李莉
- 作品数：16 被引量：55H指数：5
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- NANOG基因表达下调对急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的探讨NANOG基因在人急性T淋巴细胞白血病（WALL）细胞株中的表达及下调该基因表达对细胞凋亡的影响及可能机制。方法利用RT-PCR及Westernblot方法检测T-ALL细胞系MOLT-4、CCRF—HSB2、Jurkat细胞NANOG基因表达情况。通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒，感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株，并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率。用流式细胞术检测各组细胞早期凋亡（Annexin VV7-AAD-）及晚期凋亡（Annexin V＋/7-AAD＋）率，并利用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因的表达情况。结果MOLT-4和CCRF—HSB2细胞NANOGmRNA及蛋白表达阳性。构建慢病毒干扰质粒pLB．shNANOG-1、pLB—shNANOG-2及pLB．shRNA对照，包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达（1．83～3．12）×10^8IU／ml。病毒感染MOLT-4细胞后经实时定量PCR及Wesmmblot方法证实两种shRNA可有效下调NANOGmRNA及蛋白的表达。流式细胞术检测显示shNANOG．1及shNANOG。2组细胞早期凋亡率分别为（8．06±1．61）％及（5．67±1．59）％，较MOLT-4组[（1．13±0．40）％]及对照shRNA组[（1．15±0．49）％]明显升高（P〈0．05）。而各组细胞晚期凋亡率无明显变化（P〉0．05）。实时定量PCR法证实shNANOG-1及shNANOG．2转染的细胞中TP53、PMAIPl、CASP9等基因表达较未转染组及转染非特异shRNA组显著升高（P〈0．05），而Bcl-2基因表达则明显下降（P〈0．05）。结论NANOG在多种人T-ALL细胞系中表达，下调NANOG的表达可引发T_ALL细胞凋亡。
- 曹江李莉吕超孟凡静周俊陈翀曾令宇李振宇徐开林
- 关键词：基因NANOG白血病淋巴样细胞凋亡
- 调节性T细胞与辅助性T细胞比例失衡在溃疡性结肠炎发病机制中的作用
- 2011年
- 溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis，UC）是反复发作的以腹痛、腹泻、黏液脓血便为主要表现的炎症性肠病。目前普遍认为UC的发病机制与多种因素有关，其中免疫调节异常是UC研究最活跃的领域。既往研究认为辅助性T细胞1（Thelper，Th1）和Th2细胞亚群失平衡在UC的发病机制中起重要作用，但随着研究的深入，UC在某些状况下并不能用单一的Th1／Th2细胞的模式解释。
- 吴克俭费素娟李莉庞训雷刘玲
- 关键词：溃疡性结肠炎辅助性T细胞发病机制调节性T细胞TH2细胞亚群
- 基因工程Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨输注慢病毒载体介导的小鼠基因工程调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）及移植物抗白血病（GVL）效应的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将小鼠叉状头螺旋转录因子（Foxp3）基因转导入Balb/c小鼠的CD4＋CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者.C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,移植当天受者接受X线直线加速器全身照射.用随机数字表法将受者分为5组,每组10只.（1）单纯照射组：经受者尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 ml;（2）白血病对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋C57BL/6小鼠T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞株（EL4细胞）500个;（3）移植对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个;（4）工程Treg组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋基因工程Treg细胞5×106个;（5）空载体对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋空载体转导的CD4＋CD25-T淋巴细胞5×106个.每天观察受者存活情况;记录GVHD及白血病的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤、脾脏等组织,进行病理学观察;取长期存活（超过60 d）受者的骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、白血病对照组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为（10.3±1.5）d、（20.7±1.9）d、（26.0±4.3）d、（49.0±17.7）d和（24.4±4.1）d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）.白血病对照组小鼠肝、脾组织病理切片均存在白血病细胞浸润表现,移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片存在GVHD病理改变,而工程Treg组长期存活小鼠各组织病理切片结构基本正常,
