仲飞
- 作品数：123 被引量：263H指数：8
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 含第1内含子的猪生长激素cDNA基因的构建被引量：13
- 2000年
- 以 PCR方法扩增了猪生长激素 ( p GH)基因的第 1内含子 ,经测序表明 ,扩增的 p GH基因第 1内含子的序列与 Vize发表的序列存在 6个碱基的差异 ,同源性达 97.5%,说明 p GH基因第 1内含子具有多态性。此外 ,还发现此内含子存在有转录因子 ATF的结合位点。利用第 2外显子的 Hinf 位点 ,采用将 3个 DNA片段一步连接的方法 ,将扩增的第 1内含子插入到 p GHc DNA的正确位置上 ,从而构建出含第 1内含子的p GHc DNA。
- 仲飞刘维全孙丽翠张玉国刘朋朋齐顺章
- 关键词：猪生长激素基因CDNA病毒载体
- 重组猪β防御素-2在大肠杆菌中的融合表达及抑菌活性分析
- 猪β防御素-2(porcine beta-defensin-2,pBD-2)是猪体内重要的天然抗菌肽,具有广谱抗菌活性,在动物抗菌饲料添加剂中有潜在的应用前景。为在原核表达系统中制备重组猪β防御素-2,我们首先利用Tri...
- 张峰仲飞李秀锦李巍刘龙飞李凌李楠
- 文献传递
- 格尔德霉素体内抑制高致病性禽流感病毒H5N1增殖
- 2013年
- 为了评价Hsp90抑制剂——格尔德霉素体内抗流感病毒的效果,利用高致病性禽流感病毒H5N1鼠适应株感染小鼠,分析格尔德霉素对流感病毒H5N1感染小鼠的死亡保护率以及不同时相肺部病毒负载量的影响.本实验用乙醚麻醉小鼠,流感病毒H5N1滴鼻感染C57BL/6小鼠,于感染后2h腹腔注射格尔德霉素,观察小鼠死亡保护率、体重变化及Real-time PCR检测小鼠肺部病毒负载量.生存分析结果显示格尔德霉素治疗组(80%)与对照组(3%)及奥司他韦治疗组(53%)相比极显著(P<0.01)地延长了流感病毒感染小鼠存活率及存活时间,且平均体重丢失也少于对照组及奥司他韦治疗组;Real-time PCR分析显示格尔德霉素极显著(P<0.01)地抑制了流感病毒H5N1的复制,与奥司他韦治疗组无显著性差异(P>0.05).上述实验结果显示格尔德霉素对流感病毒H5N1感染的小鼠提供了很好的保护作用,且显著抑制了流感病毒H5N1的增殖,可能作为一种新的、高效的抗流感病毒备选药物.
- 刘朋朋胡奕赵宝华仲飞何宏轩
- 关键词：格尔德霉素
- 人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达
- 2012年
- 本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达。提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5'端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA。经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹(Western blot)法检测OVA表达水平。结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列(登录号NM_205152)一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确。经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高。结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件。
- 能昌爱李秀锦仲飞李振张峰陈慧慧张考韩冬梅
- 关键词：卵清蛋白重组蛋白表达
- GFP mRNA在树突状细胞中的转染及其影响因素分析被引量：7
- 2006年
- 目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)mRNA在树突状细胞(DC)中的转染及其影响因素。方法:选用gfp报告基因,在体外利用含T7RNA聚合酶的mMESSAGERNA转录试剂盒,合成含有帽子结构的GFPmRNA,通过酵母多聚A聚合酶加尾,制备结构完整的GFPmRNA。与此同时,从人的外周血液中分离单核细胞,并在体外经GM-CSF和IL-4刺激分化为DC。通过转染试剂介导将合成的GFPmRNA转染到DC内并使其表达。采用流式细胞术检测其转染效率和表达水平。结果:体外合成GFPmRNA,经转染试剂介导,实现了gfp基因在DC中的表达。不同的转染试剂、mRNA用量和细胞密度对mRNA的转染效率有较大的影响。采用Transmes-sengerTransfectionKit转染试剂,1μgGFPmRNA在200μLX-VIVO-15无血清培养基中的转染密度为2.5×109/L的DC,可获得较好的转染效果(转染效率达27%以上)。结论:在适当的条件下,通过mRNA转染DC可获得较高的转染效率。
- 仲飞仲振宇梁爽李秀锦
- 关键词：树突状细胞MRNAGFP基因转染
- 1,25(OH)2D3对猪伪狂犬病病毒诱导小鼠流产的影响
- 2020年
