温洁霞
- 作品数：18 被引量：37H指数：4
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 基于膜受体阻断犬细小病毒感染的分子机制研究
- 仲飞李秀锦仲峰李文艳王微温洁霞潘素敏潘红丽李楠王幸兴韩冬梅王利月林洪羽张永红张建楼
- 基于细小病毒VP2蛋白与宿主细胞膜TfR特异结合并介导病毒感染的特性，利用宿主细胞的TfR细胞外区（也称可溶性的TfR，即sTfR）重组蛋白封闭细小病毒颗粒，从而达到阻止细小病毒感染宿主细胞的目的。在项目研究过程中，课题...
- 关键词：
- 关键词：细小病毒感染分子生物学
- 小鼠GM-CSF基因的扩增及在HEK293T细胞中的分泌表达
- 2012年
- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是机体免疫系统的重要细胞因子,具有生物佐剂作用。为了研究GM-CSF的生物佐剂作用,本实验构建了真核分泌性表达载体,并在真核细胞内进行分泌性表达,最终获得了重组GM-CSF蛋白。首先通过RT-PCR的方法从小鼠脾脏细胞中扩增获得小鼠GM-CSF基因,然后通过KpnⅠ和ApaⅠ双酶切位点,将目的片段插入到pcDNA3.
- 李楠张峰温洁霞仲飞
- 关键词：分泌表达小鼠脾脏机体免疫系统重组表达载体动物疫苗
- 重组单增李斯特菌溶血素O在HEK293T细胞中的分泌表达及活性分析被引量：2
- 2015年
- 为研究单增李斯特菌分泌的溶血素O(LLO)的免疫佐剂作用,需要构建其真核表达载体,使其在动物体内进行分泌表达,从而发挥其生物佐剂活性。为此,本试验通过PCR方法从LM基因组DNA中扩增了LLO基因,并将其插入到带有CD5信号肽的质粒pcDNA3.1ACD5sp的信号肽下游构建成真核表达载体,然后转染人胚肾细胞HEK293T细胞使其分泌表达,用Ni-NTA琼脂糖凝胶层析法从培养基中分离纯化重组LLO蛋白,通过Western-blot对其进行鉴定,并用溶血试验鉴定其生物活性。结果表明,扩增的LLO基因序列与GenBank中的基因序列完全一致,在HEK293T细胞中表达的重组LLO在CD5信号肽介导下能被分泌到细胞外,并具有较强的溶血活性,这为进一步研究LLO的功能提供了必要的条件。
- 常玉梅李文艳张永红张建楼温洁霞王利月仲飞
- 关键词：单增李斯特菌溶血活性
- 含绿色荧光蛋白基因的PRRSV感染性克隆的制备及特性分析
- 2012年
- 为直观形象地观察PRRSV对细胞的感染,本文拟构建含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,并对其某些特性进行分析。首先依据PRRSV病毒株(GenBank:AY545985.1)的序列,以其感染性克隆重组质粒(FL-12)和含有GFP基因的质粒(PCDNA-EF1-GFP)为模板,采用重叠PCR的方法,扩增出上。
- 张考仲飞李秀锦陈慧慧李文艳温洁霞
- 关键词：感染性克隆PRRSV感染病毒株非结构蛋白体外转录
- 密码子优化提高猪IL-7在HEK293T细胞表达的研究被引量：5
- 2017年
- 为提高重组猪白细胞介素-7(pIL-7)在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达,依据人偏爱的密码子对pIL-7基因进行了优化修饰,然后用pcDNA3.1A质粒构建其与Myc/His-标签融合的真核表达载体。将此表达载体和过去构建的野生型pIL-7表达载体分别转染HEK293T细胞进行表达,利用镍-琼脂糖凝胶颗粒从培养基中纯化表达的重组pIL-7,比较二者的表达水平。结果显示,密码子优化后pIL-7基因在HEK293T细胞中的表达水平为(45±3.2)μg/T25细胞瓶,比野生型pIL-7基因的表达水平(21±1.8)μg/T25细胞瓶,提高了2倍多,可见密码子优化可明显提高重组pIL-7在HEK293T细胞中的表达。这为猪IL-7的生物学功能的研究提供了必要条件。
- 崔丹温洁霞霍珊珊张建楼左玉柱仲飞
- 关键词：密码子优化真核细胞
- 犬GM-CSF基因对犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫增强作用被引量：4
- 2013年
- 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫活性,本实验利用犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因作为生物佐剂研究其对犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫增强作用。首先通过RT-PCR方法从犬淋巴细胞中扩增GM-CSF基因,并将其插入到pcDNA3.1载体上,分别构建该基因的两个分泌型真核表达载体,即非融合表达载体pcDNA-cGMCSF和与Myc-His融合的表达载体pcDNA-cGMCSF/MH。用pcDNA-cGMCSF/MH载体转染HEK293T细胞以确定GM-CSF基因能否在真核细胞中进行分泌表达。然后用本室构建的VP2基因表达载体单免疫小鼠,用VP2表达载体与pcDNA-cGMCSF共免疫小鼠(pcDNA3.1空载体作为阴性对照)。免疫后用ELISA方法检测不同时间小鼠血清的抗体水平。用MTT法检测小鼠免疫后35d时淋巴细胞的增殖活性,同时用ELISA试剂盒检测小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。结果表明,本试验构建的表达载体能够介导重组GM-CSF在真核细胞中进行分泌表达。免疫实验表明,利用GM-CSF基因与VP2基因共免疫小鼠,抗体的水平明显高于VP2基因单免疫组(P<0.01)。共免疫组小鼠淋巴细胞的刺激指数和γ干扰素的表达水平均明显高于单免疫组(P<0.05)。由此可见,GM-CSF表达载体可明显提高CPV VP2DNA疫苗的免疫应答水平。
- 贾启恒温洁霞王利月林洪羽张峰王璐孙岩李秀锦仲飞
- 关键词：GM-CSF犬细小病毒
- 基于炎性体研究丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化的分子机制
- 心脑血管疾病是威胁人类健康的重要疾病，而动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是众多心脑血管疾病发病的共同病理基础。随着现代医学的发展，对AS机制的研究从大体病理深入到了细胞和分子水平，由过去认为单是内皮损...