- 曹江李莉陈翀曾令宇李振宇程海徐开林
- 关键词：移植物抗宿主病移植物抗白血病
- NANOG基因在急性淋巴细胞白血病细胞的表达及其慢病毒干扰载体的构建被引量：1
- 2014年
- 本研究探讨NANOG基因在人急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞中的表达并构建特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体。利用RT-PCR及Western blot技术检测MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat等ALL细胞系及在我院住院治疗的15例新诊断的ALL患者骨髓细胞中NANOG的表达情况。通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒,感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株,并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率。结果表明,MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及33.3%的ALL患者中可见NANOG基因mRNA的扩增产物及蛋白表达。测序表明,ALL患者及MOLT-4、CCRF-HSB2细胞主要表达NANOGP8 mRNA。构建慢病毒干扰质粒pLB-shNANOG-1、pLB-shNANOG-2及pLB-shcontrol,包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.83-3.12)×108IU/ml。病毒感染MOLT-4细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞。实时定量PCR及Western blot证实,两种shRNA可有效下调NANOG基因及蛋白的表达。结论:MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及部分ALL患者骨髓细胞中存在NANOG的表达,其主要为NANOGP8 mRNA的转录。成功构建了特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体,获得可稳定下调NANOG表达的MOLT-4细胞株。
- 曹江孟凡静李莉吕超周俊程海陈伟陈翀徐开林
- 关键词：NANOG急性淋巴细胞白血病慢病毒
- 慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Tim-3表达的检测及意义
- 目的研究慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Tim-3的表达及对其炎症因子生成的影响。方法利用多色流式技术和荧光实时定量PCR(qRT-PCR),分别检测不同状态的CHB患者外周血单核细胞亚群表面Tim-3分子和Tim-3 m...
- 高西阳李搀潘修成李莉傅涓涓姚伟
- 肥大细胞活化相关分子及抗体与慢性荨麻疹及湿疹的相关性研究
- 许雯李莉郝婷婷李佳李钦峰李甲勇张汝霖王玉萍
- 溃疡性结肠炎患者外周血IL-22及相关CD4^＋T细胞亚群的表达被引量：13
- 2012年
- 目的通过检测溃疡性结肠炎（UC）患者外周血中IL-22及相关CD4^＋T细胞亚群的表达，探讨其在UC发病机制中的可能作用。方法以我院住院治疗的35例UC患者及35例健康对照者为研究对象，应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量，采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例，并分析其与疾病活动度的关系。结果UC组患者血浆中IL-22的含量为（354．12±104．22）pg／ml，显著高于对照组（P〈0．05），其中重度患者增高明显；UC组患者外周血Th17细胞比例[（2．36±0．94）％]显著高于对照组（P〈0．05），其中，中、重度患者增高明显；UC组患者外周血Th22细胞比例[（2．27±0．87）％]显著高于对照组（P〈0．05），其中，重度患者增高明显；而UC组患者Th1细胞比例与对照组比较无明显差异。结论UC患者外周血中IL-22水平、Th17、Th22细胞比例明显升高，且与疾病活动度密切相关。
- 李莉曹江刘玲朱祖安吴克俭费素娟
- 关键词：溃疡性结肠炎白细胞介素-22TH1TH17
- 慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV特异性IL-21表达及其对CD8^+T淋巴细胞功能的影响被引量：7
- 2014年
