林婷婷
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目沈阳市科技局资助项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 雷帕霉素对转化生长因子-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间叶样转化的抑制作用及其机制被引量：7
- 2013年
- 背景转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）上皮细胞-肌成纤维细胞转化（EMT）过程是后发性白内障（PCO）的主要发病机制，因此寻求有效抑制这一作用的药物对于防治PCO有重要意义。目的观察雷帕霉素（RAPA）对人LECs增生和TGF-β2诱导的EMT的抑制作用。方法采用含质量分数10％胎牛血清的DMEM高糖细胞培养液对人LECs系SRA01／04进行体外培养，换以无血清培养液培养后分别用TGF-β2（5mg／L）、TGF-β2＋10nlg／LRAPA、TGF-β2＋100mg／LRAPA、TGF-β2＋1000mg／LRAPA、TGF-β2＋10000mg／LRAPA共培养SRA01／0472h，仅用无血清培养液培养的SRA01／04作为对照组。采用MTT法检测各组SRAOI／04的吸光度（A490）值以评估SRA01／04的增生情况，并计算RAPA对细胞生长的抑制率。各组细胞作用48h后，采用逆转录PCR（RT-PCR）法和Westernblot法分别检测LECsETM的标志物-α平滑肌肌动蛋白（d-SMA）和上皮性钙黏附蛋白（E-cad）的表达。选取TGF-β2＋400mg／LRAPA分别作用于培养的SRA01／0424、48、72h，采用Westernblot法检测SRA01／04中α-SMA、E-cad的表达水平。结果MTT法检测结果显示，对照组、TGF-β2组、TGF-β2＋10ing／LRAPA组、TGF-β2＋100mg／LRAPA组、TGF-β2＋1000ing／LRAPA组和TGF-β2＋10000mg／LRAPA组SRA01／04的A490值分别为0．680＋0．020、0．550±0．013、0．480＋0．014、0．400＋0．011和0．200＋0．019，表明随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04增生值降低，差异有统计学意义（F=101．920，P=0．000），且RAPA的抑制率逐渐增加。RT-PCR和Westernblot检测结果表明，阴性对照组SRAOI／04中α-SMAmRNA（α-SMAmRNA／β-actinmRNA）及其蛋白（α-SMA／β-actin）仅有少量表达，TGF．B，组可见SRAOI／04中01．SMAmRNA及其蛋白表达量明显增加，但不同质量浓度的RAPA作用于SRA01／04后，随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04中α-SMAmRNA及蛋白的表达�
- 林婷婷王思敏刘加勇冯浩宁宏
- 关键词：雷帕霉素转化生长因子-Β2人晶状体上皮细胞
- 干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因19表达与紫外线诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的关系被引量：2
- 2013年
- 背景长期暴露于紫外线照射的环境中可通过破坏细胞线粒体的跨膜电位等机制促进相应组织中的细胞凋亡，包括人晶状体上皮细胞（LECs）。干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）位于线粒体呼吸链Ⅰ上，与紫外线照射诱导的LECs凋亡过程是否有关尚不明确。目的探讨GRIM-19与长波紫外线照射诱导的人LECs损伤的关系。方法将人LECs系SRA01／04用常规培养方法在含质量分数10％胎牛血清的α-MEM培养液中进行培养，当细胞生长至对数生长期并达到80％融合时用长波紫外线照射，时间分别为5、10、15、20、25min，长波紫外线剂量分别为30、60、90、120、150mJ／cm^2，照射后继续培养1h，对照组细胞与实验组培养方法相同，但不用长波紫外线照射。采用流式细胞技术测定各组培养的凋亡率，应用Westernblot法检测各组培养上清液中GRIM-19蛋白的表达强度和相对表达量，采用单因素方差分析法对不同组间LECs凋亡率和GRIM-19蛋白相对表达量的差异进行比较，用Pearson积矩线性相关分析法评估LECs凋亡率与GRIM-19蛋白相对表达量的关系。结果不同剂量的紫外线照射培养的LECs后各组细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义（F=149．32，P〈0．01），其中60、90、120及150mJ／em。紫外线照射组与对照组比较，细胞凋亡率均明显增加，差异均有统计学意义（q=-17．02、-25．20、-29．41、-8．61，P〈0．01）。不同剂量的紫外线照射培养的LECs后细胞上清液中GRIM·19的表达明显增强，各组LECs上清液中GRIM-19的相对表达量（GRIM-19／β-actin）的总体差异有统计学意义（F=6．87，P〈0．05），其中60、90、120、150mJ／cm。紫外线照射组细胞上清液中GRIM-19的相对表达量分别为2．01±O．76、2．98±1．80、3．97±1．61和2．42±1．28，均明显高于对照组的0．56±0．23，差异均有统计学意义（q=-4．12�
- 王思敏冯浩林婷婷刘加勇宁宏
- 关键词：干扰素人晶状体上皮细胞细胞凋亡
- PP242对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用及GRIM-19表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察PP242对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖和GRIM-19表达的影响。方法对永生系人晶状体上皮细胞SRA01/04进行培养及传代,Cell Counting Kit-8比色法检测PP242(100,250,500,750,1 000 nmol/L)处理细胞株SRA01/04后12,24,48 h细胞生长情况;应用免疫印迹法及实时定量RT-PCR检测使用PP242(100,250,500 nmol/L)培养细胞48 h后GRIM-19及其mRNA的表达情况。结果 100,250,500,750,1 000 nmol/L PP242对人晶状体上皮细胞系SRA01/04作用12,24,48 h后,其抑制率12 h组分别为8.59%,14.53%,19.62%,23.01%,28.80%;24 h组分别为10.22%,19.67%,34.92%,42.90%,46.86%;48 h组分别为24.19%,48.13%,54.54%,61.36%,65.34%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);100,250,500 nmol/L PP242处理人晶状体上皮细胞48 h后,免疫印迹法检测结果显示GRIM-19蛋白的表达水平逐渐增强;实时定量RT-PCR检测结果显示,GRIM-19 mRNA表达增强,绝对定量mRNA结果分别为0.700±0.112,0.994±0.128,1.584±0.173,与正常对照组(0.456±0.177)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PP242对体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖存在抑制作用,其作用强度呈浓度和时间依赖性;人晶状体上皮细胞中存在GRIM-19的表达;PP242在抑制人晶状体上皮细胞的增殖过程中可上调GRIM-19的表达。
- 冯浩林婷婷王思敏刘加勇宁宏
- 关键词：人晶状体上皮细胞GRIM-19
- 普伐他汀对2型糖尿病大鼠视网膜组织中转化生长因子β1表达的影响被引量：7
- 2012年
- 目的了解普伐他汀对2型糖尿病大鼠视网膜组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨普伐他汀对糖尿病性视网膜病变的防治作用。方法将54只Wistar大鼠随机分为正常组、糖尿病组和普伐他汀治疗组,每组18只。用链脲佐菌素诱导糖尿病组和普伐他汀治疗组大鼠建立2型糖尿病模型,正常组和糖尿病组正常饮食,普伐他汀治疗组在正常饮食中加入普伐他汀(100 mg.kg-.1d-1)。30周后取各组大鼠视网膜,分别用免疫组化法和Real-time PCR法检测视网膜组织中TGF-β1的表达水平。结果 TGF-β1阳性表达于视网膜神经节细胞胞质中。糖尿病组视网膜组织变薄,神经节细胞数减少;与正常组相比,普伐他汀治疗组视网膜形态无明显改变,神经节细胞数无明显减少。糖尿病组视网膜组织中TGF-β1表达明显高于正常组(P<0.05),普伐他汀治疗组明显低于糖尿病组(P<0.05)。结论普伐他汀能够阻止或延缓糖尿病视网膜形态改变,能够降低糖尿病大鼠视网膜组织中TGF-β1的表达水平。
- 李婕杨宁王思敏林婷婷宁宏
- 关键词：普伐他汀转化生长因子Β1糖尿病视网膜病变
- GRIM-19在H_2O_2诱导的晶状体上皮细胞氧化应激中的表达
- 2014年
- 目的观察干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)在不同浓度H2O2诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)氧化应激中的表达变化。方法免疫荧光法检测GRIM-19在正常HLEC中的表达及定位;建立HLEC氧化损伤模型:分别用浓度为0、20、100、300、500和800μmol/L的H2O2处理HLEC 1 h后换液,继续孵育6、24 h;MTT法检测各浓度H2O2对HLEC的生长抑制作用;Western blot法检测6 h组HLEC中GRIM-19表达的变化。结果免疫荧光结果示:GRIM-19主要表达于HLEC细胞质中;MTT结果示:100~800μmol/L H2O2对HLEC有增殖抑制作用,且呈剂量依赖关系,与对照组相比差异有统计学意义(P均<0.01),20μmol/L组与空白对照组未见明显差异(P>0.05);Western blot结果显示:GRIM-19在各浓度组中相对表达量分别为1.466±0.018,1.509±0.038,1.599±0.014,1.709±0.058,1.813±0.010,1.583±0.021,实验组均显著高于空白对照组(P<0.05),正常对照组与空白对照组未见明显差异。结论正常HLEC中存在GRIM-19表达。在一定浓度H2O2诱导的氧化应激中,GRIM-19的表达显著增加。
- 刘加勇王思敏林婷婷冯浩宁宏
- 关键词：GRIM-19H2O2人晶状体上皮细胞氧化应激