- 温洁霞
- 关键词：动脉粥样硬化巨噬细胞胆固醇
- 文献传递
- IL-2与IL-7基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用被引量：5
- 2012年
- 【目的】探讨犬白细胞介素-2(cIL-2)与犬IL-7(cIL-7)基因对犬细小病毒(CPV)VP2蛋白DNA疫苗免疫增强的协同作用。【方法】利用含内部核蛋白体进入位点(IRES)的真核表达载体构建cIL-2和cIL-7双基因表达载体。然后利用本实验室构建的CPV VP2、cIL-2和cIL-7表达载体及本文构建的双基因表达载体,以不同组合对小鼠进行免疫,即VP2单免疫,VP2+cIL-2、VP2+cIL-7和VP2+cIL-2/cIL-7共免疫。通过ELISA方法检测免疫后不同时间小鼠血清VP2的抗体水平,并分析中和抗体的效价,通过细胞增殖实验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,并用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。【结果】本实验构建的双基因表达载体结构正确,并能够介导cIL-2与cIL-7基因在真核细胞中进行同步分泌表达。小鼠免疫结果表明,VP2+cIL-2/cIL-7共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价均显著高于VP2+cIL-2和VP2+cIL-7共免疫组(P<0.05)。VP2+cIL-2/cIL-7共免疫组小鼠的淋巴细胞刺激指数比其它免疫组略有升高但尚未达到显著水平,然而γ干扰素的表达水平显著高于其它免疫组(P<0.05)。【结论】cIL-2和cIL-7基因对CPV VP2 DNA疫苗免疫原性的增强作用具有明显的协同效应。
- 陈慧慧仲飞李秀锦王璐孙岩能昌爱张考李文艳温洁霞
- 关键词：白细胞介素-2白细胞介素-7犬细小病毒
- 腺病毒介导犬干扰素-γ基因的表达及其体外抗犬细小病毒的作用被引量：6
- 2012年
- 【目的】构建含犬干扰素-γ(cIFN-γ)基因的重组腺病毒,并在培养的犬肾细胞MDCK中分析其抗犬细小病毒的活性。【方法】首先将cIFN-γcNDA基因克隆到腺病毒穿梭质粒中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒穿梭质粒pShuttle3-cIFN-γ。利用特异的酶切位点,通过直接连接法将cIFN-γ表达盒插入到腺病毒基因组质粒pAdeno-X中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒基因组质粒pAd-cIFN-γ。pAd-cIFN-γ质粒经酶切线性化后转染人胚胎肾细胞HEK293T,在细胞中拯救出含有cIFN-γ基因的复制缺陷型重组腺病毒。然后用该重组腺病毒处理(感染)培养的犬肾细胞MDCK,再用犬细小病毒感染重组腺病毒处理的细胞,分析重组腺病毒在体外抗犬细小病毒的活性。【结果】通过连接法构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,构建的重组腺病毒能够介导cIFN-γ在MDCK细胞中进行分泌表达。用含cIFN-γ基因的重组腺病毒处理MDCK细胞,可明显地抑制犬细小病毒在细胞中的增殖,表明构建的重组腺病毒具有明显的抗犬细小病毒的活性。【结论】构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,并证明该重组病毒在体外具有明显的抗犬细小病毒的活性。
- 张考靳慧君仲飞李秀锦能昌爱陈慧慧李文艳温洁霞
- 关键词：干扰素-Γ腺病毒载体抗病毒活性犬细小病毒
- 慢病毒载体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在猪肺泡巨噬细胞中的表达
- 2012年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)E蛋白是病毒最小的囊膜蛋白,与其它囊膜糖蛋白(GP2a、GP3、GP4)以复合物的形式存在于囊膜中。研究认为E蛋白是一种粒子孔道蛋白,推测与病毒释放和致病过程有关。为研究E蛋白的致病作用,需将E蛋白基因转入猪肺泡巨噬细胞内并使其表达。为此本文利用慢病毒载体将PRRSV的E基因转入巨噬细胞。
- 陈慧慧仲飞李秀锦张考李文艳温洁霞
- 关键词：囊膜糖蛋白基因转入慢病毒载体病毒载体介导致病过程
