杨振
- 作品数：6 被引量：29H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：陕西省国际科技合作计划国家自然科学基金陕西省“13115”科技创新工程更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 人SUMO-3基因原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2008年
- 构建人SUMO-3基因的原核表达载体pET41a(+)-SUMO-3,表达重组GST-SUMO-3融合蛋白,制备人SUMO-3多克隆抗体。试验结果显示,通过PCR方法从重组质粒pEYFP-SUMO-3中克隆到的SUMO-3N端93个氨基酸的基因序列与NCBI上提供的序列一致,重组质粒pET41a(+)-SUMO-3构建成功;重组pET41a(+)-SUMO-3在E.coli.BL21(DE3)pLysS中表达GST-SUMO-3融合蛋白,分子量为44.0 kDa,与预期分子量一致;采用亲和层析纯化融合蛋白GST-SUMO-3并免疫家兔,获得人SUMO-3抗体;Westernblot检测显示该抗体可以特异性识别SUMO-3,ELISA检测结果成阳性,抗体效价约为1∶20000。实验结果为进一步研究人SUMO-3及SUMO第二类家族的功能提供了有用工具。
- 安宁杨振宋振雷鸣郭泽坤
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 绿豆的冠层温度分异现象及其叶片结构特征被引量：11
- 2005年
- 观测两个绿豆品种安9204和保942—34在结英期冠层温度的变化,发现在大气,土壤、栽培措施完全 一致的一个小尺度范围内,保942—34的冠层温度持续偏高,而安9204的冠层温度相对较低,特别是在结荚后 期表现更为明显。观察比较这两种绿豆的叶片结构,发现冠层温度较低的绿豆品种安9204叶片较薄,但叶肉 中栅栏组织和海绵组织细胞排列紧密,细胞间隙较少;在结荚后期,叶片结构衰老缓慢,叶肉细胞中含有较多 的叶绿体。
- 苗芳张嵩午张宾冯佰利杨振
- 关键词：绿豆冠层温度叶片显微结构
- 泛素样小蛋白4(SUMO4)的克隆、原核表达、纯化及鉴定被引量：10
- 2008年
- 【目的】为人类泛素样小蛋白4(SUMO4)多克隆抗体制备和疾病研究奠定基础。【方法】根据Gen-Bank提供的核酸序列,设计7条单链DNA,采用重叠延伸PCR方法,合成SUMO4基因编码区。基因片段经限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pGEX-4T-1中。酶切、测序鉴定后,将重组子转染BL21 RIL菌株,表达及纯化融合蛋白。用SDS-PAGE和Western blot检测纯化效果,鉴定表达产物。【结果】成功合成了长度约为280 bp的SUMO4基因,经双酶切鉴定,SUMO4原核表达载体构建成功,插入片段测序正确。GST-SUMO4融合蛋白在终浓度1mmol/L IPTG、28℃诱导5 h后产量达到高峰,SDS-PAGE证实表达产物以可溶形式存在,分子量约为37 ku,GST亲和层析的纯化效果良好,Western blot验证融合蛋白分子量与预期值相符。【结论】SUMO4蛋白在大肠杆菌中高效表达,并以可溶性蛋白形式存在。
- 单黎然杨振安宁宋振郭泽坤
- 关键词：重叠延伸PCR原核表达蛋白纯化
- 人SUMO-2基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人SUMO-2基因的原核表达载体,纯化融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2并以其为抗原免疫家兔,制备人SUMO-2多克隆抗体。方法:用PCR的方法得到人SUMO-2基因并克隆至pET41a(+)原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS诱导融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫家兔制备抗血清,分别采用ELISA、Western blot检测抗体效价和特异性。结果:测序证实重组质粒pET41a(+)-SU-MO2-SUMO2构建成功;SDS-PAGE结果证实获得Mr为52000的GST-SUMO2-SUMO2融合蛋白且为可溶性蛋白;经过GST亲和层析有效纯化;以该融合蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经Western blot检测证实能与目的蛋白发生特异性结合,ELISA检测为阳性。结论:获得了人SUMO-2蛋白及特异性多克隆抗体,对进一步研究人SUMO-2及SUMO第二类家族的功能提供了有用工具。
- 杨振宋振安宁王劼郭霭光雷鸣郭泽坤
- 关键词：原核表达蛋白纯化抗血清
- 人SUMO2基因多克隆抗体的制备及其亚细胞定位的研究
- 小泛素相关修饰物SUMO/(small ubiquitin related-modifier/)与蛋白的共价连接是一种新的广泛存在的翻译后修饰形式。SUMO是广泛存在于真核细胞中高度保守的蛋白家族,在脊椎动物中有4个SU...
- 杨振
- 关键词：融合蛋白表达蛋白纯化多克隆抗体亚细胞定位
- 文献传递
- 人SUMO-1基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的构建人SUMO-1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人SUMO-1抗血清。方法从质粒pcDNA-HA-SUMO1-GG中用PCR方法克隆到编码人SUMO-1N端97个氨基酸的基因片段,构建了SUMO-1原核表达载体pET41a(+)-SUMO1,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导蛋白表达并利用GST亲和层析柱进行纯化,以纯化后的融合蛋白GST-SUMO1为抗原免疫家兔,获得抗血清。Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建原核表达载体,纯化到融合蛋白GST-SUMO1,用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了人SUMO-1多克隆抗体,为进一步研究人SUMO-1蛋白的功能奠定了基础。
- 宋振王劼安宁杨振雷鸣郭泽坤
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
