IFN-γ水平;各组HL-60细胞与T淋巴细胞混合培养6 d后获细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应细胞,加入HL-60靶细胞以不同效靶比共培育12 h,LDH释放改良法检测CTL细胞杀伤活性。结果扩增获得的HSP70基因大小与理论值一致,重组载体pDisplay-HSP70构建正确。HSP70表达在转染后的HL-60细胞表面。转染后的HL-60细胞,即HL60-HSP70组能明显促进异体T细胞扩增,该组CFSE阳性率、IFN-γ含量、CTL杀伤率均高于HL60-wt和HL60-pDisplay组,差异均有统计学意义(P<0.05);后两组间差异则无统计学意义(P>0.05);随效靶比增大,HL60-HSP70组CTL细胞杀伤活性逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建真核表达载体pDisplay-HSP70,并制备膜表面表达BCG HSP70的HL-60细胞瘤苗,HSP70基因转染后能明显增强HL-60细胞的免疫原性。
- 李晓玲刘春雷孙立荣
- 关键词：卡介苗基因转染HL-60肿瘤疫苗
- 胞壁酰二肽对儿童急性白血病骨髓树突状细胞功能的影响
- 2018年
- 目的:探讨胞壁酰二肽(MDP)对儿童急性白血病骨髓树突状细胞(DC)功能的影响。方法:应用Ficoll-Hypaque法分离急性白血病患儿骨髓单个核细胞,对照组:用细胞因子诱导培养DC;实验组实验组分为5个亚组,1组:与对照组等量的MNC+ MDP (10 ug/l),2~5组分别对应为:与对照组等量的MNC + 与对照组等量的细胞因子 + 不同浓度的MDP (102 ug/l,102 ug/l,103 ug/l,104 ug/l);分别诱导培养DC,第9天收获各组DC,与同种异体外周血T淋巴细胞混合反应96 h,观察淋巴细胞的增殖情况,ELISA方法检测上清液中IL-12、IFN-γ的含量;经HL-60抗原致敏后的DC与T淋巴细胞混合培养6 d后,加入HL-60细胞共同孵育12 h,LDH释放改良法检测各组细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性。结果:1) 混合淋巴细胞反应显示:① T细胞扩增指数:固定刺激细胞数,不同组比较,对照组与1组、2组比较均无显著性差异(p均 > 0.05);3组、4组、5组T细胞扩增指数明显高于对照组,亦明显高于1组(p均 < 0.01)。当刺激细胞数量为1 × 103至1 × 104,同组间T细胞扩增指数逐渐增加(p均 < 0.01),1 × 104与5 × 104之间T细胞扩增指数的增加无统计学意义(p > 0.05)。② T细胞分泌细胞因子:当刺激细胞数为5 × 104时,对照组与1组、2组IL-12含量的比较均无显著性差异(p > 0.05);3组、4组、5组明显高于对照组,亦明显高于1组(p均 < 0.01)。对照组与1组、2组IFN-γ含量的比较均无显著性差异(p > 0.05);3组、4组、5组明显高于对照组,亦明显高于1组(p均 < 0.01)。2) 杀瘤活性结果显示:实验各组杀伤HL-60细胞活性均较对照组显著增强(p均 < 0.01);当MDP浓度由102 ug/l递增至104 ug/l,2组、3组、4组、5组组间比较,杀伤活性逐渐增加(p均 < 0.01),以5组杀伤HL-60细胞活性最强。结论:① 当MDP诱导后的DC数量 ≥ 1 × 103时,即能促进T细胞的增殖,且有MDP浓度依赖性。② 经MDP诱导后的DC具有促进T细胞分泌的作用,与细胞因子
- 李晓玲朱政孙立荣
- 关键词：胞壁酰二肽树突状细胞白血病免疫功能
- 一个遗传性癫痫伴热性惊厥附加症家系的临床表型及SCN1A基因变异分析被引量：3
- 2021年
- 目的分析1个遗传性癫痫伴热性惊厥附加症(genetic epilepsy with febrile seizures plus,GEFS+)家系的临床表型及遗传特征进行分析。方法收集先证者及其家系成员的临床资料并提取外周血DNA,对先证者采用高通量测序以确定潜在的变异位点,对其家系成员采用Sanger测序进行验证。结果该家系为典型的GEFS+家系,3代共6人发病,其中2例为热性惊厥,1例为热性惊厥附加症,3例为热性惊厥伴局灶性发作。基因测序显示先证者携带SCN1A基因c.4522T>A(p.Tyr1508Asn)杂合错义变异,Sanger测序证实该家系其余5例发病成员和1例正常成员均携带该变异,外显率约为85.7%。结论SCN1A基因c.4522T>A(p.Tyr1508Asn)变异很可能是该家系的发病原因,其遗传方式符合常染色体显性遗传伴不完全外显。新变异的检出丰富了SCN1A基因的变异谱。
- 孙绍霞李晓玲宋纪国李玉芬徐丽云夏冰华英朱丽萍王均林
- 关键词：基因变异