- 目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中HBV特异性IL-21的表达及其对CD8+T淋巴细胞功能的调节作用。方法以HBVc18-27(10μg/mL)多肽刺激46例不同临床类型慢性乙型肝炎患者PBMC。ELISA检测上清液IL-21水平。在HBVc18-27(10μg/mL)多肽和IL-21(50 U/mL)或IL-2(100 ng/mL)培养条件下,应用MHC-肽五聚体结合流式细胞术检测PBMC中HBV特异性CTL细胞频数变化;免疫磁珠分离纯化免疫耐受期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者PBMC中CD8+T淋巴细胞,以HBcAg(10μg/mL)预刺激CD8-PBMC5 h后,采用Transwell小室共培养技术,在阻断IL-21通路条件下,应用实时PCR检测CD8+T淋巴细胞IFN-γmRNA的表达。结果 HBV特异性IL-21在免疫控制期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者PBMC中表达水平显著高于免疫耐受期患者,而在免疫控制期和免疫激活期两组之间无显著差异。与PBS对照组相比,IL-21组HBV特异性CTL细胞频数明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),而与IL-2组相比差异无统计学意义。以IL-21抗体阻断IL-21通路后,CD8+T淋巴细胞IFN-γmRNA表达水平显著下降,差异有统计学意义。结论免疫控制期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者PBMC均可生成一定水平的HBV特异性IL-21,并能增强外周CD8+T淋巴细胞的增殖和IFN-γ表达水平。
- 成利伟孔歌李莉潘修成傅涓涓李丽
- 关键词：乙型IL-21CD8^+T
- 慢病毒载体介导人sTRAIL对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用
- 2013年
- 目的构建携带人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的自身失活型慢病毒载体,观察sTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞的诱导凋亡作用,探讨其基因治疗功效。方法构建含人sTRAIL基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒三质粒包装系统包装出的携带人sTRAIL的重组慢病毒,在体外感染人胃癌SGC-7901细胞、正常人肝细胞HL-7702、人胚肺成纤维细胞HLF-1。应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验(ELISA)评价sTRAIL蛋白在胃癌细胞中的表达。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-sTRAIL,包装的重组慢病毒滴度可达106 IU/mL,可有效感染体外培养的细胞;含sTRAIL的重组慢病毒感染SGC-7901细胞,细胞凋亡率随病毒感染复数(MOI)的增加而升高,呈剂量依赖性;在MOI为6.0、作用24h时,细胞凋亡率最高,可达(29.12±2.87)%,细胞上清中sTRAIL表达量为(34.08±3.43)ng/mL;而在HL-7702、HLF-1等人正常细胞未见明显细胞凋亡。结论含有sTRAIL基因的重组慢病毒载体在体外能够有效地感染胃癌SGC-7901细胞并使其分泌有生物活性的sTRAIL蛋白,可诱导SGC-7901细胞的凋亡,而对正常细胞无显著影响。
- 李莉曹江刘玲朱祖安吴克俭费素娟
- 关键词：慢病毒载体可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因治疗
- 基因工程化Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的作用被引量：6
- 2011年
- 目的探讨输注慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法利用慢病毒载体介导，将鼠Foxp3基因转导人BALB／c小鼠的CD4^=CD25-T淋巴细胞，即为基因工程Treg细胞。建立小鼠异基因骨髓移植模型，在移植时联合输注基因工程Treg，通过受鼠移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理学改变、供者T淋巴细胞激活、炎性细胞因子浓度等指标评价其防治GVHD的作用。结果单纯照射组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为（8．8±0．6）、（36．7±2．5）、（51．6±4．0）和（34．1±2．3）d，工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组（P〈0．05）。移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变，工程Treg组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常，未见GVHD病理表现，该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组。移植后3d（＋3d）、＋4d工程Treg组受鼠脾脏中供者T淋巴细胞数明显低于移植对照组和空载体对照组（P〈0．05），且＋4d工程Treg组受鼠脾脏供者T淋巴细胞中IFN-γ^＋细胞比例较后两组明显降低（P〈0．05）。在＋21～＋28d移植对照组、工程Treg组、空载体对照组受鼠血清IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度达高峰，工程Treg组在＋21d时IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度高峰较其他两组为低（P〈0．05）。结论小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可通过减少受鼠移植后供者T淋巴细胞的早期扩增、激活以及炎性细胞因子的分泌有效减少GVHD的发生，减轻其严重程度。
- 曹江李莉陈翀曾令宇李振宇潘秀英徐开林
- 关键词：骨髓移植移植物抗宿主病慢病毒感染