- 旨在探明1,25(OH)2D3对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)诱导小鼠流产的影响。采用颈背部皮下注射不同剂量PRV建立PRV诱导小鼠流产模型;通过实时荧光定量PCR检测不同剂量1,25(OH)2D3预处理组和生理盐水预处理组小鼠卵巢和子宫内VDR mRNA的水平及PRV量;利用组织学病理切片技术观察PRV引起的1,25(OH)2D3预处理组和生理盐水处理组小鼠子宫和卵巢的病理变化。结果显示,成功建立了小鼠流产模型,确定了引起小鼠流产的PRV最佳接种剂量为0.35 mL 1 000 TCID50 PRV;用300μg/kg 1,25(OH)2D3预处理,小鼠VDR表达水平最高,能有效抑制病毒的增殖,对PRV感染小鼠流产的抑制作用最强。组织病理学检查发现,相较于生理盐水预处理的PRV感染组,1,25(OH)2D3预处理组小鼠卵泡腔内颗粒细胞增多、红细胞量减少;子宫腔内红细胞数量减少或消失,子宫内膜皱褶增多。结果表明,1,25(OH)2D3能有效抑制PRV增殖,降低PRV诱导的小鼠流产。
- 左玉柱韩磊王晶袁广富张建楼范京惠仲飞
- 关键词：1,25(OH)2D3猪伪狂犬病病毒妊娠小鼠流产
- 狐狸生长激素基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 为制备重组狐狸生长激素(fGH),采用RT-PCR方法,从银狐垂体中扩增fGHcDNA基因,利用SnaBI和NotI位点将fGH基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽的下游,构建成fGH基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/fGH,载体经SalI酶切线性化后,通过电转移将线性化的pPIC9K/fGH转化到组氨酸缺陷型酵母宿主菌GS115中。然后利用不含氨基酸的以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选出高拷贝fGH基因的重组酵母,经摇瓶发酵培养和甲醇诱导使fGH进行分泌表达。结果表明本实验扩增的fGH基因序列与GenBank发表的序列基本一致,发酵液经SDS-PAGE和Western blotting检测证明构建的重组酵母能够分泌表达fGH,表达的fGH占发酵液总蛋白的34%,表达量达119mg/L发酵液。
- 李巍李秀锦仲飞靳慧君解民刘玉芝刘龙飞苏清洁
- 关键词：CDNA毕赤酵母分泌表达
- 白细胞介素-12对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用被引量：6
- 2012年
- 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平,本研究在小鼠体内尝试了利用白细胞介素12(IL-12)基因表达载体提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平。首先采用RT-PCR方法从小鼠脾淋巴细胞中分别扩增IL-12大亚基(P40)和小亚基(P35)cDNA基因;然后在真核表达载体pcDNA3.1A上通过引入内部核糖体进入位点(IRES)序列,分别将P40基因和P35基因插入到IRES序列的上下游,构建成IL-12(P40和P35双亚基)基因表达载体,pcDNA-P40-IRES-P35。将上述表达载体与本室构建的VP2表达载体通过磷酸钙方法转染HEK 293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达载体能否介导相应基因在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2载体单免疫和VP2载体和IL-12载体共免疫方法对小鼠进行免疫(用pcDNA3.1A作为对照)。免疫后在特定时间通过ELISA方法检测小鼠血清抗VP2蛋白的抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验检测免疫后35d小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果表明,扩增的小鼠IL-12P40和P35亚基基因与GenBank的参考序列基本一致。Western-blot检测结果表明,重组IL-12和VP2均能够在HEK293T细胞中进行分泌性表达。ELISA检测结果表明利用IL-2载体与VP2载体共免疫小鼠,其血清中抗VP2的抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P<0.01),抗体水平在第35天高达1:5120。淋巴细胞增殖试验结果表明,免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于对照组(P<0.01),VP2载体与IL2载体共免疫组的刺激指数明显高于VP2载体单免疫组(P<0.05)。由此可见,在小鼠体内,IL-12基因表达载体可明显提高CPV VP2基因疫苗的免疫应答水平。
- 潘素敏李秀锦仲飞柳新保韩冬梅王幸兴潘宏丽王微
- 关键词：IL-12细小病毒VP2基因DNA疫苗
- 基于膜受体阻断犬细小病毒感染的分子机制研究
- 仲飞李秀锦仲峰李文艳王微温洁霞潘素敏潘红丽李楠王幸兴韩冬梅王利月林洪羽张永红张建楼
- 基于细小病毒VP2蛋白与宿主细胞膜TfR特异结合并介导病毒感染的特性，利用宿主细胞的TfR细胞外区（也称可溶性的TfR，即sTfR）重组蛋白封闭细小病毒颗粒，从而达到阻止细小病毒感染宿主细胞的目的。在项目研究过程中，课题...
- 关键词：
- 关键词：细小病毒感染分子生物学
- 猪肺表面活性蛋白A基因表达载体的构建及其在HEK293细胞中的分泌表达
- ＜正＞动物肺泡表面含有4种表面活性蛋白（SP）:SP-A、SP-B、SP-C和SP-D,SP-B和SP-C具有降低肺泡表面液体张力的作用;而SP-A和SP-D则主要为模式识别分子,它们能够识别和结合多种病原微生物,是肺脏...
- 王幸兴仲飞李秀锦潘素敏潘红丽韩冬梅
- 文献传递