- 卡介苗HSP70基因转染对小鼠淋巴细胞白血病细胞免疫原性的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨卡介苗热休克蛋白70(BCG HSP70)基因转染对小鼠淋巴细胞白血病细胞(L1210)致瘤性及免疫原性的影响。方法利用脂质体2000将BCG HSP70基因转入小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210表面,获得高表达HSP70分子的L1210-HSP70细胞,作为肿瘤疫苗分别对裸鼠及同系小鼠致瘤性、瘤苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用以及瘤苗对L1210细胞攻击的免疫保护作用进行研究。结果 BCG HSP70成功表达在转染后的L1210细胞表面,并具有与野生型细胞同样的致瘤性。同系小鼠DBA/2皮下接种L1210-HSP70细胞后肿瘤生长缓慢或不成瘤;相对于L1210组和L1210-neo组,生存期明显延长,小鼠脾淋巴细胞中针对L1210细胞的特异性T细胞数量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);瘤体病理切片示彻底凝固性坏死,周边可见淋巴样细胞,免疫组化检测示大量CD8+T淋巴细胞浸润。L1210-HSP70细胞瘤苗具有对荷瘤小鼠的免疫治疗作用,以及抗肿瘤攻击的免疫保护作用,均表现为肿瘤出瘤时间明显延长,生长受到显著抑制,瘤体平均直径明显减小;荷瘤小鼠生存时间明显长于L1210组、L1210-neo组和PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BCG HSP70基因转染能有效增强肿瘤细胞的免疫原性,激活特异性T细胞,降低肿瘤细胞的致瘤性;并具有提高宿主抗瘤免疫作用。
- 李晓玲孙立荣
- 关键词：卡介苗热休克蛋白70肿瘤疫苗肿瘤免疫小鼠
- 卡介苗HSP70基因转染HL-60细胞瘤苗制备及抗瘤机制的研究
- 目的构建卡介苗热休克蛋白70(BCG HSP70)的真核表达载体,通过基因转染表达于急性早幼粒白血病细胞标准细胞株(HL-60)细胞表面,制备细胞膜表面修饰的瘤苗并研究其抗瘤作用和机制。方法利用脂质体2000将重组载体p...
- 孙立荣李晓玲孙妍
- 血清神经元特异性烯醇化酶对神经母细胞瘤的诊治价值被引量：7
- 2011年
- 目的探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)在神经母细胞瘤(NB)患儿的诊断、分期及疗效评价中的作用。方法分析30例NB患儿、20例肾母细胞瘤(WT)及横纹肌肉瘤(RB)患儿,以及20例正常儿童的临床资料,检测血清NSE水平,分析其与疾病的关系。结果 30例初诊NB患儿的血清NSE水平升高,为(87.5±69.5)ng/ml,30例初诊WT及RB患儿血清NSE水平处于正常范围,为(6.30±3.30)ng/ml,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ期NB患儿血清NSE较Ⅰ、Ⅱ期增高;经2个疗程强化疗后,NB患儿血清NSE水平[(12.8±4.20)ng/ml]较治疗前明显下降(P<0.05);复发的7例血清NSE水平均升高,为(54.9±34.8)ng/ml,无复发的23例患儿血清NSE为(12.0±4.0)ng/ml,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NSE测定对神经母细胞瘤的早期诊断、分期及治疗过程中动态监测疗效评价具有较高的临床应用价值。
- 李晓玲孙立荣
- 关键词：神经特异性烯醇化酶神经母细胞瘤儿童
- ACTG1基因变异致Baraitser-Winter综合征1例患儿的临床及遗传学分析
- 2024年
- 目的探讨1例Baraitser-Winter综合征(BWS)患儿的临床特征及遗传学病因。方法选取2022年4月8日就诊于临沂市人民医院儿科的1例BWS患儿作为研究对象。收集患儿的临床资料,采集患儿及其父母的外周血样,对患儿进行全外显子组测序(WES),用Sanger测序对候选变异进行家系验证,并对其进行生物信息学分析。结果患儿为5岁6个月男性,具有BWS的典型临床特征,包括先天性非肌源性睑下垂、拱形眉、宽人中、尖下巴,神经系统症状、小头畸形、发育落后、癫痫、耳聋,头颅MRI示额顶叶脑回粗大、脑白质减少、脑积水。WES显示患儿携带ACTG1基因c.430G>A(p.Asn144Tyr)杂合错义变异,Sanger测序显示其父母未携带相同的变异,提示为新发变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南,该变异被评级为可能致病性(PS2+PM2_Supporting+PP3_Moderate+PP4)。结论ACTG1基因c.430G>A(p.Asn144Tyr)杂合错义变异可能是上述患儿的遗传学病因。新变异的检出丰富了BWS的基因变异谱,为该病的临床诊断与遗传咨询提供了依据。
- 邱世彦李晓玲华英孙绍霞
