杨闽楠
- 作品数：16 被引量：26H指数：3
- 供职机构：吉林大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 高致病性猪蓝耳病病毒吉林株的分离鉴定及生物学特性被引量：9
- 2014年
- 从吉林某猪场采集曾接种过猪繁殖与呼吸综合征疫苗的发病猪病料,经RT-PCR初步鉴定为猪繁殖与呼吸综合征病毒后,利用反转录合成cDNA,用针对PRRSV M、N基因片段设计的特异性引物进行扩增及电泳,在紫外凝胶成像系统下可见约为660bp特异性扩增条带。解剖发病仔猪,发现其有HP-PRRSV发病的特征,两耳及鼻端淤血,呈蓝紫色,肺部等内脏器官淤血呈暗红色。病理组织切片显示,病猪有典型的间质性肺炎的特征性病理变化。将其接种于Marc-145细胞后,在培养至第4代时出现典型的细胞病变(CPE),表现为细胞聚集成丛、随后固缩、变圆、脱落;经Reed-Muench法计算得出两PRRSV分离株的病毒滴度分别为10-5.30 TCID50/0.1mL和10-5.53TCID50/0.1mL。用间接免疫荧光试验观察到在接种病料的Marc-145细胞胞浆内出现特异性荧光,而未接种PRRSV的细胞对照则未见到荧光反应。
- 相群尹仁福杨闽楠丁壮
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒生物学特性
- 抗猪呼吸与生殖综合征病毒Nsp9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的制备抗猪呼吸与生殖综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9蛋白单克隆抗体,并进行初步鉴定。方法用纯化的重组Nsp9蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV Nsp9蛋白单克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验分析单抗的特异性;使用免疫球蛋白标准亚类鉴定试剂盒鉴定单抗的亚类;将杂交瘤细胞分别保存1、2、3、4个月后复苏,采用间接ELISA法检测细胞分泌抗体的能力。结果共获得3株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为2D6、3C11和4E6,其细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶6 400、1∶3 200和1∶1 600,腹水的ELISA效价分别为1∶640 000、1∶512 000和1∶256 000。3株单抗均可与Nsp9蛋白和PRRSV特异性结合;2D6和3C11株单抗的Ig亚型为IgG1,4E6株单抗为IgM亚类抗体;3株杂交瘤细胞保存4个月均能稳定分泌单抗。结论已制备抗PRRSVNsp9蛋白单克隆抗体,其特异性高,稳定性良好,为建立鉴别自然感染与注射疫苗感染PRRSV的诊断方法提供了材料。
- 吴娟王潇博黄志强杨闽楠丁壮
- 关键词：单克隆抗体
- 新城疫病毒3′及5′末端非编码区序列的反向遗传研究
- 2014年
- 以新城疫病毒(NDV)LaSota株感染性克隆PCI-La为平台进行反向遗传操作,并利用PCR技术将其3′端和5′端非编码区分别替换为鹅源NDV NA-1株3′端和5′端非编码区,以及3′端和5′端非编码区同时替换,通过生物学软件DNAStar对替换后的序列进行比对分析,所替换的序列未出现基因突变现象,证明非编码区替换成功,从而分别获得3株突变全长感染性克隆pCI-rL-NL、pCI-rL-NT、pCI-rL-NL-NT;将所获得的这3株突变感染性克隆分别与辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L共转染BSR细胞,进行重组病毒的拯救。结果显示,pCI-rL-NL、pCI-rL-NT两种质粒表达系统均可拯救到有感染活性的病毒粒子,其HA效价为24,23,HI试验及间接免疫荧光试验结果均为阳性,并且通过电镜观察到具有典型副黏病毒科特征的、有囊膜的NDV颗粒。本试验成功构建了2株NDV LaSota突变株的反向遗传操作系统,为后期进行重组NDV致病性的研究奠定基础,也为进一步研究筛选新型分子标记疫苗、病毒活载体疫苗和抗病毒药物提供了可能。
- 李想高超李芹王建忠杨闽楠王泽张晓东丁壮
- 关键词：NDV拯救
- RNAi靶向PRRSV N基因及GP5基因ADE表达缺失重组腺病毒免疫原性研究
- 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。中国自1996年爆发PRRS以来，已遍及全国各地，成为对养猪业危害最为严重的疫病之一。PRRS的病原体为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV...
- 杨闽楠
- 关键词：PRRSVRNAIN基因GP5基因MARC-145细胞
- 文献传递
- 鉴别经典PRRS与HPRRS的液相阻断ELISA试剂盒
- 本发明涉及一种能够鉴别经典PRRS与HPRRS的液相阻断ELISA试剂盒，其特征在于：将待检血清用样品稀释液2倍稀释后100ul加入ELISA板中37℃孵育1h，用洗涤液清洗5次，每次2min；然后加入结合单抗每孔100...
- 丁壮刘慧母连志黄志强吕字华宋德武杨闽楠赛度
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株NSP9基因的克隆及序列分析
- 目的：猪繁殖与呼吸综合征病毒属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，本研究以PRRSV Nsp9基因为研究对象，分析猪繁殖与呼吸综合征病毒在吉林地区的流行变异趋势，为猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病调查提供技术基础。结论：由于灭...
- 黄志强杨闽楠丁壮赛度张泉鹏孙聪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒克隆技术免疫原性
- 鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的制备被引量：7
- 2014年
- 为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac E.coli感受态细胞中,经蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-VP2,将重组杆粒rBacmid-VP2转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-VP2。rBac-VP2感染sf9细胞,提取DNA,经PCR电泳分析,得到1条与预期大小相符的特异性条带;间接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-blotting分析,在大约53 000处出现1条特异性的蛋白条带;电镜观察感染重组杆状病毒的细胞上清和沉淀,均可见重组VP2蛋白自行组装形成的病毒样颗粒。试验结果表明IBDV VP2基因在昆虫细胞中得到了表达,并自组装成了IBDV病毒样颗粒。本试验为研制鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗奠定了基础。
- 李芹王建忠黄楚荻穆昱周玉龙高超杨闽楠赛度丁壮
- 关键词：鸡传染性法氏囊病毒VP2真核表达病毒样颗粒SF9细胞
- 高致病性猪蓝耳病病毒吉林株的致病性研究
- 2014年
- 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪急性接触性传染病。PRRS主要表现为发热，厌食，流产，产木乃伊胎、死胎、弱仔及仔猪的呼吸道症状。1986年美国首次发生PRRS，1991年荷兰首次分离出PRRSV，1995年北京地区首次爆发PRRS，1996年郭宝清等首次分离出PRRSV，目前PRRS在我国已广泛存在。
- 相群尹仁福杨闽楠丁壮
- 关键词：高致病性蓝耳病病毒PRRSV急性接触性传染病呼吸道症状
- 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的活毒抗体试剂盒
- 本发明涉及一种检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的活毒抗体试剂盒，其特征在于：将待检血清用样品稀释液2倍稀释后100μl加入ELISA板中37℃孵育1h，设置阳性对照、阴性对照和空白对照。用洗涤液清洗5次，每次2min；然后加入...
- 丁壮黄志强母连志吴娟杨闽楠张泉鹏
- 去除ADE表位的PRRSV GP5重组蛋白腺病毒载体的构建
- 目的 PRRSV (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是目前危害世界养猪业的重要病原之一,其GP5蛋白能够诱导产生中和抗体,但在GP5外结...
- 杨闽楠赛度李想丁壮
