王寅彪
- 作品数：16 被引量：75H指数：4
- 供职机构：河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家生猪现代产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测被引量：2
- 2013年
- 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性。
- 刘畅卢清侠杨继飞王世红王寅彪郭官鹏邓瑞广张改平
- 关键词：A型口蹄疫病毒VP1蛋白蛋白纯化活性鉴定
- 一种猪伪狂犬病毒强毒株和疫苗毒株鉴别检测试纸
- 本发明涉及一种家畜疫病感染与免疫的鉴别检测器具，特别是涉及一种猪伪狂犬病毒强毒和疫苗毒鉴别检测试纸，由支撑板，样品垫，金标垫，检测膜和吸水垫构成，检测膜上含有强毒检测线T1“│”，疫苗毒检测线T2“│”和质控线C“│”印...
- 乔松林杨继飞李青梅郭军庆邢广旭柴书军万博解伟涛王寅彪刘肖邓瑞广张改平
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒非结构蛋白nsp1α的表达及活性检测被引量：3
- 2015年
- 为获得具有活性的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白1α(nsp1α),以BJ-4PRRSV nsp1α真核表达质粒pc DNA3.1-nsp1α为模板扩增nsp1α,克隆到原核表达载体p ET-28a,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)。SDS–PAGE结果显示,nsp1α以包涵体形式高效表达,重组蛋白大小约为20 ku;Western blot结果显示,表达的重组蛋白能与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体蛋白复性后,ELISA方法检测结果显示,重组蛋白能与1∶6 400稀释的PRRSV阳性血清反应。表明成功表达了nsp1α蛋白,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。
- 司朝朝史西保李恭贺乔松林王丽李青梅王超陈静王寅彪张改平
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒重组蛋白免疫学活性
- 猪圆环病毒2型重组Cap蛋白体外稳定性研究
- 2015年
- 为筛选猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白在体外的稳定性条件,采用建立的PCV2双抗夹心ELISA方法,对Cap蛋白在不同贮藏条件下的抗原活性进行了检测。结果表明,Cap蛋白在25℃以下贮存时,其活性保持稳定;贮存时温度变化对蛋白质稳定性影响较大;在甘氨酸和甘油2种蛋白保护剂存在条件下,蛋白质活性稳定性增强。表明,Cap蛋白的体外贮存、改造及病毒样颗粒组装应在25℃以下进行,尽量避免温度剧烈变化,同时添加蛋白质保护剂有利于蛋白质的体外稳定。
- 刘肖金前跃郭军庆王寅彪张腾李鹏陈丽颖张改平
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白稳定性
- 2013年河南省猪伪狂犬野毒感染血清学调查被引量：40
- 2014年
- 伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性率31.3%,猪场阳性率83.6%。种猪群带毒率高,育肥阶段伪狂犬病毒感染情况尤其严重。但一些生产管理较好的规模化猪场通过采取强化免疫,不断补入阴性后备种猪,加强生物安全等综合措施,成功防控了伪狂犬疫情。本研究对于了解当前河南省伪狂犬疫情,制订正确的防控策略提供了依据。
- 解伟涛乔松林王寅彪郝慧芳梁跃张桂悦郭成留张改平
- 关键词：伪狂犬病毒血清学调查
- 传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定被引量：8
- 2011年
- 为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份。应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性。结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1∶105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合。本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础。
- 宋幸辉王睿王选年鲍登克杨苏珍卢清侠王寅彪赵东张改平
- 关键词：IBDVVP2蛋白抗原表位免疫
- 一种猪伪狂犬病毒强毒株和疫苗毒株鉴别检测试纸
- 本发明涉及一种家畜疫病感染与免疫的鉴别检测器具，特别是涉及一种猪伪狂犬病毒强毒和疫苗毒鉴别检测试纸，由支撑板，样品垫，金标垫，检测膜和吸水垫构成，检测膜上含有强毒检测线T1“│”，疫苗毒检测线T2“│”和质控线C“│”印...
- 乔松林杨继飞李青梅郭军庆邢广旭柴书军万博解伟涛王寅彪刘肖邓瑞广张改平
- 文献传递
- 猪伪狂犬病病毒变异毒株gE和gB蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2019年
- 为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)疫苗免疫抗体与病毒感染抗体鉴别诊断方法,分别以PRV变异毒株的gE或gB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选所需单克隆抗体,获得6株抗PRV gE蛋白的单抗(3E6、7E1、7C5、10C3、15C1、14C1)和6株抗PRV gB蛋白的单抗(1C1、5D2、2F11、5G8、10C7、8H5)。IPMA检测结果显示,gE蛋白单抗能识别PRV变异毒株,但不识别疫苗株;而gB蛋白单抗可同时识别PRV变异毒株和疫苗株。gE单抗10C3和gB单抗10C7的ELISA效价和IPMA效价均分别达1∶5×10^5.0和1∶8×10^3.0以上。所筛选出的单抗均不与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、流行性乙型脑炎病毒(JEV)等其他常见病毒发生交叉反应。gE蛋白和gB蛋白的表达及单抗的制备为PRV感染抗体与疫苗免疫抗体鉴别诊断(DIVA)试纸的研发奠定基础。
- 李艳华王寅彪王寅彪李青梅郭成留郭成留邓瑞广郭军庆
- 关键词：猪伪狂犬病病毒单克隆抗体
- 氨苄青霉素单克隆抗体及其与青霉素类抗生素交叉反应性
- 2011年
- 以戊二醛法将氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)偶联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA),合成免疫抗原BSA-Amp和检测抗原OVA-Amp,并进行了鉴定;用BSA-Amp免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术建立了4株分泌抗Amp单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA和竞争ELISA结果显示,单克隆抗体1G7、2A11、2D10和3F6的腹水抗体效价分别为1∶2.56×107、1∶1.28×107、1∶5.12×106和1∶5.12×106,Amp的半数抑制浓度(IC50)分别为10.22,3.58,4.03,4.95 ng/mL。Amp单克隆抗体与羧苄青霉素(1G7、2A11、2D10和3F6)、青霉素G(1G7和3F6)、阿莫西林(1G7)等青霉素类抗生素存在显著的交叉反应,而与双氯霉素和邻氯霉素未见明显交叉反应。
- 李青梅刘庆堂王寅彪柴书军王自良郭军庆职爱民孟红丽张改平
- 关键词：氨苄青霉素单克隆抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2012年
- 为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)的单克隆抗体,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)GP5重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞和NS0浆细胞瘤细胞进行融合,经间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆化获得3株能稳定分泌抗PRRSV GP5蛋白单克隆抗体的(mAb)杂交瘤细胞株,命名为4B7、2C5和2E4。间接免疫荧光(IFA)和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)结果显示,3株mAb均与感染PRRSV BJ 4株的Marc 145细胞特异性反应,表明其可识别天然病毒蛋白。mAb的Ig亚类均为IgG1,细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1∶256和1∶51 200,Western blot分析表明,mAb均特异性识别PRRSV GP5蛋白。
- 王志红张改平郭军庆李青梅王寅彪陈稳王爱萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体
