杨丽华
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 四环素诱导的基因表达系统研究进展被引量：4
- 2009年
- 诱导性基因表达系统可以从时间上调控基因的表达,是基因功能研究的重要工具之一,其中,四环素诱导的基因表达系统是应用最广泛的一种。在此基础上相继建立了双向启动子调控的转基因表达系统、与Cre/loxP系统结合的诱导性条件性基因敲除系统以及四环素控制的转录沉默系统(tTS),它们在研究哺乳动物基因的功能及表达调控方面发挥了重要作用。本文就四环素诱导的基因表达系统的原理、改进及应用简要作一综述。
- 杨丽华周常文
- 关键词：四环素TTS
- 小鼠ADAM10条件性基因打靶载体的构建与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建小鼠ADAM10条件性基因打靶载体,为建立ADAM10条件性敲除小鼠模型奠定基础。方法以正常小鼠(129/Svj)基因组DNA为模板,采用长片段PCR方法,扩增小鼠ADAM10基因第2外显子及其侧翼序列。通过引入LoxP位点和TK基因等步骤,获得ADAM10条件性基因打靶载体。结果经限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的小鼠ADAM10基因条件性打靶载体符合设计要求。结沦成功构建了小鼠ADAM10条件性基因打靶载体,为建立ADAM10条件性基因敲除小鼠打下了基础。
- 林炤华杨丽华郑杰辉周常文
- 关键词：ADAM10同源重组
- Tet-on调控的基因表达载体的构建与体外表达研究被引量：2
- 2011年
- 目的 依据Tet-on系统的原理,构建2个真核表达载体pTRE-Cre-EGFP（P1）和Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv（P2）并转染293T细胞,通过观察报告基因EGFP表达的绿色荧光,检验载体中基因元件能否正常发挥作用.方法 从pCre-IRES-EGFP载体上切下Cre-EGFP,与pTRE载体连接成P1载体,切下P1的部分片段Phcmv-Cre-EGFP 与pTet-On载体的部分片段Pcmv-rtTA连接成 P2载体,利用脂质体将pTet-on和P1共转染、将P2单转染入293T细胞,加入或者不加强力霉素（Doxcycline,Dox）诱导,观察绿色荧光.结果 成功构建载体P1及P2;P1和pTet-on质粒的共转染及P2的单转染在Dox诱导下均有绿色荧光的表达,无Dox诱导时绿色荧光表达水平极低.结论 构建的载体P1及P2中的基因元件在体外均能正常发挥作用,为进一步制备诱导性表达Cre的转基因小鼠奠定了基础.
- 杨丽华周常文
- 关键词：真核表达载体TET-ON转染
